發(fā)布時間：2021-10-22 12:37

　　維甲酸X受體是核受體超家族的一員,作為配體依賴型轉錄因子在生物個體發(fā)育、細胞分化、新陳代謝和細胞凋亡中發(fā)揮重要作用。新近的研究表明,有機錫化合物（如TBT、TPT）導致的腹足類性畸變與RXR密切相關。論文以課題組前期研究克隆的雜色鮑RXR基因序列為基礎,構建了雜色鮑RXR轉錄激活系統(tǒng),篩選了雜色鮑RXR天然配體和環(huán)境配體,并比較了這些化合物對雜色鮑和斑馬魚RXR轉錄活性影響的差異。研究結果如下:1)論文克隆了雜色鮑RXR的編碼區(qū)并重組至超表達載體pcDNA3.1（+）,構建了重組超表達載體pcDNA3.1（+）-HdRXR。同時在報告基因pGL3-promoter啟動子區(qū)重組維甲酸X反應元件（RXRE）,構建了重組報告基因載體pGL3-promoter-RXRE。應用質粒共轉染技術將重組表達載體pcDNA3.1（+）-HdRXR和重組報告基因載體pGL3-promoter-RXRE共轉染至293FT細胞,構建了雜色鮑RXR轉錄激活系統(tǒng)。2)采用上述構建的雜色鮑RXR轉錄激活系統(tǒng),對雜色鮑RXR的天然配體和環(huán)境配體進行了篩選。結果顯示,9cRA、TBT和TPT分別在濃度為1×10

【文章來源】：集美大學福建省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號表
第1章 引言
    1.1 維甲酸X受體概述
    1.2 維甲酸X受體的天然和環(huán)境配體
    1.3 轉錄激活實驗
        1.3.1 轉錄激活實驗構建方法
        1.3.2 報告基因的選擇
        1.3.3 宿主細胞的選擇
    1.4 轉錄激活實驗在環(huán)境內分泌干擾物監(jiān)測中的應用
    1.5 轉錄激活實驗在維甲酸X受體干擾物監(jiān)測中的應用
    1.6 主要研究內容和技術路線
        1.6.1 研究內容
        1.6.2 研究技術路線
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實驗對象
        2.1.2 實驗用細胞株和菌株
        2.1.3 質粒
        2.1.4 試劑盒以及主要試劑
        2.1.5 儀器
        2.1.6 引物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 重組表達載體pcDNA3.1-HdRXR的構建
        2.2.2 重組表達載體pcDNA3.1-DrRXR的構建
        2.2.3 重組報告基因質粒pGL3-promoter-RXRE的構建
        2.2.4 去內毒素大量抽提質粒
        2.2.5 293FT細胞的培養(yǎng)
        2.2.6 細胞毒性實驗
        2.2.7 報告基因實驗
        2.2.8 數(shù)據(jù)處理
第3章 實驗結果
    3.1 總RNA提取結果
        3.1.1 雜色鮑總RNA提取結果
        3.1.2 斑馬魚總RNA提取結果
    3.2 RXR開放閱讀框（ORF）擴增結果
        3.2.1 雜色鮑RXR（HdRXR）開放閱讀框（ORF）擴增
        3.2.2 斑馬魚RXR（DrRXR）開放閱讀框（ORF）擴增
    3.3 重組質粒pcDNA3.1-HdRXR的鑒定
        3.3.1 pcDNA3.1-HdRXR質粒圖
        3.3.2 pcDNA3.1-HdRXR菌體PCR檢測
        3.3.3 pcDNA3.1-HdRXR酶切檢測
        3.3.4 pcDNA3.1-HdRXR插入片段測序鑒定
    3.4 重組質粒pcDNA3.1-DrRXR的鑒定
        3.4.1 pcDNA3.1-DrRXR質粒圖
        3.4.2 pcDNA3.1-DrRXR菌體PCR檢測
        3.4.3 pcDNA3.1-DrRXR酶切檢測
        3.4.4 pcDNA3.1-DrRXR插入片段測序鑒定
    3.5 重組質粒pGL3-promoter-RXRE的鑒定
    3.6 雜色鮑RXR配體的篩選
    3.7 斑馬魚RXR配體的篩選
    3.8 不同化合物與雜色鮑和斑馬魚RXR結合的差異
第4章 討論
    4.1 雜色鮑RXR轉錄激活系統(tǒng)的構建
        4.1.1 宿主細胞的選擇
        4.1.2 內參報告基因的選擇
    4.2 雜色鮑RXR的可能配體
    4.3 RXR與化合物的結合具有種屬特異性
第5章 結論與展望
致謝
參考文獻
在學期間發(fā)表的學術論文及研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Retinoid X receptor activities of source waters in China and their removal efficiencies during drinking water treatment processes[J]. SATYANARAYANAN Senthil Kumaran.  Chinese Science Bulletin. 2012(06)
[2]有機錫通過核受體干擾內分泌的研究進展[J]. 張紀亮,朱文文,熊建利,孫平.  環(huán)境科學導刊. 2011(05)
[3]污水處理廠出水維甲酸X受體干擾效應研究[J]. 李劍,孔東東,王子健,馬梅.  北京理工大學學報. 2011(02)
[4]Screening of agonistic activities against four nuclear receptors in wastewater treatment plants in Japan using a yeast two-hybrid assay[J]. Daisuke Inoue,Koki Nakama,Kazuko Sawada,Taro Watanabe,Hisae Matsui,Kazunari Sei,Tsuyoshi Nakanishi,Michihiko Ike.  Journal of Environmental Sciences. 2011(01)
[5]利用報告基因試驗檢測飲用水源水的內分泌干擾活性[J]. 王曉祎,張哲海,胡偉,孫宏,王心如,于紅霞.  生態(tài)毒理學報. 2009(05)
[6]酵母雙雜交技術構建重組維甲酸X受體（RXR）基因酵母[J]. 李劍,饒凱鋒,馬梅,王子健.  科學通報. 2008(17)
[7]基于報告基因的雌激素受體β亞型激動劑細胞篩選模型的建立[J]. 陳立敏,呂秋軍,Satoshi Inoue,卞廣興,陳振花,溫利青.  藥學學報. 2006(08)
[8]重組酵母細胞快速篩選環(huán)境雌激素系統(tǒng)的建立[J]. 李湘鳴,羅方妮,陳春波.  環(huán)境與健康雜志. 2006(02)

博士論文
[1]環(huán)境內分泌干擾物重組酵母檢測系統(tǒng)的建立[D]. 鄭怡文.第二軍醫(yī)大學 2004



本文編號：3451111