為了建立一種簡便、快捷的現(xiàn)地檢測鯉皰疹病毒Ⅱ型（CyHV-2）的方法,本文聯(lián)合重組酶介導擴增（RAA）和側向流試紙條（LFD）技術,在優(yōu)選的RAA下游引物和探針的5’端分別進行生物素（Biotin）和熒光（FAM）標記,通過對RAA反應時間和溫度等條件的優(yōu)化,建立了可用于現(xiàn)地檢測CyHV-2的RAA-LFD方法。該檢測方法在34℃～40℃恒溫下反應10 min即可實現(xiàn)對CyHV-2目的基因片段的有效擴增,與其他常見水生動物疫病病原脫氧核糖核酸（DNA）無交叉反應,RAA擴增產物可直接用LFD肉眼觀察,對標準質粒pUC57-Cy HV-2的最低檢測限為8拷貝/μL,比普通聚合酶鏈式反應（PCR）靈敏度高出10倍。組內和組間重復性試驗表明該方法有良好的重復性和穩(wěn)定性,使用該方法對45份臨床樣本進行檢測,與普通PCR結果符合率為95%。本文建立的RAA-LFD檢測方法特異性強、靈敏度高、重復性好、操作方便,可用于Cy HV-2的臨床快速檢測。 

【文章來源】：檢驗檢疫學刊. 2020,30(03)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 前言
2 材料與方法
    2.1 主要實驗材料
    2.2 重組質粒的構建與定量
    2.3 引物的設計與篩選
    2.4 RAA-LFD方法的優(yōu)化及建立
    2.5 靈敏度實驗
    2.6 特異性實驗
3 結果
    3.1 引物篩選
    3.2 特異性試驗
    3.3靈敏度試驗
    3.4臨床樣品檢測
4 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]鯉皰疹病毒2型研究進展[J]. 袁銳,陳靜,劉訓猛,吳亞鋒,王晶晶,方蘋.  水產學雜志. 2019(01)
[2]雞傳染性喉氣管炎病毒RPA-LFD檢測方法的建立[J]. 馬國和,高冬生,王增,楊盼盼,楊霞,王新衛(wèi),邊傳周,趙軍.  中國預防獸醫(yī)學報. 2018(12)
[3]重組酶聚合酶擴增技術的研究進展及其應用[J]. 杜亞楠,趙笑,范小瑞,張琪,趙凱,許燕.  上海農業(yè)學報. 2018(06)
[4]用重組酶介導擴增技術快速擴增核酸[J]. 呂蓓,程海榮,嚴慶豐,黃震巨,沈桂芳,張志芳,李軼女,鄧子新,林敏,程奇.  中國科學:生命科學. 2010(10)

碩士論文
[1]對蝦WSSV和IHHNV病毒重組酶聚合酶擴增（RPA）快速檢測方法的研究[D]. 夏小明.上海海洋大學 2015



本文編號：3189258