發(fā)布時(shí)間：2021-05-12 05:44

　　2018年全國(guó)龜類養(yǎng)殖總量47676噸,比2017年增長(zhǎng)4.10%;全國(guó)淡水養(yǎng)殖魚類2544萬(wàn)噸,其中羅非魚養(yǎng)殖產(chǎn)量為162萬(wàn)噸,占比6.4%。近年來(lái),水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)集約化提高,疫病尤其是細(xì)菌性疾病成為制約行業(yè)發(fā)展的主要問(wèn)題之一。肺炎克雷伯菌（Klebsiella Pneumoniae）和遲緩愛德華氏（Edwardsiella tarda）是龜類常見細(xì)菌病原。羅非魚的遲緩愛德華氏菌病和無(wú)乳鏈球菌病是兩大暴發(fā)性疾病。以上三種細(xì)菌均為人畜共患菌,不僅影響?zhàn)B殖業(yè)的持續(xù)發(fā)展,也對(duì)人類的生命健康造成威脅。龜鱉疫苗研制相對(duì)滯后,龜肺炎克雷伯菌和遲緩愛德華氏菌的疫苗仍處于空白,羅非魚的無(wú)乳鏈球菌和遲緩愛德華氏菌已有較多學(xué)者進(jìn)行研究,但目前細(xì)胞水平的研究相對(duì)較少,因此,本文開展了以下工作:1、對(duì)發(fā)病中華草龜（Chinemys reevesii）分離的S27和S28致病菌通過(guò)分離純化、生長(zhǎng)特性鑒定、生化實(shí)驗(yàn)、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行鑒定,并分別測(cè)定半數(shù)致死量(LD₅₀),選取23種藥物對(duì)分離菌株進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示,S27和S28分別鑒定為肺炎克雷伯菌和遲緩愛德華氏菌,對(duì)中華花龜?shù)陌霐?shù)致... 

【文章來(lái)源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁(yè)數(shù)】：91 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.龜類簡(jiǎn)介
        1.1 龜?shù)膬r(jià)值
            1.1.1 龜?shù)目茖W(xué)研究?jī)r(jià)值
            1.1.2 龜?shù)氖秤脙r(jià)值
            1.1.3 龜?shù)乃幱脙r(jià)值
            1.1.4 龜?shù)挠^賞價(jià)值
            1.1.5 龜?shù)奈幕瘍r(jià)值
        1.2 龜類常見疾病
            1.2.1 白眼病
            1.2.2 腐皮病
            1.2.3 腐甲病
            1.2.4 水霉病
        1.3 龜養(yǎng)殖現(xiàn)狀
    2.肺炎克雷伯菌
        2.1 肺炎克雷伯菌的致病性
        2.2 肺炎克雷伯菌的耐藥機(jī)制
            2.2.1 膜主動(dòng)外排系統(tǒng)
            2.2.2 生物被膜保護(hù)
            2.2.3 超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)
            2.2.4 頭孢菌素酶(AmpC)
            2.2.5 碳青霉烯酶
        2.3 肺炎克雷伯菌疫苗
            2.3.1 多糖疫苗
            2.3.2 結(jié)合疫苗
            2.3.3 滅活疫苗
            2.3.4 單克隆抗體
    3 遲緩愛德華氏菌
        3.1 遲緩愛德華氏菌致病機(jī)理
            3.1.1 黏附與侵入
            3.1.2 抵抗宿主免疫機(jī)制
            3.1.3 毒素
        3.2 遲緩愛德華氏菌鑒定
        3.3 遲緩愛德華氏菌防治
            3.3.1 滅活疫苗
            3.3.2 弱毒疫苗
            3.3.3 空殼疫苗
            3.3.4 亞單位疫苗
            3.3.5 DNA疫苗
            3.3.6 外膜小泡疫苗
    4 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.1 細(xì)胞培養(yǎng)方法
            4.1.1 組織塊貼壁培養(yǎng)
            4.1.2 解離細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2 細(xì)胞培養(yǎng)條件
            4.2.1 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)
            4.2.2 生長(zhǎng)因子
            4.2.3 抗生素
            4.2.4 溫度
        4.3 細(xì)胞應(yīng)用
    5 免疫因子
        5.1MyD88
        5.2 TNF-ɑ
        5.3 IL-1?
        5.4 NF-κB
    6 研究目的與意義
第二章 病原菌分離及鑒定
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
            1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 病原菌的分離
            1.2.2 生化鑒定
            1.2.3 16SrRNA序列測(cè)定與分析
            1.2.4 人工回歸感染試驗(yàn)
            1.2.5 藥敏試驗(yàn)
    2 結(jié)果
        2.1 分離菌株的培養(yǎng)特性
        2.2 生化鑒定結(jié)果
        2.3 16SrRNA測(cè)序結(jié)果
        2.4 人工感染試驗(yàn)
        2.5 藥敏試驗(yàn)
    3 討論
第三章 分離菌滅活苗的免疫研究
    1
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
            1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 滅活條件選擇及滅活苗制備
            1.2.2 滅活苗安全性檢測(cè)
            1.2.3 滅活苗免疫接種
            1.2.4 血清溶菌酶活力測(cè)定
            1.2.5 血清C3補(bǔ)體活力測(cè)定
            1.2.6 抗體滴度檢測(cè)
            1.2.7 疫苗免疫保護(hù)力
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 滅活菌滅活條件選擇
        2.2 滅活苗安全性檢測(cè)
        2.3 血清溶菌酶活性
        2.4 血清C3補(bǔ)體含量測(cè)定
        2.5 抗體滴度測(cè)定
        2.6 疫苗保護(hù)率的測(cè)定
    3 討論
第四章 龜類細(xì)胞原代培養(yǎng)
    1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.1.2 主要儀器
            1.1.3 主要試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 原代培養(yǎng)
            1.2.2 傳代細(xì)胞培養(yǎng)
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 細(xì)胞貼壁情況
        2.2 原代培養(yǎng)結(jié)果
        2.3 細(xì)胞傳代培養(yǎng)
    3 討論
第五章 羅非魚腦細(xì)胞系建立及細(xì)菌刺激下免疫因子調(diào)控
    1.實(shí)驗(yàn)材料與方法
        1.1 材料與方法
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
            1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 羅非魚腦細(xì)胞的原代培養(yǎng)
            1.2.2 羅非魚腦細(xì)胞傳代培養(yǎng)
            1.2.3 細(xì)胞凍存與復(fù)蘇
            1.2.4 細(xì)胞最適條件篩選
            1.2.5 細(xì)菌刺激下免疫因子的調(diào)控
    2 結(jié)果
        2.1 原代培養(yǎng)
        2.2 羅非魚腦細(xì)胞傳代結(jié)果
        2.3 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇
            2.3.1 最適培養(yǎng)基
            2.3.2 最適溫度
            2.3.3 最適血清濃度
        2.4 RT-qPCR方法檢測(cè)免疫因子的調(diào)控
    3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3182850