元陽哈尼梯田是聞名中外的世界文化遺產(chǎn)。近年來入侵物種克氏原螯蝦（Procambarus clarkii,俗稱小龍蝦）在元陽梯田中出現(xiàn),甚至在局部泛濫成災(zāi)；其種群會(huì)在梯田中掘洞,使田間墻體坍塌,嚴(yán)重影響梯田景觀。準(zhǔn)確估計(jì)克氏原螯蝦在梯田中的分布現(xiàn)狀、監(jiān)測(cè)其擴(kuò)散動(dòng)態(tài)是進(jìn)行有效防控的基礎(chǔ)。目前常用的監(jiān)測(cè)方法主要依靠蝦籠誘捕,費(fèi)時(shí)費(fèi)力,特別是當(dāng)種群數(shù)量較低時(shí),數(shù)據(jù)不夠準(zhǔn)確。水生生物常常通過分泌物、糞便等向水體中排出DNA（環(huán)境DNA）。結(jié)合生物條形碼技術(shù),環(huán)境DNA可以用來對(duì)物種進(jìn)行快速檢測(cè)。本研究的目的是探究環(huán)境DNA技術(shù)是否能用于調(diào)查克氏原螯蝦在元陽哈尼梯田中的的分布。本研究利用熒光定量PCR技術(shù)（qPCR）,通過測(cè)定水樣中的克氏原螯蝦的DNA濃度來推斷其分布情況。該方法流程如下：首先,利用克氏原螯蝦組織樣本DNA進(jìn)行系列稀釋,確定qPCR的定量和定性檢測(cè)的有效濃度；其次,在實(shí)驗(yàn)室條件下飼養(yǎng)克氏原螯蝦,利用qPCR檢測(cè)水樣中的環(huán)境DNA,繪制種群密度-環(huán)境DNA濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線；最后在元陽哈尼梯田景區(qū)中選擇了58塊樣地采集水樣,將環(huán)境DNA檢測(cè)結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行擬合,推算克氏原螯蝦的分布和密... 

【文章來源】：云南大學(xué)云南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 研究背景
        1.1.1 外來入侵種
        1.1.3 入侵種克氏原螯蝦
        1.1.4 克氏原螯蝦入侵元陽梯田生態(tài)系統(tǒng)
    1.2 環(huán)境DNA技術(shù)(eDNA)技術(shù)
    1.3 eDNA技術(shù)用于水生生態(tài)系統(tǒng)研究
        1.3.1 eDNA技術(shù)和傳統(tǒng)方法的對(duì)比
        1.3.2 估測(cè)生物量和種群密度
        1.3.3 判斷物種組成
        1.3.4 監(jiān)測(cè)入侵物種
        1.3.5 監(jiān)測(cè)隱存物種和珍稀瀕危物種
    1.4 TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)
    1.5 科學(xué)問題
2 實(shí)驗(yàn)材料與研究方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)概況
    2.2 實(shí)驗(yàn)研究方法
        2.2.1 熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)極值的研究
        2.2.2 野外采樣和農(nóng)民訪查
        2.2.3 環(huán)境DNA的提取和qPCR操作
        2.2.4 傳統(tǒng)蝦籠捕蝦實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)克氏原螯蝦稀釋實(shí)驗(yàn)
    2.3 數(shù)據(jù)分析
3 研究結(jié)果
    3.1 定性閾值(LOD)和定量閾(LOQ)值的檢測(cè)結(jié)果
    3.2 樣本環(huán)境DNA技術(shù)監(jiān)測(cè)與傳統(tǒng)蝦籠監(jiān)測(cè)的比較
    3.3 實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)克氏原螯蝦稀釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.4 稀釋實(shí)驗(yàn)廣義線性模型與元陽哈尼梯田景區(qū)數(shù)據(jù)擬合結(jié)果
    3.5 克氏原螯蝦在元陽哈尼梯田的入侵情況
4 討論與結(jié)論
    4.1 討論
        4.1.1 熒光定量PCR檢測(cè)閾值
        4.1.2 環(huán)境DNA監(jiān)測(cè)技術(shù)與傳統(tǒng)蝦籠監(jiān)測(cè)法的比較
        4.1.3 環(huán)境DNA檢測(cè)技術(shù)中對(duì)照試驗(yàn)的重要性
        4.1.4 環(huán)境DNA監(jiān)測(cè)技術(shù)的改進(jìn)以及使用更精確的定量PCR
    4.2 結(jié)論
5 展望
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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