鯉春病毒血癥病毒（Spring Viremia of Carp Virus,SVCV）為單股負鏈RNA病毒,可引起鯉發(fā)生大規(guī)模死亡,給漁業(yè)帶來巨大經濟損失。SVCV基因組編碼5種結構蛋白,即核蛋白N（Nueleoprotein）、磷酸化蛋白P（Phosphoprotein）、基質蛋白M（Marxprotein）、糖蛋白G（Glycoprotein）和RNA聚合酶L（Polymerase）。其中核蛋白N是組成核衣殼結構的關鍵蛋白,且表達量最大,在病毒的基因轉錄及調控中具有重要作用。哺乳動物Viperin具有抗病毒功能,魚類Viperin在抗病毒過程中也具有重要作用,但其潛在機制尚不清晰。本實驗制備了SVCV核蛋白N的單克隆抗體,為探究SVCV N蛋白的功能及病毒檢測提供了有效工具;同時圍繞SVCV對Viperin及其剪接異構體有何影響,Viperin及其剪接異構體如何影響SVCV感染展開深入研究,以期從天然免疫的角度揭示Viperin的選擇性剪接與SVCV的關系,為解析SVCV的免疫與致病機制、防控產品的開發(fā)提供科學依據。主要內容如下:1.SVCV N單克隆抗體的制備以含有SVCV N的... 

【文章來源】：華中農業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：52 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

SVCVN基因PCR擴增產物M:DL2000;1,2:SVCVN基因PCR擴增產物FigM:DL2000Marker;PCRproductofSVCVN,2:PCRamplificationproductofSVCVN，.二，1

SVCV-N-KG 融合蛋白的可溶性分析構建成功的質粒 SVCV-N-KG 轉化大腸桿菌表達菌株 BL21。菌液活IPTG，37℃誘導 6h。5000r/min 離心 10min，收集菌液。高壓破碎集上清、沉淀進行 SDS-PAGE 檢測。結果表明該融合蛋白大小約為 7預期一致；融合蛋白在上清及包涵體中均有存在，且主要以包涵體形M 1 2 3 475KDa25KDa

.1.3 SVCV-N-KG 融合蛋白的可溶性分析將構建成功的質粒 SVCV-N-KG 轉化大腸桿菌表達菌株 BL21。菌液活化后，加 1‰IPTG，37℃誘導 6h。5000r/min 離心 10min，收集菌液。高壓破碎后進行離，收集上清、沉淀進行 SDS-PAGE 檢測。結果表明該融合蛋白大小約為 70KDa(圖)，與預期一致；融合蛋白在上清及包涵體中均有存在，且主要以包涵體形式表達。圖 2 重組質粒 PCR 鑒定M：DL2000；1~6：重組質粒 PCR 產物；7：陰性對照Fig. 2 PCR identification of recombinant plasmidM: DL2000 Marker; 1~6: PCR amplification product of recombinantplasmid;7: negative control1000bpM 1 2 3 4

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]鯉春病毒血癥病毒焦磷酸測序檢測技術的建立[J]. 劉瑤,尹偉力,張四化,岳志芹,孫濤.  水產科學. 2017(04)
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本文編號：3266942