無乳鏈球菌（Streptococcus agalctiae）,亦稱 B 群鏈球菌（Group B Streptococcus,GBS）,具有廣泛的宿主感染范圍,不僅能引起新生兒腦膜炎及肺炎和奶牛乳腺炎,還可引致魚類腦膜炎和敗血癥。近年來,無乳鏈球菌已成為魚類重要致病菌之一,其傳染性強(qiáng),死亡率高,給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成慘重經(jīng)濟(jì)損失,嚴(yán)重制約了我國(guó)羅非魚養(yǎng)殖業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn),無乳鏈球菌對(duì)魚類的致死率可達(dá)100%,但其致病機(jī)制尚不清楚。因此,研究其致病機(jī)制對(duì)防控魚類無乳鏈球菌病至關(guān)重要。1魚源無乳鏈球菌小鼠血腦屏障開放評(píng)估模型的建立本試驗(yàn)篩選出一株產(chǎn)β-半乳糖苷酶大腸桿菌M5,毒力測(cè)定得知其對(duì)小鼠半數(shù)致死量（LD50）>2×109CFU;各臟器細(xì)菌載量分析表明,該菌不能穿透血腦屏障（BBB）進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng),因此該菌可作為小鼠血腦屏障開放程度的指示菌。在此基礎(chǔ)上,對(duì)小鼠腹腔注射l00μL濃度為103CFU/mL的無乳鏈球菌GD201008-001,并于注射后3h、6h、9h和12h,通過尾靜脈注射大腸桿菌M5 100μL（2×108CFU）,于5min后眼球采血并處死小鼠,無菌取腦,涂... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 無乳鏈球菌致病機(jī)制研究進(jìn)展
        1 無乳鏈球菌的致病性
            1.1 對(duì)人的致病性
            1.2 對(duì)奶牛的致病性
            1.3 對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的致病性
        2 毒力因子及其致病作用
            2.1 GBS表面蛋白
            2.2 β-溶血素
            2.3 透明質(zhì)酸酶
            2.4 脂磷壁酸
        3 無乳鏈球菌與宿主的互作機(jī)制
            3.1 無乳鏈球菌與宿主細(xì)胞互作
            3.2 無乳鏈球菌感染動(dòng)物模型的建立
        4 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
第二篇 實(shí)驗(yàn)研究
    第二章 魚源無乳鏈球菌小鼠血腦屏障開放評(píng)估模型的建立
        1 材料與方法
            1.1 菌株及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 儀器和試劑
            1.3 大腸桿菌M5的篩選
            1.4 大腸桿菌M5對(duì)小鼠LD50的測(cè)定
            1.5 大腸桿菌M5在小鼠血液中的代謝速率測(cè)定
            1.6 大腸桿菌M5對(duì)BBB開放程度的指示作用測(cè)定
        2 結(jié)果
            2.1 大腸桿菌M5的篩選
            2.2 大腸桿菌M5對(duì)小鼠LD50
            2.3 大腸桿菌M5在小鼠血液中的代謝速率測(cè)定
            2.4 M5對(duì)小鼠BBB開放程度的指示作用
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第三章 無乳鏈球菌透明質(zhì)酸酶的表達(dá)及其對(duì)小鼠的致病作用
        1 材料與方法
            1.1 菌株、質(zhì)粒和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 試劑
            1.3 引物的設(shè)計(jì)與合成
            1.4 hylB份基因的克隆及原核表達(dá)載體的構(gòu)建
            1.5 重組蛋白的表達(dá)與純化
            1.6 重組蛋白的Western blot檢測(cè)
            1.7 重組蛋白活性檢測(cè)
            1.8 重組蛋白對(duì)小鼠攻毒試驗(yàn)
        2 結(jié)果
            2.1 hylB基因PCR擴(kuò)增和重組質(zhì)粒的雙酶切
            2.2 重組蛋白的表達(dá)及純化
            2.3 重組蛋白的Western blot檢測(cè)
            2.4 Hyl重組蛋白降解透明質(zhì)酸的活性檢測(cè)
            2.5 重組蛋白注射后小鼠的臨床表現(xiàn)
            2.6 重組蛋白注射后小鼠的組織病理學(xué)變化
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第四章 魚源無乳鏈球菌cas9基因缺失株和互補(bǔ)株的構(gòu)建
        1 材料與方法
            1.1 菌株、質(zhì)粒與引物
            1.2 儀器和試劑
            1.3 cas9基因缺失載體的構(gòu)建
            1.4 cas9基因缺失株的構(gòu)建
            1.5 目的基因互補(bǔ)株的構(gòu)建
            1.6 缺失株和互補(bǔ)株的熒光定量PCR鑒定
            1.7 遺傳穩(wěn)定性分析
        2 結(jié)果
            2.1 無乳鏈球菌cas9基因上下游臂的PCR擴(kuò)增
            2.2 基因缺失質(zhì)粒的構(gòu)建
            2.3 基因互補(bǔ)質(zhì)粒的構(gòu)建
            2.4 基因缺失株的PCR鑒定
            2.5 熒光定量PCR分析cas9基因的表達(dá)
            2.6 遺傳穩(wěn)定性分析
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第五章 魚源無乳鏈球菌cas9基因缺失株生物學(xué)特性分析
        1 材料與方法
            1.1 菌株、細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 主要試劑和儀器
            1.3 特性分析
        2 結(jié)果
            2.1 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
            2.2 小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬實(shí)驗(yàn)
            2.3 小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附試驗(yàn)
            2.4 斑馬魚LD_(50)的測(cè)定
            2.5 巨噬細(xì)胞胞內(nèi)存活試驗(yàn)
            2.6 小鼠的存活時(shí)間比較
            2.7 cas9基因缺失株中hylB基因表達(dá)水平的檢測(cè)
            2.8 cas9基因缺失株的Hyl活性檢測(cè)
            2.9 不同菌株和Hyl致小鼠血腦屏障BBB開放程度的檢測(cè)
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]中國(guó)南方地區(qū)羅非魚無乳鏈球菌的分子流行病學(xué)研究[J]. 郭玉娟,張德鋒,樊海平,陳學(xué)年,李彤彤,李愛華.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2012(03)
[3]2型豬鏈球菌層粘連蛋白結(jié)合蛋白的原核表達(dá)及免疫原性檢測(cè)[J]. 潘秀珍,邵珠卿,李先富,劉文靜,王長(zhǎng)軍,唐家祺.  中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào). 2011(07)
[4]中國(guó)奶牛乳房炎防治研究進(jìn)展[J]. 宋亞攀,楊利國(guó).  中國(guó)奶牛. 2010(12)
[5]羅非魚出口比較優(yōu)勢(shì)與貿(mào)易結(jié)構(gòu)耦合性分析[J]. 王斌,李曉鐘.  世界農(nóng)業(yè). 2010(02)
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本文編號(hào)：3330211