石斑魚是我國以及東南亞各國重要的海水養(yǎng)殖魚類,經濟價值極高。隨著石斑魚養(yǎng)殖密度的增加以及海水養(yǎng)殖環(huán)境的不斷惡化,各種疾病的爆發(fā)對石斑魚養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經濟損失。新加坡石斑魚虹彩病毒（Singapore grouper iridovirus, SGIV）是從養(yǎng)殖患病石斑魚中分離到的一種高致病性病毒病原,可導致石斑魚死亡率達90%以上。NF-κB信號轉導通路參與調節(jié)機體免疫和發(fā)育的多種生理活動,是聯(lián)系機體天然免疫系統(tǒng)和特異性免疫系統(tǒng)的紐帶。本研究以斜帶石斑魚為對象,成功克隆鑒定了三個與NF-κB信號轉導相關的基因,分別編碼石斑魚NF-κB因子抑制蛋白IκBα兩種亞型（命名為EcIκBαA和EcIκBαB）和抑制蛋白1κB激酶IKKα（命名為EcIKKα）。在此基礎上,本文進一步分析了IκBα的兩種亞型在SGIV感染中的功能,為探索魚NF-κB信號通路的免疫調節(jié)功能奠定了理論基礎。EcIκBαA和EcIκBαB分別編碼308和318個氨基酸,其中EcIκBαA和EcIκBαB與斑馬魚的IκBαA和IκBαB分別有59%和53%的同源性。氨基酸序列比對分析結果表明,EcIκBαA和EcIκB... 

【文章來源】：海南大學海南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 綜述
    1 免疫系統(tǒng)概述和魚類免疫系統(tǒng)研究進展
        1.1 免疫系統(tǒng)概述
        1.2 魚類免疫系統(tǒng)的研究進展
    2 NF-κB信號轉導通路
        2.1 NF-κB信號轉導通路概述
        2.2 NF-κB信號通路的分子生物學基礎
        2.3 NF-κB信號轉導通路的激活及其調節(jié)機制
    3 NF-κB與動物免疫信號轉導研究進展
        3.1 NF-κB與無脊椎動物免疫信號轉導研究
        3.2 NF-κB與脊椎動物免疫信號轉導研究
    4 病毒利用宿主的NF-KB信號通路實現(xiàn)免疫逃避和快速增值
    5 石斑魚及其疾病研究
        5.1 石斑魚研究進展
        5.2 石斑魚虹彩病毒研究進展
    6 研究的目的和意義
第二章 石斑魚兩種類型的IκBα的分子克隆和功能分析
    1 前言
    2 實驗材料
        2.1 實驗動物
        2.2 細胞、病毒及其它微生物病原
        2.3 質粒載體和受體菌株
        2.4 細胞培養(yǎng)基及細菌培養(yǎng)基
        2.5 酶類及相關標準品
        2.6 實驗用試劑盒
        2.7 其他溶液和試劑
        2.8 常用的生物信息學分析軟件和網(wǎng)站
    3 實驗方法和步驟
        3.1 GS細胞培養(yǎng)和傳代
        3.2 病毒的增殖
        3.3 用GS細胞測定SGIV病毒滴度
        3.4 魚體組織樣品采集及免疫刺激
        3.5 總RNA樣品的提取
        3.6 設計RACE引物,獲得石斑魚IκBα的cDNA序列
        3.7 石斑魚兩種類型的EcIκBα基因全長的獲得
        3.8 半定量PCR檢測石斑魚IκBα的mRNA表達譜
        3.9 qPCR檢測不同刺激后石斑魚頭腎組織中IκBα表達變化
        3.10 EcIκBαA和EcIκBαB亞細胞定位分析
        3.11 兩種類型的EcIκBα對NF-κB因子p65和c-Rel的調節(jié)
        3.12 過表達EcIκBαA和EcIκBαB對SGIV復制的影響
        3.13 數(shù)據(jù)分析軟件
    4 實驗結果與分析
        4.1 EcIκBαA和EcIκBαB cDNA全長擴增和序列分析
        4.2 EcIκBαA和EcIκBαB基因組全長擴增和序列分析
        4.3 EcIκBαA和EcIκBαB氨基酸序列比對及進化關系分析
        4.4 石斑魚EcIκBαA和EcIκBαB基因表達模式分析
        4.5 石斑魚EcIκBαA和EcIκBαB亞細胞定位分析
        4.6 過表達EcIκBαA和EcIκBαB對NF-κB的調節(jié)
        4.7 過表達EcIκBαA和EcIκBαB對SGIV復制的影響
    5 討論
    6 小結
第三章 石斑魚IκB激酶EcIKKα基因的分離和功能研究
    1 前言
    2 實驗材料和試劑
    3 實驗方法
        3.1 設計引物,利用RACE技術獲得IκBα基因序列
        3.2 石斑魚IKKα基因的表達模式分析
        3.3 聚肌胞苷酸(Poly I：C)免疫刺激石斑魚
        3.4 生物統(tǒng)計學軟件分析
    4 實驗結果與分析
        4.1 石斑魚IKKα基因擴增和序列分析
        4.2 EcIKKα和已報道物種的IKKα氨基酸序列比對及進化關系分析
        4.3 EcIKKα基因表達模式分析
        4.4 polyI：C刺激后EcIKKα的變化
    5 討論
    6 小結
全文總結和今后工作展望
    全文總結
    今后可進一步開展以下工作
參考文獻
略縮詞
攻讀碩士學位期間發(fā)表的和待發(fā)表的論文
攻讀碩士期間參加的學術交流活動
致謝



本文編號：3376343