目的:白細(xì)胞介素-23（interleukin-23,IL-23）是一種炎性細(xì)胞因子,主要由活化的樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和T細(xì)胞分泌,在生物體抗感染免疫應(yīng)答中起到重要的生理及病理作用。IL-23是由p19和p40兩個亞基通過二硫鍵相連接形成的異源二聚體,只有當(dāng)p19和p40共同表達(dá)才具有生物學(xué)功能。多種魚類已鑒定出三種p40同源基因p40a/b/c（p40a、p40b、p40c）,但它們是否都能與p19形成異源二聚體,目前還沒有確鑿的證據(jù)。眾所周知,草魚是中國“四大家魚”之一,是我國重要的淡水養(yǎng)殖魚類,但由于其易受各種病原菌和病毒的危害,引起炎癥反應(yīng)甚至發(fā)生聚集性死亡,導(dǎo)致養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重。本研究旨在明確p40a/b/c與p19基因在正常草魚組織中的表達(dá)差異、對細(xì)菌性感染的應(yīng)答反應(yīng),以及它們之間形成異源二聚體的特征,預(yù)期為魚類腸道炎癥的病理機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。方法:（1）通過NCBI獲取草魚p19及p40a/b/c的完整mRNA序列,設(shè)計(jì)相應(yīng)qPCR引物,運(yùn)用qPCR技術(shù)檢測上述基因在健康草魚以及使用嗜水氣單胞菌腹腔刺激草魚24 h后各組織中的轉(zhuǎn)錄水平;另采用腹腔注射和肛灌兩種... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．?ＩＬ－１２家族信號通路（引自Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，?２０１８年）??Ｆｉｇｕｒｅ?１．?ＩＬ－１２?ｆａｍｉｌｙ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙ?（Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，?２０１８）??３??

?■??ｇ?５００ＬＩ?Ｉ?ｇ?１?．?ｉ?■?ｊ．１??ｉｉｙｊｕｕＨｉｕｊｕｉ??ｐ－ａｃｔｍ?ｕｎＤｎＨｎｍＤＢｍｉｓｎＢｉ?ｐ－ａｃｔ＾ｎＥ３Ｑｄ！ＱＨＥＩ３ＱＱＢＳ３＾２ＤＥ２??Ｐｉ９?ｐ?物■ｈｈｈｈｈｈｈｈｈｈｉ??８００１?ｐ４０ｂ?２０００－１?ｐ４０ｃ??６００－?Ｔ?￥?１５００－?ｉ??ｉｉＡ?ｉ?ｉ．．ｉ?ｉｄｉ?Ｉ?ｉｌ＾ｉ??Ｉ?ＩＩｌＵＩＩＩｉ?＿??Ｐ－ａｃｔｉｎ?Ｐ－ａｃｔｉｎ??ｐ４〇ｂ?ｍｍｕｍｉｉｉｉｍｍ??圖１－２正常草魚各組織和；７／９ｍＲＮＡ相對表達(dá)水平（ｎ＝３）??Ｆｉｇ．?１－２?Ｒｅｌａｔｉｖｅａｎｄ?ｐ／９?ｍＲＮＡ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｉｎ?ｎｏｒｍａｌ?ｇｒａｓｓ?ｃａｒｐ??ｔｉｓｓｕｅｓ?（ｎ＝３）??２．２嗜水氣單胞菌感染對草魚組織中和；７Ｊ９基因表達(dá)的影響??２．２．１嗜水氣單胞菌感染２４?ｈ后草魚組織中；＾０ａ／＆／ｃ和；ｍＲＮＡ相對表達(dá)??水平??２８°Ｃ養(yǎng)殖條件下，腹腔注射嗜水氣單胞菌２４?ｈ后，肉眼可見多數(shù)草魚游動??緩慢，幾乎不攝食，體表較多出血點(diǎn)出現(xiàn)（尤其是胸鰭處），鰓絲充血，有少量??腹水。??利用實(shí)時熒光定量ＰＣＲ檢測，Ｗ〇ａ／６／ｃ和在尾鰭、表皮、肌肉、腦、??鰓、胸腺、脾臟、肝臟、腸道、體腎、頭腎和心臟等１２個組織及血液中的表達(dá)??量也發(fā)生了變化。以腹腔注射等量ＰＢＳ緩沖液為對照組，腹腔注射嗜水氣單胞??２２??

第一章?萆魚ＩＬ－２３不同亞基對細(xì)菌性感染的應(yīng)答及其二聚化特征??顯差異。雖然在肛灌第Ｉｄ均顯著上調(diào)，但第３ｄ、７?ｄ的表達(dá)變化不同，第３ｄ??除了?仍然高于對照組表達(dá)以夕卜祁ｆｌ／階則顯著下調(diào)至對照組以下，到第７?ｄ，??與又顯著上調(diào)，而；你與ＷＯｃ則只恢復(fù)到正常水平。??圖１－５顯示的結(jié)果表明，草魚／？７９與；對嗜水氣單胞菌的全身感染與??局部感染的免疫應(yīng)答機(jī)制不同。在４個基因中，ｐ／９與；＾此對嗜水氣單胞菌的??免疫應(yīng)答一致，與；７扣／７及；的應(yīng)答有所差異；；他及；的應(yīng)答趨勢一致，??但／７洲＜：的應(yīng)答略弱于冊。??Ｇ３ＩＰ?１?ｄ?驗(yàn)?ＡＩ?１?ｄ??Ｑ?ＩＰ３ｄ?Ｅ３?ＡＩ３ｄ??〇?ＩＰ?７?ｄ?□?Ａｌ?７?ｄ??４０??３５－?料??３０－?＊＊??＾?２５－?＊＊?＿?＿??Ｉ?２〇－?１??＿?圓?Ｌｉ?？?ｍ??ｉ：ｉ?｜：ｉｓ?１?ｉ??＋—二；―…二?ｆｃｎｔ，畫?ｉｒｒ??ｐｌ９?ｐ４Ｄａ?ｐ４０ｂ?ｐ４０ｃ??圖１－５嗜水氣單胞菌不同感染方式對腸道和／７／９ｍＲＮＡ相對表達(dá)水平??的影響（ｎ＝３）??注：ＩＰ：腹腔注射：ＡＩ：肛灌注射：＊，與對照組或不同時間之間的差異顯著（ｐ＜０．０５）；?＊＊，??與對照組或不同時間之間的差異極顯著（ｐ＜０．０１）??Ｆｉｇ．?１－５?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?ｒｏｕｔｅｓ?ｏｆ?Ａ．?ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｍＲＮＡ??ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｐ４０ａ／ｂ／ｃ?ａｎｄ?ｐｌ９?ｇｅｎｅｓ?ｉｎ?ｇｒａｓｓ?ｃａｒｐ?ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ?（ｎ＝３）??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]白細(xì)胞介素-23 p19 RNA干擾對結(jié)腸炎小鼠模型的治療作用[J]. 任渝棠,姜泊,林欣.  胃腸病學(xué). 2019(01)
[2]草魚干擾素3蛋白多克隆抗體制備及其應(yīng)用[J]. 范成堅(jiān),蘇博洋,蘇建國.  淡水漁業(yè). 2019(01)
[3]IL-23/Th17通路與支氣管哮喘的關(guān)系[J]. 張穎麗,黃花榮.  新醫(yī)學(xué). 2018(10)
[4]IL-39:IL-12家族的新成員[J]. 潘秀和,劉超波,孫俊,李燕,李明才.  生命的化學(xué). 2016(04)
[5]一種“高性價比”切膠純化原核表達(dá)蛋白的方法[J]. 高慎陽,查恩輝,王珅,周鐵忠,李慧.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2010(22)
[6]免疫共沉淀技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 郭純.  中醫(yī)藥導(dǎo)報. 2007(12)
[7]以三維熒光反卷積顯微技術(shù)研究活體細(xì)胞中分泌囊泡的空間分布[J]. 李棟棟,郭學(xué)彬,瞿安連,徐濤.  生物化學(xué)與生物物理學(xué)報. 2003(07)
[8]Immunological Detection of Arbutin[J]. 董敏,李國富,李津,周飛,公衍道,張秀芳,趙南明.  Tsinghua Science and Technology. 1999(03)
[9]致病性嗜水氣單胞菌及其所致魚病綜述[J]. 陸承平.  水產(chǎn)學(xué)報. 1992(03)
[10]草魚腎組織細(xì)胞系CIK的建立及其生物學(xué)特性[J]. 左文功,錢華鑫,許映芳,杜森英,楊先樂.  水產(chǎn)學(xué)報. 1986(01)



本文編號：3287317