發(fā)布時(shí)間：2021-09-05 22:03

　　天然免疫系統(tǒng)是多細(xì)胞動(dòng)物抵御微生物感染的第一道防線。Akirin是天然免疫系統(tǒng)的新成員，在果蠅免疫缺陷（Imd）通路中參與NF-κB依賴的基因轉(zhuǎn)錄，并以多種生物學(xué)功能參與到機(jī)體的生命活動(dòng)中。Akirin同源蛋白在節(jié)肢動(dòng)物（如蜱、紅螨等）、魚虱等魚類寄生物中有自身保護(hù)的作用，從而被開發(fā)成提高寄主免疫力的疫苗。中國是漁業(yè)生產(chǎn)大國，魚類Akirin的研究不但可以豐富基因資源，還可以挖掘其在魚類免疫系統(tǒng)中的生物學(xué)功能，對(duì)漁業(yè)的發(fā)展具有重要的意義。通過Touchdown PCR、TAIL-PCR、3-RACE和5-RACE等方法，分別從半滑舌鰨（Cynoglossussemilaevis）、條紋斑竹鯊（Chiloscyllium punctatum）和泥鰍（Paramisgurnus dabryanus）的轉(zhuǎn)錄組中克隆得到3個(gè)akirin2（csakirin2, cpakirin2和pdakirin2）和1個(gè)akirin1（pdakirin1）的cDNA序列。推導(dǎo)序列分析表明PdAkirin2僅含有一個(gè)N端的細(xì)胞核定位信號(hào)，而其他三個(gè)Akirin假使蛋白均含有兩個(gè)細(xì)胞核定位信號(hào)。同源序列比對(duì)和系... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
附表
摘要
Abstract
圖目錄
表目錄
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 魚類免疫的概述
    1.2 魚類免疫相關(guān)細(xì)胞因子的概述
    1.3 akirin 基因
        1.3.1 akirin 基因的起源
        1.3.2 akirin 基因的進(jìn)化及結(jié)構(gòu)分析
    1.4 Akirin 多重生物學(xué)功能
    1.5 魚類 Akirin 研究進(jìn)展
    1.6 本研究目的及意義
第二章 魚類 akirin 同源基因的克隆
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 材料
        2.1.2 菌株、質(zhì)粒與引物
        2.1.3 試劑與工具酶
        2.1.4 溶液和培養(yǎng)基
        2.1.5 主要試驗(yàn)儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 分別提取泥鰍、半滑舌鰨和條紋斑竹鯊肝臟組織總 RNA
        2.2.2 第一條 cDNA 鏈的合成
        2.2.3 akirin 基因簡并引物的設(shè)計(jì)
        2.2.4 akirin 基因保守片段的克隆
        2.2.5 泥鰍、半滑舌鰨和條紋斑竹鯊 Akirin 完整 cDNA 的克隆與分析
    2.3 試驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 akirin 基因簡并引物的設(shè)計(jì)
        2.3.2 akirin 基因保守片段的克隆
        2.3.3 akirin 完整 cDNA 的克隆與分析
        2.3.4 Akirin 蛋白的序列分析
        2.3.5 akirin 基因進(jìn)化分析
    2.4 討論
    本章小結(jié)
第三章 泥鰍 Akirin2 亞細(xì)胞定位研究
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 菌株、載體和細(xì)胞
        3.1.2 主要試劑及工具酶
        3.1.3 主要試劑的配制
        3.1.4 主要儀器
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 引物設(shè)計(jì)
        3.2.2 通過 Overlap-PCR 構(gòu)建泥鰍 akirin2 基因缺失片段
        3.2.3 重組表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.4 重組質(zhì)粒的大量提取
        3.2.5 ZF4 細(xì)胞復(fù)蘇
        3.2.6 細(xì)胞傳代
        3.2.7 重組質(zhì)粒及 pDsRed2-C1 空載體轉(zhuǎn)染 ZF4 細(xì)胞
        3.2.8 DAPI 染色
    3.3 試驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 泥鰍 akirin2 基因缺失片段的獲得
        3.3.2 重組表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定
        3.3.3 熒光顯微鏡檢測重組質(zhì)粒的亞細(xì)胞定位
    3.4 討論
    本章小結(jié)
第四章 泥鰍 Akirin2 免疫相關(guān)生物學(xué)功能驗(yàn)證
    4.1 泥鰍 akirin2 基因時(shí)空表達(dá)分析
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 試驗(yàn)方法
        4.1.3 試驗(yàn)結(jié)果
        4.1.4 討論
    4.2 泥鰍 akirin2 過表達(dá)對(duì)細(xì)胞免疫因子影響的研究
        4.2.1 試驗(yàn)材料
        4.2.2 試驗(yàn)方法
        4.2.3 試驗(yàn)結(jié)果
        4.2.4 討論
    本章小結(jié)
第五章 泥鰍 Akirin2 與 14-3-3β蛋白的相互作用
    5.1 試驗(yàn)材料
        5.1.1 材料
        5.1.2 菌株和質(zhì)粒
        5.1.3 試劑和工具酶
        5.1.4 試劑和培養(yǎng)基的配制
    5.2 試驗(yàn)方法
        5.2.1 14-3-3β基因的克隆
        5.2.2 DNA-BD 誘餌蛋白和 DNA-AD 互作蛋白融合載體
        5.2.3 融合載體對(duì)宿主細(xì)胞毒性及自激活的檢測
        5.2.4 誘餌蛋白對(duì)宿主細(xì)胞毒性的檢測
        5.2.5 泥鰍 Akirin2 和 14-3-3β融合蛋白的雜交
    5.3 試驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 14-3-3β基因的克隆
        5.3.2 融合載體的構(gòu)建及驗(yàn)證
        5.3.3 融合載體細(xì)胞自激活及毒性檢測
        5.3.4 泥鰍 Akirin2 和 14-3-3β相互作用的雜交驗(yàn)證
    5.4 討論
    本章小結(jié)
第六章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Akirin基因的研究進(jìn)展[J]. 陳小玲,黃志清,毛湘冰,吳秀群,吳彩梅.  中國畜牧雜志. 2012(13)
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[3]豬akirin2基因的克隆與真核表達(dá)[J]. 曹金鎖,柳超,蔣朋飛,趙振華,陳新雨,張德禮.  中國獸醫(yī)雜志. 2010(08)
[4]Akirin2基因在肉鴨胸肌和腿肌中的發(fā)育表達(dá)研究[J]. 王萬霞,黃锎靚,劉賀賀,代飛,寇潔,李亮,王繼文.  中國家禽. 2010(09)
[5]抗菌肽家族成員——防御素[J]. 唐博,曹貴方,楊銀鳳,額爾敦朝魯.  內(nèi)蒙古畜牧科學(xué). 2003(03)



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