環(huán)境中的內分泌干擾物（EDCs）能模擬體內激素，破壞人類和其他動物的正常內分泌功能。EDCs能影響神經內分泌系統(tǒng)的生殖調控，這種調控機制涉及下丘腦-垂體-性腺（HPG）這條生殖軸線的各個層面。HPG軸主要是由促性腺激素釋放激素、促性腺激素和性類固醇激素三種激素調節(jié)的。稀有鮈鯽被廣泛用于水生毒理學的研究，是研究EDCs的一種理想模式魚類。本研究首先克隆并使用三種計算方法篩選了研究稀有鮈鯽mRNA表達所需的內參基因；其次采用實時定量PCR（qRT-PCR）方法檢測了經BPA/EE2暴露之后，稀有鮈鯽HPG軸上與編碼和調控上述激素相關的12個基因在腦中和性腺中的表達情況。除此之外，還采用了高通量測序技術分析了EE2暴露之后稀有鮈鯽腦組織基因轉錄組特征。本研究主要包括以下結果：（1）在稀有鮈鯽中克隆得到了5個常用的看家基因：轉錄延長因子（ef1a）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶基因（gapdh）、6-磷酸葡萄糖脫氫酶基因（g6pd）、TATA-box結合蛋白基因（tbp）和α微管蛋白基因（tuba1）。利用qRT-PCR的方法檢測了稀有鮈鯽早期發(fā)育階段全魚組織（18-50dpf）、經EDCs暴露之后... 

【文章來源】：西北農林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：183 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 前言
    1.2 下丘腦-垂體-性腺軸研究進展
        1.2.1 促性腺激素釋放激素及其受體研究進展
        1.2.2 促性腺激素及其受體研究進展
        1.2.3 性類固醇激素及其受體研究進展
    1.3 內分泌干擾物（EDCs）對 HPG 軸相關基因的影響
        1.3.1 激素與環(huán)境激素
        1.3.2 內分泌干擾物危害
        1.3.3 內分泌干擾物與 HPG 軸關系
        1.3.4 受試化合物的選擇
    1.4 實時定量 PCR
        1.4.1 傳統(tǒng)內參基因
        1.4.2 內參基因表達穩(wěn)定性的評價
    1.5 Illumina 測序技術在魚類研究中的應用
        1.5.1 Illumina/Solexa 測序技術
        1.5.2 轉錄組測序的用途及在硬骨魚類研究上的應用
    1.6 實驗材料的選擇
        1.6.1 魚類在內分泌干擾實驗中的研究應用
        1.6.2 稀有鮈鯽作為內分泌干擾實驗材料的優(yōu)點
    1.7 選題的目的和意義
第二章 稀有鮈鯽內參基因篩選
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 試驗方法
        2.2.3 數據分析
    2.3 結果
        2.3.1 稀有鮈鯽內參基因的克隆和實時定量引物檢測
        2.3.2 內參基因穩(wěn)定性分析
        2.3.3 cyp19a1b 基因表達的 qRT-PCR 分析
    2.4 討論
    2.5 小結
第三章 稀有鮈鯽促性腺激素釋放激素、促性腺激素及其受體的基因克隆和組織表達
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 試驗方法
        3.2.3 生物信息學分析及數據分析
    3.3 結果
        3.3.1 總 RNA 的檢測
        3.3.2 稀有鮈鯽 GnRH2、GnRH3、GnRHR1A、GnRHR1B、FSHβ、LHβ、FSHR和 LHR 基因全長 cDNA 分子克隆
        3.3.3 稀有鮈鯽 GnRH2、GnRH3、GnRHR1A、GnRHR1B、FSHβ、LHβ、FSHR和 LHR 序列特征分析
        3.3.4 稀有鮈鯽 GnRHs、GnRHRs、GtHβs 和 GtHRs 氨基酸序列相似性分析
        3.3.5 稀有鮈鯽 GnRHs 和 GnRHR1s 基因系統(tǒng)發(fā)育分析
        3.3.6 GnRH2、GnRH3、GnRHR1A、GnRHR1B、FSHβ、LHβ、FSHR 和 LHR 的組織表達分析
    3.4 討論
        3.4.1 GnRH 基因的結構與功能
        3.4.2 GnRHR 基因的結構與功能
        3.4.3 GtH 基因的結構與功能
        3.4.4 GtHR 基因的結構與功能
    3.5 小結
第四章 雙酚 A 對稀有鮈鯽 GnRH 系統(tǒng)和 GtH 系統(tǒng)基因表達的影響
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 試驗方法
        4.2.3 統(tǒng)計學分析及啟動子區(qū)分析
    4.3 結果
        4.3.1 性腺組織學
        4.3.2 總 RNA 的提取與檢測
        4.3.3 BPA 對 cyp19a1a、GnRH2、GnRH3、GnRHR1A、GnRHR1B、FSHβ、LHβ、FSHR 和 LHR 基因表達模式的影響
        4.3.4 GnRH2、GnRH3、FSHβ、LHβ 5’端調控序列的分子克隆及分析
    4.4 討論
        4.4.1 BPA 暴露對稀有鯽性腺的影響
        4.4.2 BPA 暴露對稀有鮈鯽 GnRH 系統(tǒng)和 GtH 系統(tǒng)的影響
        4.4.3 5’端轉錄元件與 GnRH 表達的關系
    4.5 小結
第五章 17α-乙炔雌二醇對稀有鮈鯽 GtH 系統(tǒng)基因表達的影響
    5.1 引言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 實驗材料
        5.2.2 試驗方法
        5.2.3 數據分析
    5.3 結果
        5.3.1 總 RNA 的檢測
        5.3.2 EE2 對腦中雌激素受體和促性腺激素β亞基基因表達的影響
        5.3.3 EE2 對性腺中 cyp19a1a 和促性腺激素受體基因表達的影響
        5.3.4 EE2 暴露后目的基因相關性分析
    5.4 討論
        5.4.1 EDCs 處理對腦中 FSHβ、LHβ和雌激素受體基因表達的影響
        5.4.2 EDCs 暴露對稀有鮈鯽性腺中 cyp19a1a、FSHR 和 LHR 基因表達的影響
        5.4.3 5’端轉錄元件與 GtHβ表達的關系
    5.5 小結
第六章 高通量測序技術分析 EE2 對稀有鮈鯽腦組織轉錄組的影響
    6.1 引言
    6.2 材料與方法
        6.2.1 實驗材料
        6.2.2 試驗方法
        6.2.3 數據分析
    6.3 結果
        6.3.1 總 RNA 的檢測
        6.3.2 腦組織基因表達譜高通量測序數據
        6.3.3 高通量測序序列分布規(guī)律
        6.3.4 高通量測序序列映射比對分析
        6.3.5 稀有鮈鯽腦組織差異表達基因篩選
        6.3.6 EE2 誘導下腦組織差異基因 GO 富集分析
        6.3.7 EE2 誘導下腦組織通路顯著性富集分析
        6.3.8 稀有鮈鯽腦中 DGE 測序結果可靠性驗證
    6.4 討論
        6.4.1 腦組織基因表達譜構建
        6.4.2 腦組織基因表達譜高通量測序數據
        6.4.3 EE2 誘導對稀有鮈鯽腦組織中生殖調控相關基因的影響
        6.4.4 EE2 暴露對稀有鮈鯽腦組織氧化磷酸化通路的影響
        6.4.5 EE2 暴露對稀有鮈鯽腦組織核糖體信號通路的影響
        6.4.6 EE2 暴露對稀有鮈鯽腦組織總代謝通路的影響
        6.4.7 EE2 暴露影響的能量代謝腦中 GnRH 神經元的影響
        6.4.8 EE2 暴露對稀有鮈鯽腦組織性別差異
    6.5 小結
結論、創(chuàng)新點與展望
    結論
    創(chuàng)新點
    展望
參考文獻
附錄
縮略詞
附表
附圖
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3469264