為提高黃鱔養(yǎng)殖效率以及肌肉的質(zhì)量,進(jìn)一步發(fā)掘黃鱔肌肉發(fā)育相關(guān)基因,以atrogin-1為研究對(duì)象,構(gòu)建了3種原核表達(dá)載體:pCold-TF-atrogin-1、pET28a （+）-atrogin-1及pGEX6P-1-atrogin-1。將構(gòu)建的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)入Transetta（DE3）感受態(tài)細(xì)胞,重組菌株經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后,僅pCold-TF-atrogin-1/Transetta（DE3）菌株表達(dá)出可溶性較高的重組蛋白。IPTG誘導(dǎo)試驗(yàn)結(jié)果表明,誘導(dǎo)劑濃度對(duì)蛋白質(zhì)表達(dá)可溶性及含量幾乎沒(méi)有影響,誘導(dǎo)時(shí)間在20 h最佳�？扇苄圆糠纸�(jīng)Ni-NTA柱親和層析純化以及SDS-PAGE（10%聚丙烯酰胺）電泳,證實(shí)獲得了重組蛋白。構(gòu)建真核表達(dá)載體pEGFP-N1-atrogin-1,轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,結(jié)果表明,atrogin-1融合蛋白在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核中均有表達(dá),且在細(xì)胞核中表達(dá)量相對(duì)較高。 

【文章來(lái)源】：河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,49(05)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 主要試劑
    1.3 RNA提取及 cDNA合成
    1.4 atrogin-1基因的克隆
    1.5 atrogin-1表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
    1.6 atrogin-1蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
    1.7 誘導(dǎo)條件對(duì)atrogin-1蛋白表達(dá)的影響
        1.7.1 atrogin-1蛋白可溶性表達(dá)載體的篩選
        1.7.2 誘導(dǎo)劑濃度對(duì)atrogin-1蛋白表達(dá)的影響
        1.7.3 誘導(dǎo)時(shí)間對(duì)atrogin-1蛋白表達(dá)的影響
    1.8 atrogin-1蛋白的分離純化
    1.9 atrogin-1基因的轉(zhuǎn)染及在細(xì)胞中的定位
2 結(jié)果與分析
    2.1 atrogin-1基因的克隆結(jié)果
    2.2 pCold-TF-atrogin-1重組質(zhì)粒的酶切鑒定結(jié)果
    2.3 pCold-TF-atrogin-1重組質(zhì)粒的表達(dá)產(chǎn)物分析
    2.4 誘導(dǎo)條件對(duì)atrogin-1蛋白表達(dá)的影響
        2.4.1 atrogin-1蛋白可溶表達(dá)載體的篩選
        2.4.2 誘導(dǎo)劑濃度對(duì)atrogin-1蛋白表達(dá)的影響
        2.4.3 誘導(dǎo)時(shí)間對(duì)atrogin-1蛋白表達(dá)的影響
    2.5 atrogin-1蛋白的分離純化與濃度測(cè)定
    2.6 atrogin-1蛋白在293T細(xì)胞中的定位分析
3 結(jié)論與討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3438116