萍鄉(xiāng)紅鯽（Pingxiang red-transparent crucian carp, Carassius auratus var.Pingxiangnensis,簡(jiǎn)寫CaP）,分布于中國(guó)江西省萍鄉(xiāng)地區(qū)，是一種自然野生的三倍體鯽魚突變體，具有雌核發(fā)育和兩性生殖兩種方式。關(guān)于萍鄉(xiāng)紅鯽卵膜透明帶基因（ZonaPellucida genes of CaP, CaP_ZP）表達(dá)和調(diào)控的研究很少。本研究包括以下四個(gè)部分：一，應(yīng)用細(xì)胞化學(xué)方法研究了萍鄉(xiāng)紅鯽卵子發(fā)生過程中主要生物大分子的變化。從1時(shí)相卵母細(xì)胞發(fā)育到2時(shí)相卵母細(xì)胞，可見蛋白質(zhì)沉積。但過碘酸-雪夫反應(yīng)（Periodic acidSchiff，PAS反應(yīng)）和蘇丹黑反應(yīng)為陰性。隨著卵母細(xì)胞的繼續(xù)發(fā)育，糖類和脂類在卵母細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)。結(jié)果顯示，成熟卵母細(xì)胞包含了大量蛋白質(zhì)、糖類和脂類，為成功受精以及胚胎發(fā)育作好準(zhǔn)備。二，利用蔗糖-尿素法來(lái)分離純化萍鄉(xiāng)紅鯽卵母細(xì)胞卵殼蛋白，SDS-PAGE膠分析顯示位于40-70kDa的四條卵膜蛋白條帶分子量大小與已經(jīng)獲得的萍鄉(xiāng)紅鯽CaP_ZP2和CaP_Z

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 魚類與其它動(dòng)物受精生物學(xué)
    1.2 透明帶 (zona pellucida) ZP 基因研究概況
        1.2.1 透明帶的組成與結(jié)構(gòu)特征
        1.2.2 ZP 基因功能研究進(jìn)展
    1.3 本研究的內(nèi)容、目的及意義
第二章 萍鄉(xiāng)紅鯽卵母細(xì)胞中蛋白、糖類和脂肪的組化分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 蛋白質(zhì)的顯色方法（DNFB 法）
        2.2.2 糖原顯色方法(PAS 反應(yīng))
        2.2.3 脂類顯色方法（溴-蘇丹黑法）
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 不同時(shí)相的卵母細(xì)胞 DNFB 染色
        2.3.2 不同時(shí)相的卵母細(xì)胞中 PAS 染色
        2.3.3 卵母細(xì)胞中溴-蘇丹黑染色脂類
    2.4 討論
第三章 萍鄉(xiāng)紅鯽 ZP 基因克隆及其基因組結(jié)構(gòu)分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 萍鄉(xiāng)紅鯽卵殼蛋白的分離和純化
        3.2.2 RACE-PCR 引物設(shè)計(jì)
        3.2.3 萍鄉(xiāng)紅鯽卵巢組織總 RNA 提取
        3.2.4 RNA 反轉(zhuǎn)錄成 cDNA
        3.2.5 萍鄉(xiāng)紅鯽 ZP2 基因 cDNA 全長(zhǎng)克隆
        3.2.6 萍鄉(xiāng)紅鯽四個(gè)基因組 DNA 文庫(kù)的構(gòu)建
        3.2.7 GenomeWalker 法步移 ZP 基因組及其啟動(dòng)子序列
        3.2.8 回收目的片段，與載體連接，感受態(tài)細(xì)胞制備以及轉(zhuǎn)化測(cè)序
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 萍鄉(xiāng)紅鯽卵殼蛋白的分離純化
        3.3.2 萍鄉(xiāng)紅鯽 ZP2 基因全長(zhǎng)克隆和序列分析
        3.3.3 萍鄉(xiāng)紅鯽 ZP3 基因 cDNA 以及 domain 結(jié)構(gòu)域分析
        3.3.4 萍鄉(xiāng)紅鯽四個(gè)基因組 DNA 文庫(kù)的構(gòu)建
        3.3.5 步移 ZP2 基因啟動(dòng)子序列以及 ZP3.2 基因組序列
        3.3.6 步移 ZP2 基因組序列以及 ZP3.1 基因組序列
        3.3.7 萍鄉(xiāng)紅鯽 ZP3.1，ZP2 和 ZP3.2 基因組序列拼接和圖示
        3.3.8 分析 ZP2 和 ZP3.2 啟動(dòng)子序列
    3.4 討論
        3.4.1 萍鄉(xiāng)紅鯽卵殼蛋白組分分析
        3.4.2 萍鄉(xiāng)紅鯽 ZP2 和 ZP3 基因序列分析
        3.4.3 萍鄉(xiāng)紅鯽基因組結(jié)構(gòu)以及啟動(dòng)子序列分析
第四章 萍鄉(xiāng)紅鯽 ZP 基因表達(dá)模式及其啟動(dòng)子活性分析
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 萍鄉(xiāng)紅鯽多個(gè)組織總 RNA 提取
        4.2.2 RNA 反轉(zhuǎn)錄成 cDNA
        4.2.3 熒光定量 PCR 檢測(cè)萍鄉(xiāng)紅鯽 ZP 基因的表達(dá)
        4.2.4 ZP2 基因原位雜交分析
        4.2.5 構(gòu)建萍鄉(xiāng)紅鯽 ZP3 和 ZP2 基因啟動(dòng)子與 GFP 的表達(dá)載體
        4.2.6. 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒進(jìn)入 COS-7 細(xì)胞
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 萍鄉(xiāng)紅鯽 ZP2 基因多個(gè)組織的差異性表達(dá)
        4.3.2 萍鄉(xiāng)紅鯽卵母細(xì)胞不同發(fā)育時(shí)期 ZP2 和 ZP3 基因的表達(dá)
        4.3.3 萍鄉(xiāng)紅鯽 ZP2 和 ZP3 基因啟動(dòng)子活性分析
    4.4 討論
        4.4.1 萍鄉(xiāng)紅鯽多個(gè)組織 ZP2 基因差異性表達(dá)
        4.4.2 萍鄉(xiāng)紅鯽卵母細(xì)胞不同發(fā)育時(shí)期 ZP2 和 ZP3 基因的表達(dá)分析
        4.4.3 萍鄉(xiāng)紅鯽 ZP 基因啟動(dòng)子
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Genetic basis and breeding application of clonal diversity and dual reproduction modes in polyploid Carassius auratus gibelio[J]. GUI JianFang* & ZHOU Li State Key Laboratory of Freshwater Ecology and Biotechnology, Institute of Hydrobiology, Chinese Academy of Sciences, Wuhan 430072, China.  Science China（Life Sciences）. 2010(04)
[2]人工選育F5代萍鄉(xiāng)肉紅鯽RAPD遺傳分析[J]. 梁星,甘云飛,王軍花,張忠萍,劉志放,范鴻潮,洪一江.  南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(理科版). 2008(04)
[3]三倍體萍鄉(xiāng)肉紅鯽的精子入卵及胚胎發(fā)育觀察[J]. 洪一江,王靜,王軍花,桂建芳.  水生生物學(xué)報(bào). 2005(05)
[4]銀鯽ZP3的表達(dá)特征和卵殼ZP3蛋白的分離[J]. 陳波,郭葳,桂建芳.  水生生物學(xué)報(bào). 2005(03)
[5]南美白對(duì)蝦卵子發(fā)生的細(xì)胞化學(xué)研究[J]. 姜永華,顏素芬.  集美大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2004(02)
[6]萍鄉(xiāng)肉紅鯽資源調(diào)查報(bào)告[J]. 康升云,王啟林,余智杰,張忠萍,肖增雪,范鴻潮.  江西水產(chǎn)科技. 2001(04)
[7]萍鄉(xiāng)肉紅鯽肌肉營(yíng)養(yǎng)成分分析[J]. 洪一江,胡成鈺,張忠萍,肖增雪,汪洪,劉方敏.  水利漁業(yè). 2001(03)
[8]Differential screening and characterization analysis of the egg envelope glycoprotein ZP3 cDNAs between gynogenetic and gonochoristic cruciancarp[J]. FAN LIAN CHUN, SHU TING YANG, JIAN FANG GUI (State Key laboratory of Freshwater Ecology and Biotechnology, Institute of Hydrobiology, Chinese Academy of Sciences, Wuhan 430072, China).  Cell Research. 2001(01)
[9]雌核發(fā)育銀鯽與兩性生殖彩鯽卵殼蛋白組分的比較分析及其受精前后的變化[J]. 楊書婷,桂建芳.  遺傳. 2000(04)
[10]羅氏沼蝦（Macrobrachium rosenbergii）卵子發(fā)生的細(xì)胞化學(xué)研究[J]. 王玉鳳,堵南山,賴偉.  華東師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 1997(04)

碩士論文
[1]長(zhǎng)薄鰍的性腺發(fā)育和生殖細(xì)胞的發(fā)生[D]. 殷江霞.西南大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3244241