發(fā)布時間：2021-10-22 12:37

　　維甲酸X受體是核受體超家族的一員,作為配體依賴型轉(zhuǎn)錄因子在生物個體發(fā)育、細胞分化、新陳代謝和細胞凋亡中發(fā)揮重要作用。新近的研究表明,有機錫化合物（如TBT、TPT）導致的腹足類性畸變與RXR密切相關(guān)。論文以課題組前期研究克隆的雜色鮑RXR基因序列為基礎(chǔ),構(gòu)建了雜色鮑RXR轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng),篩選了雜色鮑RXR天然配體和環(huán)境配體,并比較了這些化合物對雜色鮑和斑馬魚RXR轉(zhuǎn)錄活性影響的差異。研究結(jié)果如下:1)論文克隆了雜色鮑RXR的編碼區(qū)并重組至超表達載體pcDNA3.1（+）,構(gòu)建了重組超表達載體pcDNA3.1（+）-HdRXR。同時在報告基因pGL3-promoter啟動子區(qū)重組維甲酸X反應元件（RXRE）,構(gòu)建了重組報告基因載體pGL3-promoter-RXRE。應用質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染技術(shù)將重組表達載體pcDNA3.1（+）-HdRXR和重組報告基因載體pGL3-promoter-RXRE共轉(zhuǎn)染至293FT細胞,構(gòu)建了雜色鮑RXR轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)。2)采用上述構(gòu)建的雜色鮑RXR轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng),對雜色鮑RXR的天然配體和環(huán)境配體進行了篩選。結(jié)果顯示,9cRA、TBT和TPT分別在濃度為1×10

【文章來源】：集美大學福建省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號表
第1章 引言
    1.1 維甲酸X受體概述
    1.2 維甲酸X受體的天然和環(huán)境配體
    1.3 轉(zhuǎn)錄激活實驗
        1.3.1 轉(zhuǎn)錄激活實驗構(gòu)建方法
        1.3.2 報告基因的選擇
        1.3.3 宿主細胞的選擇
    1.4 轉(zhuǎn)錄激活實驗在環(huán)境內(nèi)分泌干擾物監(jiān)測中的應用
    1.5 轉(zhuǎn)錄激活實驗在維甲酸X受體干擾物監(jiān)測中的應用
    1.6 主要研究內(nèi)容和技術(shù)路線
        1.6.1 研究內(nèi)容
        1.6.2 研究技術(shù)路線
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實驗對象
        2.1.2 實驗用細胞株和菌株
        2.1.3 質(zhì)粒
        2.1.4 試劑盒以及主要試劑
        2.1.5 儀器
        2.1.6 引物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 重組表達載體pcDNA3.1-HdRXR的構(gòu)建
        2.2.2 重組表達載體pcDNA3.1-DrRXR的構(gòu)建
        2.2.3 重組報告基因質(zhì)粒pGL3-promoter-RXRE的構(gòu)建
        2.2.4 去內(nèi)毒素大量抽提質(zhì)粒
        2.2.5 293FT細胞的培養(yǎng)
        2.2.6 細胞毒性實驗
        2.2.7 報告基因?qū)嶒?br>        2.2.8 數(shù)據(jù)處理
第3章 實驗結(jié)果
    3.1 總RNA提取結(jié)果
        3.1.1 雜色鮑總RNA提取結(jié)果
        3.1.2 斑馬魚總RNA提取結(jié)果
    3.2 RXR開放閱讀框（ORF）擴增結(jié)果
        3.2.1 雜色鮑RXR（HdRXR）開放閱讀框（ORF）擴增
        3.2.2 斑馬魚RXR（DrRXR）開放閱讀框（ORF）擴增
    3.3 重組質(zhì)粒pcDNA3.1-HdRXR的鑒定
        3.3.1 pcDNA3.1-HdRXR質(zhì)粒圖
        3.3.2 pcDNA3.1-HdRXR菌體PCR檢測
        3.3.3 pcDNA3.1-HdRXR酶切檢測
        3.3.4 pcDNA3.1-HdRXR插入片段測序鑒定
    3.4 重組質(zhì)粒pcDNA3.1-DrRXR的鑒定
        3.4.1 pcDNA3.1-DrRXR質(zhì)粒圖
        3.4.2 pcDNA3.1-DrRXR菌體PCR檢測
        3.4.3 pcDNA3.1-DrRXR酶切檢測
        3.4.4 pcDNA3.1-DrRXR插入片段測序鑒定
    3.5 重組質(zhì)粒pGL3-promoter-RXRE的鑒定
    3.6 雜色鮑RXR配體的篩選
    3.7 斑馬魚RXR配體的篩選
    3.8 不同化合物與雜色鮑和斑馬魚RXR結(jié)合的差異
第4章 討論
    4.1 雜色鮑RXR轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)的構(gòu)建
        4.1.1 宿主細胞的選擇
        4.1.2 內(nèi)參報告基因的選擇
    4.2 雜色鮑RXR的可能配體
    4.3 RXR與化合物的結(jié)合具有種屬特異性
第5章 結(jié)論與展望
致謝
參考文獻
在學期間發(fā)表的學術(shù)論文及研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3451111