七鰓鰻（Lampetra japonica）CD81的克隆表達(dá)及生物信息學(xué)分析
發(fā)布時(shí)間：2021-10-16 12:53
CD81屬于四跨膜蛋白超家族（transmembrane4superfamily,TM4SF）成員，廣泛表達(dá)于不同的組織中，可促進(jìn)細(xì)胞自身和細(xì)胞之間的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)并能跨膜作用于某些蛋白。CD81可以參加幾種病毒辨認(rèn)與進(jìn)入細(xì)胞，調(diào)節(jié)不同細(xì)胞的一系列生理反應(yīng)過程。此外，CD81是B細(xì)胞和T細(xì)胞受體的組成成分，它們之間的相互作用會(huì)抑制信息的傳遞[1]。當(dāng)前研究的主要內(nèi)容是CD81在B-T細(xì)胞彼此作用中所起到的作用，以及分別在B細(xì)胞和T細(xì)胞中發(fā)揮的功能[2]。CD81在細(xì)胞膜上可與CD4、CD8、CD19、CD21、HLA-DR和α3β1整合素等結(jié)合，并調(diào)控丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）對(duì)宿主細(xì)胞的侵染，通過免疫作用刺激產(chǎn)生的CD81抗體能有效的阻止HCV的侵染和傳播等[3]。目前的研究主要集中在高等脊椎動(dòng)物，但在相對(duì)原始的無顎脊椎動(dòng)物七鰓鰻中CD81的生物學(xué)功能還不清楚。在本文中，通過對(duì)脂肪體cDNA文庫(kù)中的cDNA序列進(jìn)行查找與生物信息學(xué)分析（此文庫(kù)為本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的日本七鰓鰻（Lampetra japonica）文庫(kù)），得到一條與已報(bào)道的哺乳動(dòng)物CD81有較高同源性...
【文章來源】：遼寧師范大學(xué)遼寧省
【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
總RNA電泳圖(M：DL2000Marker；1：總RNA)
圖 2.3 CD81 目的片段 PCR 結(jié)果及篩選結(jié)果；A) CD81 PCR 電泳結(jié)果圖；M：DL2,000 Marker；1：CD81 目的片段 PCR 產(chǎn)物；B) CD81 膠收產(chǎn)物電泳結(jié)果圖；M：DL2,000 Marker；1：CD81 割膠回收 PCR 產(chǎn)物；C)菌落 PCR 后擴(kuò)增物（4 個(gè)菌落進(jìn)行平行對(duì)照）；M： DL2,000 Marker；1,2,3,4：4 個(gè)菌落 PCR 擴(kuò)增 CD81 目的片段；D)重組質(zhì)粒 DNA；M：DNA Marker DL2,000；1：質(zhì)粒；Fig. 2.3 The PCR product of the fragment of CD81 and positive selection;A) The result of CD81 PCR; M: DNA Marker DL2,000; 1. CD81 PCR products; B) The result ofCD81 recovery PCR products; M: DNA Marker DL2,000; 1. CD81 recovery PCR products; C) Thproduct of the bacterial colony PCR; M：DNA Marker DL2,000; 1,2,3,4：The bacterial colony PCRfour parallel controls of the fragment of CD81; D) The Recombinant plasmid DNA; M: DNA MarkDL2,000; 1: Plasmid;(2) CD81 目的片段測(cè)序結(jié)果與驗(yàn)證測(cè)序結(jié)果(附錄 B)顯示，含有起始密碼子 ATG，并且含有終止密碼子 TGA 由證明擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)已經(jīng)完成（圖 2.4）。并將實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增得到的目的序列利用 Sequench和 ORF Finder 搜索軟件來分析確定此目的片段的開放閱讀框?yàn)?702bp，編碼 233 個(gè)基酸 (圖 2.5,2.6)。
圖 2.4 PCR 擴(kuò)增得到的 CD81 目的片段 (注：該序列起始密碼子 ATG 和終止密子 TAG 為斜體加粗，劃線部分為開放閱讀框)Fig.2.4 the sequence of CD81target gene were obtained by using PCR(Note: The initiation codon is bold or italic and the termination codon is bold or italic ,The openreading frame of Lampetra japonica CD81 is underlined with single straight line.)圖 2.5 用 Sequencher 軟件分析的七鰓鰻 CD81ORFFig. 2.5 The open reading frame of Lampetra japonica CD81 by using Sequencher
本文編號(hào)：3439842
【文章來源】：遼寧師范大學(xué)遼寧省
【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
總RNA電泳圖(M：DL2000Marker；1：總RNA)
圖 2.3 CD81 目的片段 PCR 結(jié)果及篩選結(jié)果；A) CD81 PCR 電泳結(jié)果圖；M：DL2,000 Marker；1：CD81 目的片段 PCR 產(chǎn)物；B) CD81 膠收產(chǎn)物電泳結(jié)果圖；M：DL2,000 Marker；1：CD81 割膠回收 PCR 產(chǎn)物；C)菌落 PCR 后擴(kuò)增物（4 個(gè)菌落進(jìn)行平行對(duì)照）；M： DL2,000 Marker；1,2,3,4：4 個(gè)菌落 PCR 擴(kuò)增 CD81 目的片段；D)重組質(zhì)粒 DNA；M：DNA Marker DL2,000；1：質(zhì)粒；Fig. 2.3 The PCR product of the fragment of CD81 and positive selection;A) The result of CD81 PCR; M: DNA Marker DL2,000; 1. CD81 PCR products; B) The result ofCD81 recovery PCR products; M: DNA Marker DL2,000; 1. CD81 recovery PCR products; C) Thproduct of the bacterial colony PCR; M：DNA Marker DL2,000; 1,2,3,4：The bacterial colony PCRfour parallel controls of the fragment of CD81; D) The Recombinant plasmid DNA; M: DNA MarkDL2,000; 1: Plasmid;(2) CD81 目的片段測(cè)序結(jié)果與驗(yàn)證測(cè)序結(jié)果(附錄 B)顯示，含有起始密碼子 ATG，并且含有終止密碼子 TGA 由證明擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)已經(jīng)完成（圖 2.4）。并將實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增得到的目的序列利用 Sequench和 ORF Finder 搜索軟件來分析確定此目的片段的開放閱讀框?yàn)?702bp，編碼 233 個(gè)基酸 (圖 2.5,2.6)。
圖 2.4 PCR 擴(kuò)增得到的 CD81 目的片段 (注：該序列起始密碼子 ATG 和終止密子 TAG 為斜體加粗，劃線部分為開放閱讀框)Fig.2.4 the sequence of CD81target gene were obtained by using PCR(Note: The initiation codon is bold or italic and the termination codon is bold or italic ,The openreading frame of Lampetra japonica CD81 is underlined with single straight line.)圖 2.5 用 Sequencher 軟件分析的七鰓鰻 CD81ORFFig. 2.5 The open reading frame of Lampetra japonica CD81 by using Sequencher
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