維甲酸X受體是核受體超家族的一員,作為配體依賴型轉(zhuǎn)錄因子在生物個體發(fā)育、細胞分化、新陳代謝和細胞凋亡中發(fā)揮重要作用。新近的研究表明,有機錫化合物（如TBT、TPT）導(dǎo)致的腹足類性畸變與RXR密切相關(guān)。論文以課題組前期研究克隆的雜色鮑RXR基因序列為基礎(chǔ),構(gòu)建了雜色鮑RXR轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng),篩選了雜色鮑RXR天然配體和環(huán)境配體,并比較了這些化合物對雜色鮑和斑馬魚RXR轉(zhuǎn)錄活性影響的差異。研究結(jié)果如下:1)論文克隆了雜色鮑RXR的編碼區(qū)并重組至超表達載體pcDNA3.1（+）,構(gòu)建了重組超表達載體pcDNA3.1（+）-HdRXR。同時在報告基因pGL3-promoter啟動子區(qū)重組維甲酸X反應(yīng)元件（RXRE）,構(gòu)建了重組報告基因載體pGL3-promoter-RXRE。應(yīng)用質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染技術(shù)將重組表達載體pcDNA3.1（+）-HdRXR和重組報告基因載體pGL3-promoter-RXRE共轉(zhuǎn)染至293FT細胞,構(gòu)建了雜色鮑RXR轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)。2)采用上述構(gòu)建的雜色鮑RXR轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng),對雜色鮑RXR的天然配體和環(huán)境配體進行了篩選。結(jié)果顯示,9cRA、TBT和TPT分別在濃度為1×10

【文章來源】：集美大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號表
第1章 引言
    1.1 維甲酸X受體概述
    1.2 維甲酸X受體的天然和環(huán)境配體
    1.3 轉(zhuǎn)錄激活實驗
        1.3.1 轉(zhuǎn)錄激活實驗構(gòu)建方法
        1.3.2 報告基因的選擇
        1.3.3 宿主細胞的選擇
    1.4 轉(zhuǎn)錄激活實驗在環(huán)境內(nèi)分泌干擾物監(jiān)測中的應(yīng)用
    1.5 轉(zhuǎn)錄激活實驗在維甲酸X受體干擾物監(jiān)測中的應(yīng)用
    1.6 主要研究內(nèi)容和技術(shù)路線
        1.6.1 研究內(nèi)容
        1.6.2 研究技術(shù)路線
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實驗對象
        2.1.2 實驗用細胞株和菌株
        2.1.3 質(zhì)粒
        2.1.4 試劑盒以及主要試劑
        2.1.5 儀器
        2.1.6 引物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 重組表達載體pcDNA3.1-HdRXR的構(gòu)建
        2.2.2 重組表達載體pcDNA3.1-DrRXR的構(gòu)建
        2.2.3 重組報告基因質(zhì)粒pGL3-promoter-RXRE的構(gòu)建
        2.2.4 去內(nèi)毒素大量抽提質(zhì)粒
        2.2.5 293FT細胞的培養(yǎng)
        2.2.6 細胞毒性實驗
        2.2.7 報告基因?qū)嶒?br>        2.2.8 數(shù)據(jù)處理
第3章 實驗結(jié)果
    3.1 總RNA提取結(jié)果
        3.1.1 雜色鮑總RNA提取結(jié)果
        3.1.2 斑馬魚總RNA提取結(jié)果
    3.2 RXR開放閱讀框（ORF）擴增結(jié)果
        3.2.1 雜色鮑RXR（HdRXR）開放閱讀框（ORF）擴增
        3.2.2 斑馬魚RXR（DrRXR）開放閱讀框（ORF）擴增
    3.3 重組質(zhì)粒pcDNA3.1-HdRXR的鑒定
        3.3.1 pcDNA3.1-HdRXR質(zhì)粒圖
        3.3.2 pcDNA3.1-HdRXR菌體PCR檢測
        3.3.3 pcDNA3.1-HdRXR酶切檢測
        3.3.4 pcDNA3.1-HdRXR插入片段測序鑒定
    3.4 重組質(zhì)粒pcDNA3.1-DrRXR的鑒定
        3.4.1 pcDNA3.1-DrRXR質(zhì)粒圖
        3.4.2 pcDNA3.1-DrRXR菌體PCR檢測
        3.4.3 pcDNA3.1-DrRXR酶切檢測
        3.4.4 pcDNA3.1-DrRXR插入片段測序鑒定
    3.5 重組質(zhì)粒pGL3-promoter-RXRE的鑒定
    3.6 雜色鮑RXR配體的篩選
    3.7 斑馬魚RXR配體的篩選
    3.8 不同化合物與雜色鮑和斑馬魚RXR結(jié)合的差異
第4章 討論
    4.1 雜色鮑RXR轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)的構(gòu)建
        4.1.1 宿主細胞的選擇
        4.1.2 內(nèi)參報告基因的選擇
    4.2 雜色鮑RXR的可能配體
    4.3 RXR與化合物的結(jié)合具有種屬特異性
第5章 結(jié)論與展望
致謝
參考文獻
在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Retinoid X receptor activities of source waters in China and their removal efficiencies during drinking water treatment processes[J]. SATYANARAYANAN Senthil Kumaran.  Chinese Science Bulletin. 2012(06)
[2]有機錫通過核受體干擾內(nèi)分泌的研究進展[J]. 張紀亮,朱文文,熊建利,孫平.  環(huán)境科學(xué)導(dǎo)刊. 2011(05)
[3]污水處理廠出水維甲酸X受體干擾效應(yīng)研究[J]. 李劍,孔東東,王子健,馬梅.  北京理工大學(xué)學(xué)報. 2011(02)
[4]Screening of agonistic activities against four nuclear receptors in wastewater treatment plants in Japan using a yeast two-hybrid assay[J]. Daisuke Inoue,Koki Nakama,Kazuko Sawada,Taro Watanabe,Hisae Matsui,Kazunari Sei,Tsuyoshi Nakanishi,Michihiko Ike.  Journal of Environmental Sciences. 2011(01)
[5]利用報告基因試驗檢測飲用水源水的內(nèi)分泌干擾活性[J]. 王曉祎,張哲海,胡偉,孫宏,王心如,于紅霞.  生態(tài)毒理學(xué)報. 2009(05)
[6]酵母雙雜交技術(shù)構(gòu)建重組維甲酸X受體（RXR）基因酵母[J]. 李劍,饒凱鋒,馬梅,王子健.  科學(xué)通報. 2008(17)
[7]基于報告基因的雌激素受體β亞型激動劑細胞篩選模型的建立[J]. 陳立敏,呂秋軍,Satoshi Inoue,卞廣興,陳振花,溫利青.  藥學(xué)學(xué)報. 2006(08)
[8]重組酵母細胞快速篩選環(huán)境雌激素系統(tǒng)的建立[J]. 李湘鳴,羅方妮,陳春波.  環(huán)境與健康雜志. 2006(02)

博士論文
[1]環(huán)境內(nèi)分泌干擾物重組酵母檢測系統(tǒng)的建立[D]. 鄭怡文.第二軍醫(yī)大學(xué) 2004



本文編號：3451111