芳香化酶參與哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育，調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌，影響性行為和繁殖功能；并且可以調(diào)控非哺乳動物性腺分化，影響多種魚類的性別分化和性別決定。芳香化酶由芳香化酶基因cyp19a1編碼，在尼羅羅非魚中，存在兩種芳香化酶基因，分別為性腺型芳香化酶基因（cyp19a1a）和腦型芳香化酶基因（cyp19a1b），他們分別編碼性腺型芳香化酶（P450aromA）和腦型芳香化酶（P450aromB）。其中性腺型芳香化酶主要在性腺中，在其它組織中很少表達甚至不表達。為了了解高溫對尼羅羅非魚性別分化相關(guān)基因表達的分子調(diào)控機制，本文通過RT-PCR技術(shù)獲得尼羅羅非魚cyp19a1a ORF區(qū)，并進行了原核表達，純化了重組蛋白，免疫小鼠制備了多克隆抗體。對尼羅羅非魚進行36℃高溫處理，分析高溫誘導(dǎo)前后尼羅羅非魚性腺中cyp19a1a蛋白表達的變化情況。同時體外培養(yǎng)尼羅羅非魚卵巢細胞，并對卵巢細胞進行高溫處理，qRT-PCR分析離體情況下cyp19a1a以及hsp70的變化情況。1、從尼羅羅非魚卵巢提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA模板后，利用設(shè)計的引物PCR擴增cyp19a1a ORF區(qū)1200bp片段，... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

雌性羅非魚性腺分化期間，轉(zhuǎn)錄因子Foxl2對Cyp19a1a基因的調(diào)控機制[25]

5圖 1.2 魚類 Dmrt1 基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)[27]Fig. 1.2 The fish Dmrt1 regulatory network[27].目前，在虹鱒、河豚、鯰魚、石斑魚、黑鯛等魚類中克隆到 Dmrt1 基因，都表現(xiàn)出精巢高表達的兩性差異表達模式。此外，在青鳉、河豚、羅非魚中也克隆到 Dmrt4 基因；在青鳉、河豚中，Dmrt4 基因在精巢中高豐度表達，而在卵巢中則低豐度表達[30-31]。但是 Dmrt4 基因在羅非魚的卵巢中則是特異性表達[32]。對于溫度依賴型性別決定（TSD）的爬行動物來說，在熱敏期，擬鱷龜（Chelydra serpentina）和紅耳龜（Trachemys scripta）的 Dmrt1 在雄性決定溫度下表達量升高，在雌性決定溫度下表達量下降[33-34]。用雌二醇對性腺分化期的紅耳龜胚胎進行處理，發(fā)現(xiàn) Dmrt1 的表達水平下降，雌性個體數(shù)量增加。表明外源性雌激素可通過下調(diào) Dmrt1 的表達使胚胎發(fā)生性逆轉(zhuǎn)[35]。已有報道證實

17圖 2.1 表達載體 pET-28a(+)的圖譜及克隆表達區(qū)序列（引自 novagen pET 表達系統(tǒng)說明書）Fig. 2.1 Expression vector pET-28a (+) patterns and cloning expression sequences (from novagenpET expression system manual )

【參考文獻】：
期刊論文
[1]高溫誘導(dǎo)對尼羅羅非魚性別分化及生長的影響[J]. 黨廣成,劉羽清,付佩勝,程安達,劉洋,趙燕,朱永安,宋憬愚,季相山.  漁業(yè)科學進展. 2011(05)
[2]脊尾白蝦熱休克蛋白HSP90基因的原核表達與鑒定[J]. 韓俊英,李健,李吉濤,陳萍,李華.  漁業(yè)科學進展. 2011(05)
[3]棕點石斑魚Piscidin樣肽基因的克隆及其成熟肽的原核表達[J]. 陳大瑋,鄧利,何凡,邱聰齡,馬一見,劉志剛.  漁業(yè)科學進展. 2011(04)
[4]牙鲆dmrt1基因的克隆及其與P450arom基因的組織表達分析[J]. 文愛韻,尤鋒,孫鵬,徐冬冬,吳志昊,馬得友,李軍,張培軍.  海洋科學. 2010(11)
[5]人fgl2凝血酶原酶FRED結(jié)構(gòu)域的原核表達、純化及其凝血活性的鑒定[J]. 李學軍,宋善俊,李永敢,陽文捷,許力,魏華萍.  華中科技大學學報(醫(yī)學版). 2009(05)
[6]羅非魚性別三系配套技術(shù)研究進展[J]. 萬松良,雷曉中,萬珊.  水產(chǎn)科學. 2009(09)
[7]Sex Determination Mechanisms in Fish[J]. ZHANG Quanqi,SUN Xiaohua,QI Jie,WANG Zhigang,WANG Xinglian,WANG Xubo,and ZHAI Teng College of Marine Life Sciences,Ocean University of China,Qingdao 266003,P. R. China.  Journal of Ocean University of China. 2009(02)
[8]基于微衛(wèi)星標記的5個尼羅羅非魚品系的遺傳多樣性分析[J]. 梁宏偉,李忠,羅相忠,王長忠,呼光富,鄒桂偉,楊永銓.  生物多樣性. 2009(01)
[9]半滑舌鰨FTZ-F1 cDNA克隆及表達分析（英文）[J]. 鄧思平,陳松林,劉本偉.  動物學研究. 2008(06)
[10]南方鲇腎細胞系（SMK-Ⅰ）的建立及其細胞骨架的研究[J]. 霍靜,洪錫鈞,王志堅,劉小紅,王詠梅.  西南大學學報(自然科學版). 2007(12)

博士論文
[1]尼羅羅非魚性別決定機制和性別相關(guān)的分子標記[D]. 楊東.華中農(nóng)業(yè)大學 2006



本文編號：3338041