發(fā)布時間：2021-04-28 19:52

　　刺參主產(chǎn)于我國北方沿海地區(qū)，是我國北方棘皮動物養(yǎng)殖的重要經(jīng)濟(jì)種類，其營養(yǎng)價值很高，而且還有廣泛的藥用價值。溫度會影響刺參的生存、生長發(fā)育和繁殖，研究環(huán)境溫度對刺參的生長、生存和生理等的影響，可以為評估在低溫下刺參的生長狀態(tài)以及開展刺參的安全養(yǎng)殖提供一些基礎(chǔ)依據(jù)。近年來，低溫病害使我國北方海水養(yǎng)殖業(yè)遭受了巨大損失，沿海冬季低溫冰害對刺參養(yǎng)殖業(yè)造成的危害亟待解決。本研究模擬了刺參冬季養(yǎng)殖環(huán)境，對刺參進(jìn)行室內(nèi)降溫試驗，從本實驗室構(gòu)建的刺參耐寒基因篩選cDNA中挑選候選耐寒基因，研究其在低溫脅迫下的表達(dá)量。為了解刺參耐低溫基因的表達(dá)模式及其機(jī)理研究，培育刺參抗寒優(yōu)良品種提供了大量依據(jù)，有利于提高我國刺參抗逆分子育種的研究水平，減少低溫冰害對我國北方刺參養(yǎng)殖業(yè)造成的損失。本試驗利用cDNA末端快速擴(kuò)增（RACE）技術(shù)，對未得到全長的基因尿苷胞苷激酶-1基因進(jìn)行了克隆，將尿苷胞苷激酶-1基因的核心序列片段和RACE克隆的3端和5端的cDNA進(jìn)行拼接后獲得了刺參尿苷胞苷激酶-1基因的全長。該cDNA全長為3189bp，5′非編碼區(qū)（Untranslated Region,UTR）126bp，3′非編... 

【文章來源】：大連海洋大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
第一章 綜述
    1.1 仿刺參的介紹
        1.1.1 溫度對刺參生長的影響
        1.1.2 溫度對刺參繁殖和發(fā)育的影響
        1.1.3 刺參的夏眠
    1.2 水產(chǎn)動物耐寒方面研究進(jìn)展
    1.3 實時熒光定量 PCR 技術(shù)及其應(yīng)用
    1.4 選題及意義
第二章 刺參尿苷胞苷激酶-1 基因的克隆與分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 刺參總 RNA 的提取
        2.1.3 引物設(shè)計
        2.1.4 序列分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 刺參尿苷胞苷激酶-1 基因的全長序列
        2.2.2 刺參尿苷胞苷激酶-1 基因的氨基酸組成特征
        2.2.3 刺參與其他物種尿苷胞苷激酶-1 氨基酸序列同源序列分析
        2.2.4 系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建
    2.3 討論
        2.3.1 刺參尿苷胞苷激酶-1 的克隆
        2.3.2 尿苷胞苷激酶-1 的序列及功能分析
第三章 候選耐寒基因在刺參不同組織及兩種降溫模式下的表達(dá)研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 降溫試驗
        3.1.2 實驗試劑與藥品
        3.1.3 主要的儀器設(shè)備
        3.1.4 引物設(shè)計
        3.1.5 組織分布、低溫脅迫后耐寒基因表達(dá)檢測、數(shù)據(jù)處理
        3.1.6 總 RNA 提取
        3.1.7 cDNA 的制備
        3.1.8 RT-PCR
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 總 RNA 提取及檢測
        3.2.2 反轉(zhuǎn)錄后的擴(kuò)增檢測結(jié)果
        3.2.3 定量引物的驗證
        3.2.4 實時熒光定量 PCR 擴(kuò)增效率鑒定結(jié)果
        3.2.5 刺參候選耐寒基因在四種不同組織中的表達(dá)情況
        3.2.6 候選耐寒基因在不同低溫處理條件下的表達(dá)
    3.3 討論
        3.3.1 內(nèi)參基因的確定
        3.3.2 兩種不同降溫模式下刺參耐寒候選基因表達(dá)變化規(guī)律
    3.4 小結(jié)
第四章 刺參主要卵黃蛋白 MYP1、MYP2 在幼體發(fā)育及溫度脅迫下的表達(dá)研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 刺參產(chǎn)卵、受精和幼體培養(yǎng)
        4.1.2 溫度處理
        4.1.3 樣品采集
        4.1.4 總 RNA 提取
        4.1.5 cDNA 的制備
        4.1.6 引物設(shè)計篩選及選擇內(nèi)參基因
        4.1.7 RT-PCR
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 引物篩選結(jié)果及內(nèi)參基因的確立
        4.2.2 MYP 在刺參不同發(fā)育階段的表達(dá)
        4.2.3 MYP 的組織特異性表達(dá)
        4.2.4 長時溫度脅迫下刺參腸組織中 MYP 的表達(dá)
        4.2.5 短時低溫脅迫下刺參腸組織中 MYP 的表達(dá)
    4.3 討論
        4.3.1 內(nèi)參基因的選擇
        4.3.2 MYP 在階段發(fā)育過程和組織中的表達(dá)
        4.3.3 MYP 在不同溫度處理下的表達(dá)情況
    4.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]刺參耐寒基因篩選cDNA文庫的構(gòu)建與分析[J]. 李成澤,王曉燕,丁君,常亞青.  大連海洋大學(xué)學(xué)報. 2013(06)
[2]低溫對不同規(guī)格刺參幼參生長與耗氧率的影響[J]. 趙斌,李成林,胡煒,吳志宏,譚林濤,王鵬飛.  海洋科學(xué). 2011(12)
[3]凡納濱對蝦TCP-1-eta基因的克隆及與耐寒性狀的相關(guān)性[J]. 殷勤,彭金霞,崔亮,謝達(dá)祥,王志偉,李奎,陳曉漢.  遺傳. 2011(02)
[4]刺參（Apostichopus japonicus）高溫脅迫消減cDNA文庫的構(gòu)建與分析[J]. 吉成龍,孫國華,楊建敏,宋志樂,劉相全,王衛(wèi)軍.  海洋與湖沼. 2011(01)
[5]鯉EST標(biāo)記與耐低溫性狀的相關(guān)性分析及定位[J]. 常玉梅,高國強(qiáng),徐麗華,劉金亮,劉春雷,梁利群.  動物學(xué)研究. 2010(06)
[6]溫度脅迫對三疣梭子蟹血清中非特異性免疫因子的影響[J]. 吳丹華,鄭萍萍,張玉玉,王春琳.  大連海洋大學(xué)學(xué)報. 2010(04)
[7]吉富羅非魚對低溫持續(xù)脅迫的死亡反應(yīng)[J]. 馬旦梅,程光平,喻海燕.  廣西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(07)
[8]仿刺參鐵蛋白ferritin基因的序列分析及表達(dá)[J]. 楊愛馥,周遵春,孫大鵬,董穎,姜北,汪笑宇,陳仲,關(guān)曉燕,王擺.  水產(chǎn)學(xué)報. 2010(06)
[9]仿刺參cytb和β-actin基因表達(dá)穩(wěn)定性比較[J]. 楊愛馥,周遵春,董穎,姜北,汪笑宇,陳仲,關(guān)曉燕,王擺,孫大鵬.  中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報. 2010(01)
[10]刺參對溫度適應(yīng)的生理生態(tài)學(xué)研究進(jìn)展[J]. 董云偉,董雙林.  中國海洋大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2009(05)

博士論文
[1]刺參Apostichopus japonicus （Selenka）夏眠分子機(jī)理的基礎(chǔ)研究[D]. 王天明.中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所） 2011
[2]刺參（Apostichopus Japonicus）對溫度變化的生態(tài)生理學(xué)響應(yīng)機(jī)制[D]. 紀(jì)婷婷.中國海洋大學(xué) 2009
[3]溫度及其周期性波動對刺參Apostichopus japonicus（Selenka）生長和能量收支的影響[D]. 安振華.中國海洋大學(xué) 2008

碩士論文
[1]肉雞冷應(yīng)激相關(guān)基因的mRNA表達(dá)譜分析及差異表達(dá)基因的研究[D]. 劉曉丹.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號：3166073