【目的】研究波吉卵囊藻（Oocystis borgei）在不同鹽度下葉綠素?zé)晒鈪?shù)的變化和編碼葉綠體D1蛋白的PsbA基因的表達(dá)特性。【方法】利用葉綠素?zé)晒鈨x測(cè)定不同鹽度條件下波吉卵囊藻葉綠素?zé)晒鈪?shù);利用cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)（RACE）克隆獲取波吉卵囊藻PsbA基因序列,并進(jìn)行生物信息學(xué)分析;利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）方法分析PsbA基因在不同鹽度下的表達(dá)情況�！窘Y(jié)果】高鹽（鹽度60）條件下PSⅡ最大光化學(xué)量子產(chǎn)量（F_v/F_m）及PSII實(shí)際光化學(xué)量子效率（ΦPSⅡ）顯著下降（P <0.05）�？寺～@得1 314 bp波吉卵囊藻PsbA基因cDNA序列,包含1 062 bp開放閱讀框（ORF）,預(yù)測(cè)編碼353個(gè)氨基酸,該蛋白屬于跨膜蛋白。qPCR結(jié)果表明,高鹽（鹽度60）條件下PsbA基因極顯著下調(diào)（P <0.01）。【結(jié)論】高鹽（鹽度60）顯著抑制波吉卵囊藻PsbA基因的表達(dá)和葉綠素?zé)晒鈪?shù)（F_v/F_m和ΦPSⅡ）的降低,表明波吉卵囊藻處于脅迫狀態(tài);而鹽度10和30能促進(jìn)... 

【文章來源】：廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,40(03)

【文章頁數(shù)】：10 頁

【部分圖文】：

不同鹽度下波吉卵囊藻葉綠素?zé)晒鈪?shù)的變化

通過RACE技術(shù)擴(kuò)增獲得PsbA cDNA序列為1 314 bp,ORF為1 062 bp，編碼353個(gè)氨基酸。運(yùn)用ExPASy Proteomics Server在線預(yù)測(cè)PsbA編碼的D1蛋白分子質(zhì)量約為38.87 ku，理論等電點(diǎn)為5.10。不穩(wěn)定系數(shù)35.89，屬于穩(wěn)定蛋白。脂溶性系數(shù)（Aliphatic index）為93.99，總的親水性平均系數(shù)為0.355，為非親水蛋白。酸性氨基酸殘基（Asp+Glu）總數(shù)為27，堿性氨基酸（Arg+Lys）總數(shù)為14,N末端是蛋氨酸（Met）。利用Signal P 4.0Server程序?qū)︻A(yù)測(cè)D1蛋白的氨基酸序列進(jìn)行信號(hào)肽結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)不存在信號(hào)肽。TMHMM Server v.2.0程序預(yù)測(cè)有5個(gè)跨膜區(qū)（圖2）。Soft Berry-Psite(predict protein）程序預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)該氨基酸序列含有3個(gè)N-糖基化位點(diǎn)，1個(gè)cAMP和c GMP依賴的蛋白激酶磷酸化位點(diǎn)，1個(gè)蛋白激酶C磷酸化位點(diǎn)，7個(gè)酪蛋白激酶II磷酸化位點(diǎn)，1個(gè)酪氨酸激酶磷酸化位點(diǎn)，6個(gè)N-肉豆蔻�；稽c(diǎn)，1個(gè)Prenyl基團(tuán)結(jié)合位點(diǎn)，5個(gè)微體C-末端靶信號(hào)位點(diǎn)以及1個(gè)光合反應(yīng)中心蛋白特征位點(diǎn)。2.3 蛋白空間結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

通過BLASTp對(duì)波吉卵囊藻的D1蛋白序列進(jìn)行同源性分析，發(fā)現(xiàn)波吉卵囊藻的D1蛋白與其他藻類物種同源性較高，其中與共球藻（Trebouxia aggregata）、絲藻（Gloeotilopsis sterilis）及小球藻（Chlorella heliozoae）氨基酸序列同源性高達(dá)97%。運(yùn)用MEME(http://meme-suite.org/tools/meme＿)在線軟件將波吉卵囊藻PsbA基因編碼的蛋白序列與其他植物的D1蛋白進(jìn)行保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)（圖4），結(jié)果顯示波吉卵囊藻和葡萄藻(Botryococcus braunii)、念珠藻（Nostoc flagelliforme CCNUN1）的保守結(jié)構(gòu)域匹配度最為接近。用MEGA X軟件的Neighbor-Joining法構(gòu)建這些物種的系統(tǒng)進(jìn)化樹（圖5），顯示波吉卵囊藻和葡萄藻(B.braunii)聚為一簇。圖5 波吉卵囊藻PsbA基因編碼蛋白與其他物種D1蛋白的保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3251996