T-2毒素是由鐮飽菌產(chǎn)生的一類倍半萜烯類化合物,并且我國(guó)對(duì)蝦飼料中存在普遍的污染,對(duì)蝦飼喂了受T-2毒素污染的飼料以后,毒素會(huì)在對(duì)蝦體內(nèi)蓄積殘留引起水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的潛在危險(xiǎn),毒素進(jìn)一步通過食物鏈進(jìn)入人體內(nèi),造成食物質(zhì)量安全問題。前期課題組研究發(fā)現(xiàn)T-2毒素對(duì)對(duì)蝦產(chǎn)生一系列危害,比如生產(chǎn)性能下降、消化系統(tǒng)損傷、解毒酶異常、免疫系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)抑制以及肌肉品質(zhì)降低等。而T-2毒素對(duì)生物大分子的研究比較少。生物大分子包括脂類、蛋白質(zhì)、DNA和RNA。前期研究已發(fā)現(xiàn)T-2毒素對(duì)Ω-3不飽和脂肪酸的影響較大,采用差異蛋白質(zhì)組學(xué)法發(fā)現(xiàn)了T-2毒素對(duì)精氨酸激酶產(chǎn)生較大影響,但是僅憑差異蛋白點(diǎn)的判斷存在明顯的證據(jù)不足,易造成較大誤差,缺乏Westernblotting和RT-PCR實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)佐證。而對(duì)于T-2毒素對(duì)對(duì)蝦中的DNA和RNA鮮有報(bào)道。課題組前期用對(duì)蝦體內(nèi)的T-2毒素及其殘留物處理RAW264.7細(xì)胞,采用RT-PCR方法探索了其對(duì)RAW264.7細(xì)胞內(nèi)JAK/STAT信號(hào)通路關(guān)鍵因子mRNA表達(dá)量的影響。但是僅憑mRNA表達(dá)量的數(shù)據(jù)不能充分證明T-2毒素、隱蔽態(tài)T-2毒素和對(duì)蝦體內(nèi)的T-2毒素殘... 

【文章來源】：廣東海洋大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 T-2毒素
        1.1.1 化學(xué)結(jié)構(gòu)
        1.1.2 物理化學(xué)性質(zhì)
    1.2 T-2毒素的危害
        1.2.1 T-2毒素的基因與細(xì)胞毒性
        1.2.2 其他毒性
    1.3 水產(chǎn)飼料中T-2毒素的污染狀況
    1.4 T-2毒素對(duì)凡納濱對(duì)蝦的毒性
    1.5 本課題研究的目的、內(nèi)容和意義
        1.5.1 研究目的
        1.5.2 研究?jī)?nèi)容
        1.5.3 研究意義
2 T-2毒素對(duì)對(duì)蝦分子毒性標(biāo)記蛋白的鑒定
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 樣品
        2.1.2 試劑
        2.1.3 儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 一抗的設(shè)計(jì)與合成
        2.2.2 Western Blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)精氨酸激酶表達(dá)量
        2.2.3 定時(shí)定量PCR測(cè)定精氨酸激酶的mRNA表達(dá)
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 精氨酸激酶抗體設(shè)計(jì)
        2.3.2 對(duì)蝦體內(nèi)精氨酸激酶的表達(dá)量
        2.3.3 劑量組對(duì)蝦體內(nèi)精氨酸激酶mRNA的表達(dá)量測(cè)定
    2.4 討論
    2.5 結(jié)論
3 T-2毒素對(duì)對(duì)蝦DNA、RNA的毒作用
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 樣品
        3.1.2 儀器
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 響應(yīng)面法優(yōu)化T-2毒素與DNA作用條件
        3.2.2 T-2毒素對(duì)對(duì)蝦DNA的影響
        3.2.3 T-2毒素經(jīng)口對(duì)對(duì)蝦DNA的影響
        3.2.4 T-2毒素對(duì)對(duì)蝦RNA的影響
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 毛細(xì)管法分析T-2毒素對(duì)小牛胸腺DNA黏度作用的時(shí)間和濃度的優(yōu)化
        3.3.2 紫外光譜分析T-2毒素與小牛胸腺DNA作用的時(shí)間濃度優(yōu)化
        3.3.3 體外加T-2毒素對(duì)對(duì)蝦DNA的影響（體外實(shí)驗(yàn)）
        3.3.4 T-2毒素對(duì)劑量組對(duì)蝦DNA的影響（體內(nèi)試驗(yàn)）
        3.3.5 T-2毒素對(duì)蝦RNA的影響
    3.4 討論
    3.5 總結(jié)
4 T-2毒素及其隱蔽態(tài)T-2對(duì)RAW264.7細(xì)胞JAK/STAT信號(hào)通路關(guān)鍵信號(hào)分子表達(dá)量的影響
    4.1 材料與試劑
        4.1.1 材料
        4.1.2 試劑
        4.1.3 儀器設(shè)備
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 試劑的配制
        4.2.2 Western blot方法測(cè)定JAK/STAT信號(hào)通路相關(guān)信號(hào)因子的蛋白表達(dá)量測(cè)定
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 T-2毒素及mT-2s對(duì)RAW264.7 JAK1-3蛋白表達(dá)水平的影響
        4.3.2 T-2毒素及mT-2s對(duì)RAW264.7 P-JAK1-3蛋白表達(dá)水平的影響
        4.3.3 T-2毒素及mT-2s對(duì)RAW264.7 STAT1-3蛋白表達(dá)水平的影響
        4.3.4 T-2毒素及mT-2s對(duì)RAW264.7 P-STAT1-3蛋白表達(dá)水平的影響
    4.4 討論
    4.5 結(jié)論
5 總結(jié)與展望
    5.1 總結(jié)
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
導(dǎo)師簡(jiǎn)介
附錄



本文編號(hào)：3351056