發(fā)布時間：2021-04-25 17:27

　　生產高質量的配子是動物實現(xiàn)有效生殖的基礎。對于卵生動物而言,胚胎發(fā)育所必需的營養(yǎng)物質源于卵子成熟前母體的提前積累,這些物質包括蛋白質、脂質、糖類、維生素和礦物質等等,其中,Vtg是卵子蛋白類能源物質Yp的前體形式。硬骨魚類Yp的生成過程十分復雜且具有明顯的種屬特異性,因此開展廣泛研究十分必要。大菱鲆作為我國重要的海水養(yǎng)殖經濟物種,卻缺乏基本的Vtg及其衍生Yp的相關研究。因此本研究以繁殖季節(jié)雌性大菱鲆為研究對象,鑒定了vtg的多基因體系,分析了A類Vtg及其衍生Yp在肝臟、血液以及卵巢中的存在形式,探討了Yp的內源合成現(xiàn)象并對外源途徑中參與內吞作用的相關受體進行了表達研究,主要研究結果顯示:1、繁殖季節(jié),雌性大菱鲆卵巢內的卵母細胞由卵原細胞發(fā)展而來,經歷了初級生長、能量物質積累、成熟過程以及退化等幾個關鍵事件,以此可以將卵母細胞的發(fā)育分為卵原時期、染色質核仁時期、核仁外周早期、核仁外周晚期、皮層小泡時期、卵黃積累早期、卵黃積累晚期、成熟早期、成熟晚期以及退化期等幾個時期,同時依據(jù)各階段占主導的卵母細胞類型可以將大菱鲆繁殖期卵巢分為前卵黃積累時期、卵黃積累早期、卵黃積累晚期、后卵黃積累時... 

【文章來源】：中國科學院大學(中國科學院海洋研究所)山東省

【文章頁數(shù)】：135 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略詞
第一章 文獻綜述
    1.1 Vtg
        1.1.1 Vtg的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 多基因體系
        1.1.3 Yp的生成途徑
            1.1.3.1 Yp積累的一般模式——外源合成
            1.1.3.2 Yp的內源合成
        1.1.4 兩次成熟性降解與“新功能化”
            1.1.4.1 Vtg蛋白的純化與鑒定
            1.1.4.2 第一次成熟性降解
            1.1.4.3 第二次成熟性降解與“新功能化”
        1.1.5 vtg基因的表達調控
            1.1.5.1 雌激素與vtg基因的表達
            1.1.5.2 雌激素之外的其他因素與vtg基因的表達
            1.1.5.3 雌激素樣內分泌干擾物的生物標志物
    1.2 Vtg相關受體
        1.2.1 LR8-
        1.2.2 LRP13
    1.3 大菱鲆Vtg研究背景
    1.4 本研究的意義與目的
第二章 繁殖期大菱鲆卵子發(fā)生及卵巢分期
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 實驗試劑和儀器
        2.2.3 組織學觀察
2的測定">        2.2.4 血清E₂的測定
        2.2.5 數(shù)據(jù)處理與分析
    2.3 結果
        2.3.1 繁殖期大菱鲆卵子生成過程
            2.3.1.1 卵黃積累之前的變化
            2.3.1.2 卵黃積累、成熟與退化
        2.3.2 以卵子生成為依據(jù)的卵巢分期
        2.3.3 繁殖期雌性大菱鲆的生理指標
    2.4 討論
第三章 大菱鲆Vtg多基因體系和卵黃生成內外源途徑分析
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 實驗試劑和儀器
        3.2.3 肝臟和卵巢組織E2測定
        3.2.4 大菱鲆3個vtg基因c DNA全長的克隆
        3.2.5 序列分析
        3.2.6 熒光定量PCR分析組織特異性分布及在肝臟和卵巢中的表達模式
        3.2.7 原位雜交實驗分析vtg基因在大菱鲆卵巢組織中的表達定位
        3.2.8 免疫組化實驗分析卵巢組織Vtg的合成
        3.2.9 數(shù)據(jù)分析
    3.3 結果
        3.3.1 vtg基因c DNA全長及其結構分析
        3.3.2 相似性與進化分析
        3.3.3 3個vtg基因mRNA的組織特異性分布分析
        3.3.4 繁殖期雌性大菱鲆肝臟和卵巢組織的E2水平
        3.3.5 繁殖期雌性大菱鲆肝臟和卵巢中vtg基因的表達趨勢
        3.3.6 卵巢中vtg基因及其蛋白的表達定位
    3.4 討論
第四章 大菱鲆Vtg體外重組及外源合成、轉運、積累模式初探
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 實驗試劑和儀器
        4.2.3 大菱鲆VtgAa、VtgAb、VtgC結構分析
        4.2.4 VtgAa和 VtgAb抗體制備
            4.2.4.1 VtgAa和 VtgAb分段表達
            4.2.4.2 蛋白純化及抗體制備
        4.2.5 Western blot鑒定各組織Vtg及 Yps
    4.3 結果
        4.3.1 大菱鲆VtgAa、VtgAb、VtgC結構分析
        4.3.2 抗體的制備及特異性檢驗
        4.3.3 大菱鲆A類 Vtg在肝臟、血清、水合前卵巢以及成熟卵子中的分子量鑒定
        4.3.4 繁殖期大菱鲆肝臟、血清以及卵巢中Vtg的動態(tài)變化
        4.3.5 體內老化卵子Yp降解分析
    4.4 討論
第五章 大菱鲆卵黃蛋白原外源途徑內吞相關受體的表達模式研究
    5.1 前言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 實驗材料
        5.2.2 實驗試劑和儀器
        5.2.3 受體基因cDNA全長的克隆
        5.2.4 序列分析
        5.2.5 qRT-PCR分析受體基因組織特異性分布及在性腺中的表達模式
        5.2.6 原位雜交實驗分析受體基因在大菱鲆卵巢組織中的表達定位
        5.2.7 數(shù)據(jù)分析
    5.3 結果
        5.3.1 受體基因結構與進化分析
        5.3.2 受體mRNA組織特異性分布分析
        5.3.3 繁殖期大菱鲆性腺中受體基因的表達趨勢
        5.3.4 繁殖期卵巢中erβ1和erβ2 的表達趨勢
        5.3.5 卵巢中受體基因的表達定位
    5.4 討論
第六章 結論與展望
    6.1 結論
    6.2 展望
參考文獻
致謝
作者簡歷
攻讀學位期間發(fā)表的學術論文


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3159791