芳香化酶參與哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育，調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌，影響性行為和繁殖功能；并且可以調(diào)控非哺乳動(dòng)物性腺分化，影響多種魚(yú)類的性別分化和性別決定。芳香化酶由芳香化酶基因cyp19a1編碼，在尼羅羅非魚(yú)中，存在兩種芳香化酶基因，分別為性腺型芳香化酶基因（cyp19a1a）和腦型芳香化酶基因（cyp19a1b），他們分別編碼性腺型芳香化酶（P450aromA）和腦型芳香化酶（P450aromB）。其中性腺型芳香化酶主要在性腺中，在其它組織中很少表達(dá)甚至不表達(dá)。為了了解高溫對(duì)尼羅羅非魚(yú)性別分化相關(guān)基因表達(dá)的分子調(diào)控機(jī)制，本文通過(guò)RT-PCR技術(shù)獲得尼羅羅非魚(yú)cyp19a1a ORF區(qū)，并進(jìn)行了原核表達(dá)，純化了重組蛋白，免疫小鼠制備了多克隆抗體。對(duì)尼羅羅非魚(yú)進(jìn)行36℃高溫處理，分析高溫誘導(dǎo)前后尼羅羅非魚(yú)性腺中cyp19a1a蛋白表達(dá)的變化情況。同時(shí)體外培養(yǎng)尼羅羅非魚(yú)卵巢細(xì)胞，并對(duì)卵巢細(xì)胞進(jìn)行高溫處理，qRT-PCR分析離體情況下cyp19a1a以及hsp70的變化情況。1、從尼羅羅非魚(yú)卵巢提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA模板后，利用設(shè)計(jì)的引物PCR擴(kuò)增cyp19a1a ORF區(qū)1200bp片段，... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

雌性羅非魚(yú)性腺分化期間，轉(zhuǎn)錄因子Foxl2對(duì)Cyp19a1a基因的調(diào)控機(jī)制[25]

5圖 1.2 魚(yú)類 Dmrt1 基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)[27]Fig. 1.2 The fish Dmrt1 regulatory network[27].目前，在虹鱒、河豚、鯰魚(yú)、石斑魚(yú)、黑鯛等魚(yú)類中克隆到 Dmrt1 基因，都表現(xiàn)出精巢高表達(dá)的兩性差異表達(dá)模式。此外，在青鳉、河豚、羅非魚(yú)中也克隆到 Dmrt4 基因；在青鳉、河豚中，Dmrt4 基因在精巢中高豐度表達(dá)，而在卵巢中則低豐度表達(dá)[30-31]。但是 Dmrt4 基因在羅非魚(yú)的卵巢中則是特異性表達(dá)[32]。對(duì)于溫度依賴型性別決定（TSD）的爬行動(dòng)物來(lái)說(shuō)，在熱敏期，擬鱷龜（Chelydra serpentina）和紅耳龜（Trachemys scripta）的 Dmrt1 在雄性決定溫度下表達(dá)量升高，在雌性決定溫度下表達(dá)量下降[33-34]。用雌二醇對(duì)性腺分化期的紅耳龜胚胎進(jìn)行處理，發(fā)現(xiàn) Dmrt1 的表達(dá)水平下降，雌性個(gè)體數(shù)量增加。表明外源性雌激素可通過(guò)下調(diào) Dmrt1 的表達(dá)使胚胎發(fā)生性逆轉(zhuǎn)[35]。已有報(bào)道證實(shí)

17圖 2.1 表達(dá)載體 pET-28a(+)的圖譜及克隆表達(dá)區(qū)序列（引自 novagen pET 表達(dá)系統(tǒng)說(shuō)明書(shū)）Fig. 2.1 Expression vector pET-28a (+) patterns and cloning expression sequences (from novagenpET expression system manual )

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]高溫誘導(dǎo)對(duì)尼羅羅非魚(yú)性別分化及生長(zhǎng)的影響[J]. 黨廣成,劉羽清,付佩勝,程安達(dá),劉洋,趙燕,朱永安,宋憬愚,季相山.  漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展. 2011(05)
[2]脊尾白蝦熱休克蛋白HSP90基因的原核表達(dá)與鑒定[J]. 韓俊英,李健,李吉濤,陳萍,李華.  漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展. 2011(05)
[3]棕點(diǎn)石斑魚(yú)Piscidin樣肽基因的克隆及其成熟肽的原核表達(dá)[J]. 陳大瑋,鄧?yán)?何凡,邱聰齡,馬一見(jiàn),劉志剛.  漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展. 2011(04)
[4]牙鲆dmrt1基因的克隆及其與P450arom基因的組織表達(dá)分析[J]. 文愛(ài)韻,尤鋒,孫鵬,徐冬冬,吳志昊,馬得友,李軍,張培軍.  海洋科學(xué). 2010(11)
[5]人fgl2凝血酶原酶FRED結(jié)構(gòu)域的原核表達(dá)、純化及其凝血活性的鑒定[J]. 李學(xué)軍,宋善俊,李永敢,陽(yáng)文捷,許力,魏華萍.  華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2009(05)
[6]羅非魚(yú)性別三系配套技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 萬(wàn)松良,雷曉中,萬(wàn)珊.  水產(chǎn)科學(xué). 2009(09)
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[9]半滑舌鰨FTZ-F1 cDNA克隆及表達(dá)分析（英文）[J]. 鄧思平,陳松林,劉本偉.  動(dòng)物學(xué)研究. 2008(06)
[10]南方鲇腎細(xì)胞系（SMK-Ⅰ）的建立及其細(xì)胞骨架的研究[J]. 霍靜,洪錫鈞,王志堅(jiān),劉小紅,王詠梅.  西南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2007(12)

博士論文
[1]尼羅羅非魚(yú)性別決定機(jī)制和性別相關(guān)的分子標(biāo)記[D]. 楊東.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3338041