草魚為我國主要的淡水養(yǎng)殖魚類。隨著養(yǎng)殖業(yè)的高密度化,病原微生物引起的病害頻繁爆發(fā),給養(yǎng)殖業(yè)帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。草魚呼腸孤病毒（Grass Carp Reovirus,GCRV）引起的出血病是對草魚危害最嚴(yán)重的病毒性疾病。出血病易感染、死亡率高,極大地影響和危害魚種的健康和存活,一直以來對草魚養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展造成影響。目前,水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)主要利用農(nóng)藥和獸藥來防治病害的發(fā)生。然而,有效的、廣譜性的藥物仍然缺乏,其中抗病毒藥物種類更是有限,并且藥效極易受到病毒變異和耐藥性出現(xiàn)的影響。中草藥具有低毒、易降解、環(huán)境友好、資源豐富、使用歷史悠久等優(yōu)點(diǎn),是安全無公害水產(chǎn)原料藥的理想來源。本研究首先從中草藥中篩選出具有抗GCRV活性的品種,隨后對其主要的活性化合物進(jìn)行分離鑒定,獲得具有較好抗GCRV活性的單體化合物;通過體內(nèi)體外的感染試驗,評價其抗GCRV的活性效果;之外,本研究探索了單體化合物抗病毒引起的細(xì)胞凋亡機(jī)理和與宿主細(xì)胞之間的作用關(guān)聯(lián),以期為開發(fā)水產(chǎn)抗病毒藥物提供理論基礎(chǔ)。本研究取得結(jié)果如下:1.中草藥及單體化合物抗GCRV活性篩選選取30種中草藥制備成浸膏,利用MTT法測定浸膏對CIK細(xì)胞的毒性... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

病毒識別機(jī)制（Akiraetal.2006）

安全濃度的上限，DMSO在溶液中的比例在千分之二以內(nèi)即為安全濃度，最高使用比例為百分之一。表 2-4 DMSO對CIK細(xì)胞的毒性Table 2-4 Toxicity of DMSO on CIK cellsDMSO 含量 細(xì)胞活力百分之十 49.78%百分之一 85.51%千分之五 87.68%千分之二 95.33%千分之一 98%-102%2.2.2 GCRV 感染后病毒片段的時序表達(dá)細(xì)胞樣品收取之后，經(jīng)RNA提取，反轉(zhuǎn)錄，利用PCR進(jìn)行半定量檢測GCRV片段的表達(dá)情況。如圖2-1，在感染2 h，病毒條帶已經(jīng)可以檢測。早期研究表明，從感染4 h的切片可以看到脫去部分外層衣殼的不完整病毒粒子，為病毒早期轉(zhuǎn)錄階段。因此，在后續(xù)試驗中，選取4 h作為病毒的感染時間。

圖 2-2 植物浸膏對 CIK 細(xì)胞的毒性作用。（A）正常 CIK 細(xì)胞；（B）安全濃度的浸膏對 CIK 細(xì)胞的作用；（C）高濃度的浸膏對 CIK 細(xì)胞的毒性作用。Fig. 2-2 Toxicity of plant extracts on CIK cells. (A) Normal CIK cells; (B) Effect on CIK cells by safeconcentration of extracts; (C) Toxicity on CIK cells by high concentration of extracts.表 2-5 本文中使用的植物，提取部位，CIK細(xì)胞中半數(shù)致死濃度和安全濃度Table 2-5 Plants used in this study, organic phase, CC50and safe concentration in CIK cells植物種類 提取部位 試劑 CC50（mg/L）安全濃度（mg/L）雞骨草 Abrus cantoniensis Hance. 全草 甲醇 370.93±23.63 224.49±16.24雞骨草 Abrus cantoniensis Hance. 全草 氯仿 332.02±14.79 198.82±10.88雞骨草 Abrus cantoniensis Hance. 全草 乙酸乙酯 389.56±13.08 235.38±9.41香元 Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg. 樹枝 甲醇 470.10±16.16 256.53±11.58艾葉 Artemisia argyi Lévl. et Vant. 全草 氯仿 39.08±6.29 16.88±1.89乳香 Boswellia carterii Birdw. 樹脂 氯仿 70.28±9.11 25.64±2.93鴉膽子 Brucea javanica (L.) Merr. 種子 甲醇 65.37±9.20 33.21±3.14肉桂 Cinnamomum cassia Presl. 樹枝 甲醇 184.03±7.21 127.56±5.89

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3297303