發(fā)布時(shí)間：2021-05-20 06:20

　　在中國(guó)海參是非常重要的經(jīng)濟(jì)物種,隨著海參養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展,規(guī)模的不斷擴(kuò)大,海參的病害防治就顯得尤為重要。因此,我們對(duì)仿刺參的兩個(gè)免疫相關(guān)基因的表達(dá)模式以及在仿刺參先天免疫過(guò)程中的作用進(jìn)行研究。在本研究中我們首次克隆了單核巨噬細(xì)胞分化因子MMD2和可變淋巴細(xì)胞受體VLRA這兩個(gè)與仿刺參先天免疫有關(guān)的基因。MMD2基因cDNA序列全長(zhǎng)1243bp,有一個(gè)長(zhǎng)777bp的開(kāi)放閱讀框ORF,編碼258個(gè)氨基酸,并且包含HlyIII結(jié)構(gòu)域和7個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域,是一個(gè)七次跨膜蛋白。VLRA基因cDNA全長(zhǎng)3072bp,包括1995bp的ORF,編碼664個(gè)氨基酸,有一條信號(hào)肽,一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu),具有典型的VLR的結(jié)構(gòu),包括LRRCT、多個(gè)LRR模塊及LRRNT結(jié)構(gòu)。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析,MMD2和VLRA在仿刺參的體壁、縱肌、腸和呼吸樹(shù)四個(gè)組織中都有表達(dá),在仿刺參受到四種常見(jiàn)的海洋細(xì)菌刺激之后,MMD2和VLRA的基因在仿刺參四個(gè)部位組織中的表達(dá)量明顯上升,并隨著細(xì)菌濃度的增加,MMD2和VLRA的表達(dá)量也隨之升高,這說(shuō)明了MMD2和VLRA這兩個(gè)基因都參與了仿刺參的先天免疫反應(yīng)。原位雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明... 

【文章來(lái)源】：遼寧師范大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 仿刺參簡(jiǎn)介
        1.1.1 仿刺參的分類地位
        1.1.2 仿刺參的形態(tài)特征及經(jīng)濟(jì)價(jià)值
        1.1.3 仿刺參的先天免疫
        1.1.4 仿刺參主要的免疫分子和防御機(jī)制
    1.2 無(wú)脊椎動(dòng)物的免疫系統(tǒng)
        1.2.1 先天免疫
        1.2.2 模式識(shí)別
    1.3 MMD2基因結(jié)構(gòu)功能及相關(guān)介紹
        1.3.1 MMD基因結(jié)構(gòu)和功能
        1.3.2 單核巨噬細(xì)胞分化過(guò)程
    1.4 VLR的結(jié)構(gòu)及功能特征
        1.4.1 可變淋巴細(xì)胞受體
        1.4.2 VLR的蛋白結(jié)構(gòu)
        1.4.3 VLR的基因結(jié)構(gòu)
        1.4.4 VLR的抗原結(jié)合
    1.5 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 仿刺參樣品
    2.2 主要藥品試劑
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.3 質(zhì)粒與菌株
        2.2.4 實(shí)驗(yàn)配制溶液
    2.3 方法
        2.3.1 RNA的提取
        2.3.2 cDNA模板的制備
        2.3.3 引物的設(shè)計(jì)
        2.3.4 基因克隆
        2.3.5 切膠回收
        2.3.6 轉(zhuǎn)菌測(cè)序
        2.3.7 提取質(zhì)粒
        2.3.8 生物信息學(xué)分析
        2.3.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.3.10 原位雜交
        2.3.11 原核表達(dá)
        2.3.12 蛋白純化
        2.3.13 包涵體復(fù)性
        2.3.14 蛋白濃度測(cè)定
        2.3.15 細(xì)菌結(jié)合實(shí)驗(yàn)
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 基因全長(zhǎng)及信息學(xué)分析
        3.1.1 Aj-MMD2和Aj-VLRA的基因結(jié)構(gòu)
        3.1.2 Aj-MMD2和Aj-VLRA的序列比對(duì)
        3.1.3 進(jìn)化樹(shù)分析
    3.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    3.3 原位雜交
    3.4 原核表達(dá)
    3.5 細(xì)菌結(jié)合實(shí)驗(yàn)
4 討論
    4.1 MMD2和VLRA基因結(jié)構(gòu)特征
    4.2 Aj-MMD2和Aj-VLRA基因表達(dá)模式
    4.3 Aj-MMD2和Aj-VLRA在仿刺參體內(nèi)的分布
    4.4 Aj-VLRA重組蛋白的結(jié)合能力
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]光照強(qiáng)度對(duì)不同養(yǎng)殖方式下刺參幼參生長(zhǎng)和消化酶活性的影響[J]. 魏子仲,趙文.  應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào). 2014(01)



本文編號(hào)：3197255