發(fā)布時間：2021-10-16 06:19

　　目的：利用TAT-PTD的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)能力,建立新型水產(chǎn)疫苗輸送系統(tǒng),提高水產(chǎn)疫苗的接種效率。方法：通過基因工程的手段構(gòu)建并表達重組蛋白GFP-TAT,比較GFP-TAT和GFP在細胞水平的跨膜效率、魚浸泡免疫效果,探究TAT在水產(chǎn)疫苗應(yīng)用中的可能性。通過基因工程的方法構(gòu)建重組載體pET28a（+）-OmpK 和 pET28a（+）-OmpK-TAT,并表達兩種重組蛋白。分別用這兩種蛋白作為疫苗浸泡免疫歐洲鰻鱺,比較血清中的抗體效價以及免疫后對副溶血弧菌攻擊的保護效果。結(jié)果：（1）利用PCR的手段克隆GFP的全序列,將TAT序列接在GFP基因序列的碳端,通過基因克隆的手段構(gòu)建了重組質(zhì)粒pET28a（+）-GFP-TAT,表達重組蛋白GFP-TAT,經(jīng)過鎳柱純化得到(GFP-TAT蛋白；（2）分別用GFP和GFP-TAT兩種蛋白孵育細胞1h,可以發(fā)現(xiàn),與GFP相比,GFP-TAT能夠高效、穩(wěn)定的轉(zhuǎn)導(dǎo)進入細胞內(nèi)；（3）分別用GFP和GFP-TAT兩種蛋白作為抗原,通過注射,口服和浸泡三種方法免疫錦鯉,免疫三周后,測定血清中抗體效價�？梢园l(fā)現(xiàn),同種抗原免疫后,均是注射組的效價最高,浸泡組次之,而... 

【文章來源】：福州大學(xué)福建省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－２重組質(zhì)粒的ＰＣＲ驗證和雙酶切驗證??

圖２－４重組蛋Ａ的表達及包涵體驗證??Ａ?１：空載體；２；重姐質(zhì)粒１；?３；重姐質(zhì)粒２；?Ｍ；蛋白分子貴巧準??

圖２－５重姐菌的巧光檢測（１０〇ｘ）??Ａ：藍色激發(fā)光下的空載體：Ｂ：藍色激發(fā)光下的巧導(dǎo)后重組菌??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]副溶血弧菌的致病機制[J]. 馬立芝,郭李平,邱業(yè)峰.  生物技術(shù)通訊. 2013(06)
[2]副溶血弧菌免疫原性蛋白的鑒定及克隆表達[J]. 田麗花,葉智鸧,溫良優(yōu),潘建義,趙輔昆.  浙江理工大學(xué)學(xué)報. 2013(06)
[3]魚用基因工程疫苗研究進展[J]. 田園園,葉星.  中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報. 2012(05)
[4]PTD介導(dǎo)的蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)及其在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用[J]. 葉南慧,林艷云,潘劍茹,劉樹滔,饒平凡.  生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志. 2011(02)
[5]我國水產(chǎn)疫苗的研究現(xiàn)狀[J]. 黃輝,齊振雄,余露軍,吳勤超.  湖南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(21)
[6]帶有TAT-PTD跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)域融合基因的原核表達及表達條件優(yōu)化[J]. 何火聰,劉樹滔,潘劍茹,傅蓉,陳菁,陳躬瑞.  福州大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2010(04)
[7]副溶血弧菌分子致病機制研究進展[J]. 楊芳,李秀娟,徐保紅.  中華疾病控制雜志. 2010(06)
[8]TAT蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的研究進展[J]. 岳立輝,郭娜,趙硯麗.  國際麻醉學(xué)與復(fù)蘇雜志. 2009 (06)
[9]副溶血性弧菌致病因素檢測[J]. 黃銳敏,劉楚云,俞慕華.  河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志. 2009(05)
[10]嗜水氣單胞菌疫苗的研究現(xiàn)狀[J]. 孟思妤,孟長明,陳昌福.  漁業(yè)致富指南. 2009(20)

碩士論文
[1]副溶血弧菌免疫原性蛋白的鑒定及其研究[D]. 田麗花.浙江理工大學(xué) 2013



本文編號：3439318