斜帶石斑魚（Epinepheluscoioides）隸屬于鱸形目、鱸亞目、鮨科、石斑魚亞科、石斑魚屬,是一種生活在海水中具有較高營養(yǎng)價值和自然性逆轉(zhuǎn)的雌雄同體魚類,可以作為研究脊椎動物性別分化的模型。抗繆勒氏管激素（anti-Mullerian hormone,AMH）及受體（anti-Mullerian hormone receptor II,AMHRII）為糖蛋白,屬于TGF-β細(xì)胞因子家族。AMH基因在哺乳類研究中是因其具有引發(fā)繆勒氏管的退化和阻止雌性生殖器官的發(fā)育而得以命名。在硬骨魚類中,雖然沒有繆勒氏管存在,但在許多魚類中AMH及其受體AMHRII基因都已被克隆鑒定,并且在性腺中檢測到其表達,從而進一步證明了 AMH及其受體AMHRII基因在魚類性別分化和性逆轉(zhuǎn)方面起著某種作用。本文利用RACE方法克隆了 AMH及其受體AMHRII基因的全長cDNA序列并對其進行進化分析;利用RT-PCR方法對AMH及其受體AMHRII基因在不同組織器官中的表達量進行檢測;并利用原位雜交的方法對AMH及其受體AMHRII基因在性腺中的表達進行定位;在對AMH及其受體AMHRII基因所扮演的作... 

【文章來源】：海南大學(xué)海南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．?（Ａ／Ｂ）斜帶石斑魚克隆得到的目的片段點泳檢測??

可編碼一個包含５１８個氨基酸的蛋白（圖２．?Ａ）。而斜帶石斑魚中ＡＭＨＲＩＩ受體基??因序列長為１８２２ｂｐ，含有１４９７?ｂｐ的開放閱讀框（ＯＲＦ），可編碼一個包含４９８??個氨基酸的蛋白（圖２．?Ｂ）。我們對ＡＭＨ和ＡＭＨＲＩＩ進行了基因序列Ｎ端信號肽??預(yù)測，信號肽長度分別為２２個和２１個氨基酸，如（圖２．?Ａ）和（圖２．?Ｂ）中紅色陰影??表示。??ａｔｇｃｔｇｔｔｔｇｔｇｇａｃａｔｃｔｔｃｔｃｃｔｇｔｇｇａｇｃｇｔｔｇａｔｇｃｔｃｔｇｃｔｇｃｇｃｃｃｇｇｃｔｃｔｇｔｇｃａｇｃｃｃｔｇｃａｇｇｔｃｔｃａｃａｔｇｇａｃａｇｃａｇ??ｌｑｖｓｈｇｑｑ??ｃｔｇａｔｔｇａｃｇａｃｃｃｃｇｃａｇｔｇａｃａｇａｇｃａｃａｃｃｃａｔｃｃａｔｃａｇｃｃｔｃｃａｃａｇｔｃｔｃｃｃａｔｃａｃｇｃｃｃｃｔｃａｃａｇｔｇｃａｃｃｇｔｇｃｔｔｔｇｔｇ??ＬＩＤＤＰＡＶＴＥＨＴＨＰＳＡＳＴＶＳＨＨＡＰＨＳＡＰＣＦ！??ｇａｔｇａｃａｔａｔｔｔｇｃａｇｃｇｃｔｇｃｇｔｇａａｇｇｔｇｔｔｇｇｇａｇｃｇａｃｇｇｔｇａａｃｔｃａｃａａａｃｃｇｃａｇｔｔｔｇｇｃｔｃａｇｔｔｔｇｇｇａｔｃｔｇｃａｃｔｇａａ??ｔｃｔｇａｃａｇｃｔｃｔｔｃａｇｔｃｔｔａｔｔａｃａｇｃｔｇｇｃｔａａｔｇａａａｃａａａｃａａａａａｃｃａｇｇｇａａａｔｇｇａｔｔｇａａｇｇｔｔｔｔｇｃａｔｃｃａｇｇｔｇｇａｇｇａ??ａｔｃａｇａｇｇｔｇｔｃａａａｇａｔｇａｇａｃｇｇｇａａｃｔｃｔｃｇｔｇｔｔｇａｃｃｔｔｔｇａｃｃｔｃｔｃａｃｔｇｔｃｃｃｃｔｔｔｇｃｔｇａａｇｇｔｇａａｃｃｃｔｇｔｇｔｔｇｃｔｇ??ｔｔｇｇｃｇｔｔｔｇａａａｇ

中最后留存的為線性化質(zhì)粒，于－２０Ｔ：保存。??述過程中所用的明和其他耗材均為ＲＮａｓｅ?ｆｒｅｅ。??反轉(zhuǎn)錄??線性化質(zhì)粒濃度后，我們對線性化質(zhì)粒進行反轉(zhuǎn)錄，具體反應(yīng)成分?體積（ｕＬ）線性化質(zhì)粒（ｌｕｇ）?Ｘ??ＲＮａｓｅ?ｆｒｅｅ?Ｈ２Ｏ?１３－Ｘ??ｌ〇ｘＮＴＰ?ｌａｂｅｌｉｎｇ?ｍｉｘｔｕｒｅ?２．?０??ｌ〇ｘＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?ｂｕｆｆｅｒ?２．?０??ＰｒｏｔｅｃｔｏｒＲＮａｓｅ?ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｒ?１．０??Ｐ６?ＲＮＡ?ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ?（Ｔ７為正?２．?０??向，ＳＰ６為反向）?２０．０??Ｔｏｔａｌ??件為：冰上混勻后３７°Ｃ，?２ｈ；加入２ｕＬ?ＤＮａｓｅｌ后，３７°Ｃ，１ＥＤＴＡ終止反應(yīng)。分裝后產(chǎn)物于－８０°Ｃ保存。濃度一般為２０－ｌ

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3342815