白斑綜合征病毒（white spot syndrome virus,WSSV）屬于線頭病毒科（Nimaviridae）的白斑病毒屬（Whispovirus）,具有很強(qiáng)的傳染性,是危害蝦蟹等甲殼類最嚴(yán)重的水產(chǎn)病原之一。2015年有學(xué)者首次報(bào)道池塘養(yǎng)殖的中華絨螯蟹感染W(wǎng)SSV,造成很高的死亡率。雖然對(duì)WSSV的致病機(jī)理進(jìn)行了探索,但至今仍無(wú)有效的防治方法。有研究表明自噬在病毒與宿主相互作用中起關(guān)鍵作用,本文圍繞WSSV感染不同宿主之后的組織和解剖癥狀,感染中華絨螯蟹后肝胰腺、鰓和腸道部位的組織病理變化,利用Western-blot和免疫熒光技術(shù)檢測(cè)WSSV誘導(dǎo)中華絨螯蟹血細(xì)胞自噬,研究了WSSV誘導(dǎo)血細(xì)胞自噬體形成以及可能的激活機(jī)制。取得如下研究結(jié)果:從自然發(fā)病的克氏原螯蝦和凡納濱對(duì)蝦體內(nèi)分別分離到WSSV和維氏氣單胞菌AVZ01。將提取的WSSV病毒液重新注射健康克氏原螯蝦后出現(xiàn)相同癥狀并且擴(kuò)增出目的條帶。AVZ01進(jìn)行人工回歸感染試驗(yàn)后,對(duì)蝦發(fā)病癥狀與自然發(fā)病癥狀相似,凡納濱對(duì)蝦的LD₅₀為8.7×10⁵ CFU/mL。根據(jù)該菌株的形態(tài)特征、... 

【文章來(lái)源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 前言
    1 白斑綜合征病毒研究進(jìn)展
        1.1 白斑綜合征病毒簡(jiǎn)介
        1.2 白斑綜合征病毒研究概況
            1.2.1 白斑綜合征病毒的命名、形態(tài)學(xué)特征
            1.2.2 白斑綜合征病毒易感宿主及其傳播途徑
            1.2.3 白斑綜合征病毒感染對(duì)蝦和中華絨螯蟹的癥狀、組織變化
            1.2.4 白斑綜合征的增殖過(guò)程
    2 自噬的研究進(jìn)展
        2.1 自噬的發(fā)現(xiàn)及發(fā)展概況
        2.2 自噬的分型
        2.3 自噬的形成過(guò)程
        2.4 自噬的調(diào)控
            2.4.1 依賴mTOR調(diào)控途徑
            2.4.2 不依賴mTOR調(diào)控途徑
            2.4.3 其他自噬途徑
        2.5 自噬檢測(cè)方法
            2.5.1 透射電鏡觀察自噬體的形態(tài)——檢測(cè)自噬的金標(biāo)準(zhǔn)
            2.5.2 基于自噬體LC3和p62的檢測(cè)
            2.5.3 監(jiān)測(cè)“自噬潮（autophagicflux）”
            2.5.4 體內(nèi)自噬
        2.6 自噬與病毒感染的關(guān)系
        2.7 白斑綜合征病毒對(duì)中華絨螯蟹的致病機(jī)制
    3 研究的目的和意義
第二章 不同宿主白斑綜合征病毒（WSSV）的分離及感染
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 克氏原螯蝦、凡納濱對(duì)蝦、中華絨螯蟹以及斑馬魚(yú)
            1.1.2 試驗(yàn)用斑馬魚(yú)
            1.1.3 主要試劑和儀器
        1.2 方法
            1.2.1 克氏原螯蝦、凡納濱對(duì)蝦、中華絨螯蟹以及斑馬魚(yú)體內(nèi)WSSV病毒檢測(cè)
            1.2.2 PCR反應(yīng)及產(chǎn)物的電泳檢測(cè)
            1.2.3 病原分離與純化
50)測(cè)試試驗(yàn)">            1.2.4 人工感染及半數(shù)致死劑量(LD₅₀)測(cè)試試驗(yàn)
            1.2.5 細(xì)菌形態(tài)特征觀察和生理生化鑒定
            1.2.6 細(xì)菌16S rRNA基因序列分析
            1.2.7 系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建
            1.2.8 WSSV感染斑馬魚(yú)
    2 結(jié)果
        2.1 WSSV感染克氏原螯蝦后的主要癥狀
        2.2 分子生物學(xué)檢測(cè)
        2.3 凡納濱對(duì)蝦臨床主要癥狀
        2.4 細(xì)菌的分離和形態(tài)觀察
        2.5 病原菌的生理生化和分子鑒定
        2.6 WSSV感染中華絨螯蟹和凡納濱對(duì)蝦后癥狀
        2.7 WSSV感染斑馬魚(yú)后癥狀
    3 討論
第三章 WSSV感染中華絨螯蟹后組織病理?yè)p傷觀察
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 主要試劑
            1.1.2 主要儀器設(shè)備
        1.2 常用溶液
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            1.3.1 WSSV攻毒感染中華絨螯蟹實(shí)驗(yàn)
            1.3.2 攻毒后中華絨螯蟹組織病理?yè)p傷
            1.3.3 模板DNA制備
            1.3.4 病毒引物設(shè)計(jì)合成
            1.3.5 PCR反應(yīng)及產(chǎn)物的電泳檢測(cè)
    2 結(jié)果
        2.1 中華絨螯蟹攻毒感染后癥狀
        2.2 WSSV在中華絨螯蟹體內(nèi)感染情況
        2.3 肝胰腺組織病理觀察
        2.4 鰓組織病理觀察
        2.5 其他組織病理觀察
    3 討論
第四章 WSSV誘導(dǎo)中華絨螯蟹血細(xì)胞自噬的初步研究
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.1.2 主要化學(xué)試劑和儀器
            1.1.3 實(shí)驗(yàn)用引物
        1.2 方法
            1.2.1 中華絨螯蟹免疫刺激和血細(xì)胞收集
            1.2.2 Western blot
            1.2.3 血細(xì)胞免疫熒光
            1.2.4 不同刺激血細(xì)胞RNA提取
            1.2.5 cDNA合成
            1.2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)自噬相關(guān)基因
            1.2.7 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果
        2.1 WSSV和雷帕霉素對(duì)中華絨螯蟹血細(xì)胞自噬的激活
        2.2 WSSV誘導(dǎo)中華絨螯蟹血細(xì)胞自噬
        2.3 WSSV誘導(dǎo)血細(xì)胞EsGabarap和EsAtg7基因mRNA表達(dá)水平的影響
    3 討論
第五章 小結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[4]鮑曼不動(dòng)桿菌外膜蛋白A真核表達(dá)載體構(gòu)建及其誘導(dǎo)Hela細(xì)胞不完全自噬[J]. 安志遠(yuǎn),黃驍舾,丁文一.  免疫學(xué)雜志. 2017(11)
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