地球自轉(zhuǎn)導致了晝夜交替變化。從低等單細胞生物到高等動物人類，對這種晝夜循環(huán)的長期適應而演化出的記時機制即生物鐘。生物鐘是指大約24小時的周期性生理和行為變化，包括飲食、睡眠和體溫等。經(jīng)典的生物鐘反饋環(huán)路為Clock和Bmal蛋白形成異二聚體，隨后激活下游per和cry基因的表達，Per和Cry蛋白也形成異二聚體從而抑制Clock：Bmal蛋白復合物的活性。目前對于核心生物鐘基因調(diào)控機制的研究主要集中在轉(zhuǎn)錄水平以及翻譯后修飾，對于其在轉(zhuǎn)錄后水平的研究還知之甚少。MicroRNAs（miRNAs）是一類約22個堿基組成的非編碼RNA，可以與靶基因的3’端非翻譯區(qū)（3’UTR）結(jié)合從而影響信使RNA（mRNA）的穩(wěn)定性或者抑制其翻譯。miRNAs調(diào)節(jié)體內(nèi)許多生物化學過程，這其中就包括生物鐘。前人的一項研究發(fā)現(xiàn)小鼠的miR-219受生物鐘調(diào)控，敲降miR-219導致小鼠運動周期加長，然而miR-219調(diào)控生物鐘的機制仍然不明。斑馬魚擁有三個miR-219，分布在三個染色體上。我們采用原位雜交的方法發(fā)現(xiàn)斑馬魚的三個miR-219呈現(xiàn)不同圖式的節(jié)律性表達。在體外細胞實驗中，我們發(fā)現(xiàn)miR-219的... 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省 211工程院校

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【學位級別】：碩士

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生物鐘環(huán)路Fig.l-2modelofciYCadianclockfeedbackloop15斑馬魚生物鐘:

第三章 實驗結(jié)果及分析 miR-219 通過抑制 bmal1b 調(diào)控斑馬魚生物鐘第三章 實驗結(jié)果及分析3.1 在斑馬魚體內(nèi) miR-219 是振蕩表達的3.1.1 利用原位雜交檢測miR-219前體的表達正如在miRNA的產(chǎn)生中所述，它的成熟體是一段約22個堿基的單鏈非編碼RNA。Yoontae Lee的研究表明，microRNA的轉(zhuǎn)錄也是由RNA聚合酶Ⅱ催化啟動的。它的產(chǎn)生有三個階段，分別是初級microRNA(primary miRNA)，前體microRNA（precursor miRNA），以及成熟體 microRNA (mature miRNA)�，F(xiàn)行的運用比較多的就是使用LNA修飾的 microRNA成熟體探針對其進行檢測，這種方法雖然特異性很好，但是有幾個問題。首先這種方法非常昂貴，對每一種 microRNA都必

果及分析 miR-219 通過抑制 bmal1b 調(diào)控斑馬魚生物鐘30圖3-3 整體原位雜交顯示pri-miR-219-1, pri-miR-219-2, pri-miR-219-3都是節(jié)律表達的Fig.3-3 Whole mount in situ hybridization of pri-miR-219-1, pri-miR-219-2,pri-miR-219-3 showed rhythmic expression of primary miRNA


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