擬態(tài)弧菌（Vibrio mimicus, Vm）是一種廣宿主病原菌,可感染各種水產(chǎn)養(yǎng)殖動物引起腹水病,嚴(yán)重威脅我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。細(xì)菌黏附是病原菌引發(fā)感染的關(guān)鍵起始步驟,其實(shí)質(zhì)是細(xì)菌黏附素與宿主受體之間相互作用,使病原菌選擇性地定植于宿主細(xì)胞表面,繼而生長繁殖,產(chǎn)生毒力因子或侵入深部,損傷組織細(xì)胞,導(dǎo)致疾病的發(fā)生。從分子水平探明特定病原菌的黏附素及其關(guān)鍵功能域,設(shè)計(jì)和創(chuàng)制基于關(guān)鍵功能域的新型黏附拮抗劑,是目前細(xì)菌性疾病防治的新策略。我們的前期研究結(jié)果表明：擬態(tài)弧菌外膜蛋白U （OmpU）是一種較為保守的抗原蛋白,具有6個免疫優(yōu)勢B細(xì)胞線性表位,該蛋白N末端含有黏附素基序,抗OmpU抗體可抑制細(xì)菌對人源上皮細(xì)胞的黏附,推測OmpU可能是擬態(tài)弧菌的黏附素。從前述重要的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象出發(fā),本研究以鯉魚上皮瘤細(xì)胞（Epithelioma Papulosum Cyprinid, EPC）作為細(xì)胞黏附模型,建立檢測細(xì)菌或蛋白黏附特性的技術(shù)平臺,確證OmpU蛋白的黏附功能,深入解析其受體關(guān)鍵結(jié)合域,從而為創(chuàng)制新型黏附拮抗劑提供理論支持。主要研究內(nèi)容包括：1擬態(tài)弧菌的黏附特性測定以EPC細(xì)胞作為細(xì)胞黏... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－３?ＥＰＣ細(xì)胞形態(tài)（Ｘ?２００）??Ｆｉｇ．?２－３?Ｃｅｌｌｕｌａｒ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ＥＰＣ?ｃｅｌｌｓ?（ｘ２００）??

２．２．３化學(xué)因子對擬態(tài)弧茵黏附性的影響??用糖類和蛋白酶類等化學(xué)因子預(yù)處理菌體后，進(jìn)行細(xì)胞黏附試驗(yàn)，結(jié)果顯示不同??化學(xué)因子對擬態(tài)弧菌黏附活性的影響不同。由表２－２和圖２－６可（＾看出膜酶、蛋白酶Ｋ、??半郭糖完全阻斷擬態(tài)弧菌０４－１４菌株對ＥＰＣ細(xì)胞的黏附，與細(xì)菌黏附對照組差異極顯??著（ｐ＜０．００１）；細(xì)菌經(jīng)就糖、藤糖、葡萄糖、甘露糖和麥芽糖處理后對ＥＰＣ細(xì)胞的平??均黏附數(shù)分別為?１８．３３＋４．９１、１９．０?＋?４．７４、１９．９?＋?４．４９、１６．４?＋?５．１２?和?１８．５?＋?４．１３，與??細(xì)菌黏附對照組（２２．２?＋?４．６）差異不昆著扭＞０．０５）。對膚酶和蛋白酶Ｋ處理敏感，提??示擬態(tài)弧菌的黏附素為蛋白質(zhì)；對半乳糖敏感，說明與該黏附素相結(jié)合的受體結(jié)構(gòu)中??存在寡糖鏈結(jié)構(gòu)，其中的半乳糖殘基決定其特異性。??２．３?■基因巧光原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與表達(dá)??２．３．１化？／平基因的ＰＣ民擴(kuò)增??ｙｘ陽ＧＦＰ－Ｎ１為模板，Ｐ１、Ｐ２為引物ＰＣＲ擴(kuò)增巧堪因，結(jié)果如圖２－７所示，??在約７３５?ｂｐ處出現(xiàn)一明亮的ＤＮＡ條帶，大小與己知￡ＧＥＰ基因的分子量大小相符。??２．３．２?Ｏｗｐｔ／基因黃光原核表達(dá)質(zhì)粒的鑒定??用說腳ＨＩ／＆ＷＩ雙酶切ＥＧ／乎基因片段和重組表達(dá)質(zhì)粒ｐＥＴ－３２ａ－ＯｍｐＵ

趣魚上皮瘤細(xì)胞巧ＰＣ）用含１０％胎牛血清的Ｍ１９９培養(yǎng)液，在飽和濕度２８°Ｃ、５％??Ｃ化培養(yǎng)箱培養(yǎng)２仙后，倒置相差思微鏡下即可見細(xì)胞呈單層貼壁生長，８０％融合，培??養(yǎng)３化長滿，細(xì)胞形態(tài)卓＿多角形或不規(guī)則形（圖２－１，２－２和２－３）。??國圍??圖２－１?ＥＰＣ細(xì)胞形態(tài)（Ｘ４０）?圖２－２?ＥＰＣ細(xì)胞形態(tài)（Ｘ?１００）??Ｆｉｇ．２－１?Ｃｅｌｌｕｌａｒ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆＥＰＣ?ｃｅｌｌｓ?｛＞＜４０）?Ｆｉｇ．２－２?Ｃｅｌｌｕｌａｒ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ＥＰＣ?ｃｅｌｌｓ?（＞＾１００）??ｊ．’Ｘ；乂知??圖２－３?ＥＰＣ細(xì)胞形態(tài)（Ｘ?２００）??Ｆｉｇ．?２－３?Ｃｅｌｌｕｌａｒ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ＥＰＣ?ｃｅｌｌｓ?（ｘ２００）??２２??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬鼻支原體黏附宿主細(xì)胞間接免疫熒光檢測方法的建立[J]. 紀(jì)燕,熊祺琰,韋艷娜,馬慶紅,白方方,馮志新,劉茂軍,邵國青.  中國人獸共患病學(xué)報(bào). 2014(03)
[2]創(chuàng)傷弧菌外膜蛋白OmpU的基因克隆與表達(dá)[J]. 李素一,吳唯維,李盼,柯翎,許斌福,林晨韜,林天龍,陳敘.  福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2013(06)
[3]流式細(xì)胞術(shù)測定蠕形螨基因組大小[J]. 蘇磊,郭淑玲,馮玉新,肖克源,朱曉麗,袁方曙.  山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2013(06)
[4]Antiflammin-1與NIH 3T3細(xì)胞的結(jié)合特性[J]. 李晨,史小娟,馮丹丹,李金鳳,漢建忠,羅自強(qiáng).  湖南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2013(01)
[5]噬菌體展示肽庫篩選VPAC1高親和力結(jié)合多肽[J]. 唐波,黃定德,鄭磊,任浩,李前偉.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2013(01)
[6]大鯢虹彩病毒理化及生物學(xué)特性研究[J]. 高正勇,曾令兵,肖漢兵,張輝,孟彥,肖藝,徐進(jìn).  淡水漁業(yè). 2012(05)
[7]尿路致病性大腸埃希菌外膜蛋白T敲除株的構(gòu)建及功能評價(jià)[J]. 趙鐵,方幸幸,劉曉露,彭亮,龍敏,張文炳,羅軍,曹虹.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(07)
[8]動物源產(chǎn)腸毒素大腸桿菌（ETEC）黏附素研究進(jìn)展[J]. 周虹,朱軍,朱國強(qiáng).  微生物學(xué)報(bào). 2012(06)
[9]流式細(xì)胞術(shù)分析神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者腦脊液T淋巴細(xì)胞亞群[J]. 蔡蓓,馮偉華,李立新,王蘭蘭.  檢驗(yàn)醫(yī)學(xué). 2012(05)
[10]炭疽芽胞桿菌BslA（260-652）蛋白的表達(dá)純化與黏附功能鑒定[J]. 馬坤,王艷春,陶好霞,董杰,曹誠,張部昌,劉純杰.  微生物學(xué)報(bào). 2012(03)

博士論文
[1]肝癌細(xì)胞系HepG2特異性結(jié)合短肽的篩選及其特異性研究[D]. 李文涵.華中科技大學(xué) 2007
[2]重組人Ⅱ型膠原250-270多肽的鑒定及其特異性免疫調(diào)節(jié)作用的研究[D]. 王宏坤.第四軍醫(yī)大學(xué) 2006

碩士論文
[1]初免加強(qiáng)免疫增強(qiáng)肺炎鏈球菌表面黏附素（psaA）核酸疫苗免疫原性研究[D]. 章德廣.復(fù)旦大學(xué) 2009



本文編號：3267025