SVCV G蛋白與宿主蛋白14-3-3β/α-A相互作用的研究
發(fā)布時間：2021-10-22 11:32
鯉春病毒血癥病毒（Spring Viraemia of Carp Virus,SVCV）屬于彈狀病毒科鯉春病毒屬,是一種嚴(yán)重危害鯉養(yǎng)殖安全的傳染性病原,感染魚后能引起典型的鯉春病毒血癥（Spring Viraemia of Carp,SVC）。該病在歐洲、亞洲和北美洲的鯉養(yǎng)殖區(qū)是較為常見的流行性疾病,雖然該疾病在我國還未檢測到大規(guī)模暴發(fā),但作為鯉養(yǎng)殖大國,該病對我國的鯉養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)構(gòu)成潛在的巨大威脅。SVCV感染能引起魚體體表出血、腹水和泄殖孔發(fā)炎等癥狀,嚴(yán)重者導(dǎo)至死亡。目前,SVCV的致病機(jī)理和入侵機(jī)制尚不清楚。SVCV結(jié)構(gòu)蛋白糖蛋白（Glycoprotein,G）位于病毒囊膜上,在病毒入侵細(xì)胞時的內(nèi)吞過程中發(fā)揮作用,該蛋白可以決定病毒的血清型。研究表明,SVCV蛋白與宿主蛋白的相互作用對病毒的免疫逃逸和復(fù)制產(chǎn)生重要影響。因此,研究SVCV G蛋白與宿主蛋白的相互作用對揭示該病毒的入侵與致病機(jī)理、抗病毒藥物和預(yù)防疫苗的開發(fā)具有重要的科學(xué)意義。首先,利用串聯(lián)親和純化（Tandem Affinity Purification,TAP）與質(zhì)譜分析相結(jié)合的方法,在FHM細(xì)胞中篩選出可能與SVCV...
【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：69 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
多種蛋白與蛋白相互作用分析技術(shù)的應(yīng)用范圍(Syafrizayantietal2014)
1.5.1.2 酵母雙雜交系統(tǒng)Y2H 是一種靈敏的體內(nèi) PPIs 的基因檢測方法，基于重組的功能性轉(zhuǎn)錄因子能啟動酵母細(xì)胞核內(nèi)的指示基因轉(zhuǎn)錄(Fieldsetal1989)。Y2H 最初是在 20 世紀(jì) 80 年代中期使用酵母 GAL4 轉(zhuǎn)錄因子引入的。為了分析，使用兩種表達(dá)質(zhì)粒并將其轉(zhuǎn)化到酵母菌株中，該酵母菌株在 GAL4 應(yīng)答元件的控制下攜帶 lacZ 報道基因。一個質(zhì)粒產(chǎn)生具有 GAL4 結(jié)合結(jié)構(gòu)域的融合基因，命名為誘餌；在另一個質(zhì)粒中，蛋白質(zhì)與 GAL4激活結(jié)構(gòu)域融合，命名為獵物�？梢酝ㄟ^ lacZ 基因產(chǎn)物 β-半乳糖苷酶的活性進(jìn)行檢測來證明誘餌和獵物之間的相互作用。使用兩種質(zhì)粒類型的文庫可以檢測到每種可能的相互作用。其他 Y2H 系統(tǒng)原理和上面相同，只是利用其他酵母菌株開發(fā)報告基圖 1-3 親和純化示意圖 (Syafrizayanti et al 2014)Fig. 1-3 The Scheme ofAffinity purification (Syafrizayanti et al 2014)
SVCV G 蛋白與宿主蛋白 14-3-3β/α-A 相互作用的研究誘餌系統(tǒng)(Caufield et al 2012)。此外，還建立了新的 Y2H 系統(tǒng)來研究膜 PPIs (Snideretal2013)。不幸的是，所有的 Y2H 系統(tǒng)都容易產(chǎn)生誤報和漏報。有關(guān)假陽性率的估計高達(dá) 70%(Deaneetal 2002)。盡管如此，Y2H 與 MS 結(jié)合在一個亞基因組或全基因組水平上有效地揭開了蛋白質(zhì)相互作用的細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)。Y2H 的高通量潛力也提供了獲得相互作用組學(xué)功能信息的方法(Brückner et al 2009)。優(yōu)勢：高通量；樣品消耗量低。缺點：假陽性或假陰性率高；對實驗室設(shè)施有一定的要求。限制：僅適用于研究細(xì)胞核中發(fā)生的 PPIs；在酵母中翻譯后修飾程度很大。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]p53 and Bad: remote strangers become close friends[J]. Peng Jiang~1 Wenjing Du~1 Mian Wu ~1Hefei National Laboratory for Physical Sciences at Microscale and School of Life Sciences,University of Science and Technology of China,Anhui 230027,China. Cell Research. 2007(04)
[2]14-3-3 proteins—an update[J]. Paulette MHAWECH. Cell Research. 2005(04)
本文編號：3451015
【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：69 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
多種蛋白與蛋白相互作用分析技術(shù)的應(yīng)用范圍(Syafrizayantietal2014)
1.5.1.2 酵母雙雜交系統(tǒng)Y2H 是一種靈敏的體內(nèi) PPIs 的基因檢測方法，基于重組的功能性轉(zhuǎn)錄因子能啟動酵母細(xì)胞核內(nèi)的指示基因轉(zhuǎn)錄(Fieldsetal1989)。Y2H 最初是在 20 世紀(jì) 80 年代中期使用酵母 GAL4 轉(zhuǎn)錄因子引入的。為了分析，使用兩種表達(dá)質(zhì)粒并將其轉(zhuǎn)化到酵母菌株中，該酵母菌株在 GAL4 應(yīng)答元件的控制下攜帶 lacZ 報道基因。一個質(zhì)粒產(chǎn)生具有 GAL4 結(jié)合結(jié)構(gòu)域的融合基因，命名為誘餌；在另一個質(zhì)粒中，蛋白質(zhì)與 GAL4激活結(jié)構(gòu)域融合，命名為獵物�？梢酝ㄟ^ lacZ 基因產(chǎn)物 β-半乳糖苷酶的活性進(jìn)行檢測來證明誘餌和獵物之間的相互作用。使用兩種質(zhì)粒類型的文庫可以檢測到每種可能的相互作用。其他 Y2H 系統(tǒng)原理和上面相同，只是利用其他酵母菌株開發(fā)報告基圖 1-3 親和純化示意圖 (Syafrizayanti et al 2014)Fig. 1-3 The Scheme ofAffinity purification (Syafrizayanti et al 2014)
SVCV G 蛋白與宿主蛋白 14-3-3β/α-A 相互作用的研究誘餌系統(tǒng)(Caufield et al 2012)。此外，還建立了新的 Y2H 系統(tǒng)來研究膜 PPIs (Snideretal2013)。不幸的是，所有的 Y2H 系統(tǒng)都容易產(chǎn)生誤報和漏報。有關(guān)假陽性率的估計高達(dá) 70%(Deaneetal 2002)。盡管如此，Y2H 與 MS 結(jié)合在一個亞基因組或全基因組水平上有效地揭開了蛋白質(zhì)相互作用的細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)。Y2H 的高通量潛力也提供了獲得相互作用組學(xué)功能信息的方法(Brückner et al 2009)。優(yōu)勢：高通量；樣品消耗量低。缺點：假陽性或假陰性率高；對實驗室設(shè)施有一定的要求。限制：僅適用于研究細(xì)胞核中發(fā)生的 PPIs；在酵母中翻譯后修飾程度很大。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]p53 and Bad: remote strangers become close friends[J]. Peng Jiang~1 Wenjing Du~1 Mian Wu ~1Hefei National Laboratory for Physical Sciences at Microscale and School of Life Sciences,University of Science and Technology of China,Anhui 230027,China. Cell Research. 2007(04)
[2]14-3-3 proteins—an update[J]. Paulette MHAWECH. Cell Research. 2005(04)
本文編號：3451015
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