發(fā)布時(shí)間：2021-07-06 14:57

　　去除卵膜及受精膜是成功制備棘皮動(dòng)物染色體的關(guān)鍵步驟。為找到高效去除海膽卵膜與受精膜的方法,使用三氮唑（2 g/L）、鹽酸海水溶液（pH 4.75）、二硫蘇糖醇(3×10^–3 mol/L)和對(duì)氨基苯甲酸(3×10^–3 mol/L)等4種化學(xué)試劑分別對(duì)中間球海膽（Strongylocentrotus intermedius）卵子及各時(shí)期胚胎進(jìn)行處理,比較了不同試劑、處理時(shí)間或處理時(shí)期的去膜率、去膜后受精率和胚胎畸形率等指標(biāo)的差異;利用常規(guī)空氣干燥法對(duì)經(jīng)去膜處理的囊胚期胚胎制備染色體,并進(jìn)行核型分析。結(jié)果表明,三氮唑、鹽酸海水溶液、二硫蘇糖醇和對(duì)氨基苯甲酸等4種試劑對(duì)中間球海膽的卵膜和受精膜均有去除效果,其中2g/L三氮唑處理未受精卵30min的去膜率為85.50%,去膜后受精率為97.25%,畸形率為1.75%,去膜效果優(yōu)于其余處理組。利用經(jīng)該方法去膜后的早期囊胚進(jìn)行染色體制備效果較好,獲得了61個(gè)分散良好、形態(tài)完整的染色體中期分裂相。核型分析表明,中間球海膽的二倍體染色體數(shù)為2n=42,核型公式為:2n=20m+20sm+2st, NF=84,... 

【文章來源】：中國(guó)水產(chǎn)科學(xué). 2020,27(09)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【部分圖文】：

不同試劑及處理時(shí)間處理的中間球海膽未受精卵的去膜率上標(biāo)不同大寫字母表示同一處理時(shí)間內(nèi),不同試劑間去膜率差異顯著(P<0.05);上標(biāo)不同小寫字母表示同一試劑處理組不同處理時(shí)間去膜率差異顯著(P<0.05).

不同試劑和不同處理時(shí)間處理未受精卵后的胚胎畸形率見圖3。使用三氮唑、鹽酸海水溶液、二硫蘇糖醇和對(duì)氨基苯甲酸處理未受精卵均使其胚胎畸形率顯著升高(P<0.05);在10 min、20 min和30 min 3個(gè)處理時(shí)間組,三氮唑組畸形率分別為(2.75?0.96)%、(5.50?1.92)%和(1.75?0.96)%,均為4種試劑中最低,且均顯著低于鹽酸溶液和二硫蘇糖醇組(P<0.05)。三氮唑處理20 min組畸形率顯著高于對(duì)照組(P<0.05),處理10 min和30 min組與對(duì)照組間無顯著差異(P>0.05)。綜合上述結(jié)果得出,對(duì)于處理未受精卵來說,使用2 g/L的三氮唑處理30 min的去膜效果最好,去膜率為85.50%,去膜后受精率為97.25%,畸形率為1.75%。

4種試劑處理下,不同發(fā)育時(shí)期胚胎的去膜率見圖4。除在受精后60 min和16細(xì)胞期外,其余各期使用三氮唑的去膜率均為最高,而在各發(fā)育時(shí)期,使用鹽酸溶液處理胚胎去膜率均為最低。使用三氮唑處理受精后10 min后的胚胎去膜率最高,達(dá)到(25.75?1.71)%,顯著高于其余各發(fā)育時(shí)期(P<0.05)。使用鹽酸溶液處理16細(xì)胞期胚胎的去膜率最高,為(6.25?3.50)%,顯著高于其余各發(fā)育時(shí)期(P<0.05);使用二硫蘇糖醇處理16細(xì)胞期胚胎的去膜率最高,為(16.25?1.00)%,顯著高于其余各發(fā)育時(shí)期(P<0.05);使用對(duì)氨基苯甲酸處理受精后60 min胚胎去膜率最高,為(14.25?2.50)%,但僅顯著高于受精后10 min期胚胎、受精后20 min期胚胎、4細(xì)胞期胚胎和16細(xì)胞期胚胎(P<0.05)。4種試劑處理下,不同發(fā)育時(shí)期胚胎的畸形率見圖5。各胚胎發(fā)育期使用三氮唑處理后的畸形率均為最低,使用對(duì)氨基苯甲酸處理從受精后10 min至2細(xì)胞期等各期胚胎的畸形率均為最高。使用三氮唑處理16細(xì)胞期胚胎畸形率最低,僅為(2.00?0.82)%,顯著低于受精后20 min期、受精后30 min期和受精后60 min期(P<0.05);使用鹽酸溶液處理受精后10 min期胚胎的畸形率最低,為(20.00?8.17)%,顯著低于受精后40 min、受精后50 min、受精后60 min、2細(xì)胞、4細(xì)胞和16細(xì)胞期胚胎(P<0.05);使用二硫蘇糖醇處理8細(xì)胞期胚胎的畸形率最低,為(11.50?2.38)%,顯著低于其他各胚胎發(fā)育期(P<0.05);使用對(duì)氨基苯甲酸處理16細(xì)胞期胚胎的畸形率最低,為(1.75?1.26)%,顯著低于除8細(xì)胞期外的其余各胚胎發(fā)育期(P<0.05)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]中間球海膽與馬糞海膽雜交家系早期生長(zhǎng)比較和親本配合力估計(jì)[J]. 張偉杰,韓奮杰,陳順,劉奎,周秘,王寶鋒,王中,劉明泰,湛垚垚,經(jīng)晨晨,常亞青.  中國(guó)水產(chǎn)科學(xué). 2017(05)
[2]牙鲆雌核發(fā)育研究進(jìn)展[J]. 劉海金,侯吉倫,劉奕.  中國(guó)水產(chǎn)科學(xué). 2017(04)
[3]太平洋鱈染色體核型及銀染分析[J]. 范瑞,姜志強(qiáng),李雅娟,高小強(qiáng),錢聰,高敏.  水生生物學(xué)報(bào). 2014(01)
[4]馬糞海膽的染色體制備及組型分析[J]. 常亞青,曹潔,張彥嬌,丁君.  大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào). 2006(03)
[5]人工雌核發(fā)育誘導(dǎo)太平洋牡蠣四倍體的研究[J]. 李雅娟,李霞,毛連菊,丁君.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2006(03)
[6]光棘球海膽的主要卵黃蛋白cDNA序列分析[J]. 周遵春,包振民,董穎,赫崇波,韓家波,王麗梅.  中國(guó)水產(chǎn)科學(xué). 2006(03)
[7]棘皮動(dòng)物染色體的研究進(jìn)展[J]. 周遵春,董穎,赫崇波,宋倫.  水產(chǎn)科學(xué). 2005(12)
[8]中間球海膽雌核發(fā)育單倍體胚胎的初步研究[J]. 丁君,常亞青,曹學(xué)彬,張玉勇.  大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào). 2004(01)
[9]紫外線照射對(duì)光棘球海膽精子遺傳失活和授精能力的影響[J]. 高悅勉,孫祥山,劉馨.  水產(chǎn)科學(xué). 2003(06)
[10]蝦夷馬糞海膽體腔細(xì)胞的類型及功能[J]. 李霞,王斌,劉靜,孫健.  中國(guó)水產(chǎn)科學(xué). 2003(05)

碩士論文
[1]太平洋牡蠣四倍體育種研究[D]. 李慷均.中國(guó)海洋大學(xué) 2004



本文編號(hào)：3268456