在動物早期胚胎發(fā)育過程中,母源遺傳的m RNA對早期胚胎的發(fā)育起到重要作用。雖然在脊椎動物中,母源m RNA降解的機(jī)制已被廣泛研究,但胚胎如何維持母源m RNA的穩(wěn)定性仍不清楚。在本研究中,我們確定了igf2bp3是斑馬魚母源m RNA穩(wěn)定性的重要調(diào)節(jié)因子。在母源合子轉(zhuǎn)換（maternal-to-zygotic transition,MZT）之前,母源igf2bp3缺失會破壞母源的m RNA穩(wěn)定性,導(dǎo)致嚴(yán)重的發(fā)育缺陷,包括異常的細(xì)胞骨架重組和細(xì)胞分裂。然而,在igf2bp3突變體中,未受精卵的母源m RNA表達(dá)水平卻是正常的。另外,Igf2bp3能結(jié)合母源m RNA,通過GO富集分析發(fā)現(xiàn)這些基因大部分富集在RNA調(diào)控與代謝、細(xì)胞分裂、細(xì)胞骨架組裝和表觀修飾過程中。事實上,igf2bp3的缺失會破壞母源m RNA穩(wěn)定性,導(dǎo)致母源m RNA在pre-MZT階段發(fā)生大規(guī)模降解。相反,過表達(dá)igf2bp3 m RNA則會增強Igf2bp3結(jié)合的母源m RNA穩(wěn)定性,并伴有胚胎發(fā)育遲緩現(xiàn)象�？傊�,這些發(fā)現(xiàn)說明Igf2bp3通過結(jié)合母源m RNA并維持母源m RNA的穩(wěn)定性,控制斑馬魚早期胚胎發(fā)育... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
第一章 前言
    1 母源因子概述
        1.1 母源因子簡介
        1.2 母源突變體的構(gòu)建
        1.3 母源因子的功能
    2 母源合子轉(zhuǎn)換概述
        2.1 母源RNA的降解
        2.2 合子基因組激活
    3 IGF2BPs基因家族概述
        3.1 IGF2BPs簡介
        3.2 IGF2BPs基因家族研究進(jìn)展
    4 RNA甲基化修飾概述
        4.1 RNA甲基化修飾簡介
6ARNA甲基化研究進(jìn)展">        4.2 m⁶ARNA甲基化研究進(jìn)展
    5 生殖質(zhì)及生殖細(xì)胞概述
        5.1 生殖質(zhì)及生殖細(xì)胞簡介
        5.2 生殖質(zhì)及生殖細(xì)胞研究進(jìn)展
    6 實驗動物斑馬魚的研究背景
    7 研究目的和意義
第二章 材料與方法
    1 實驗動物
    2 實驗所用載體和菌株
    3 儀器設(shè)備
    4 實驗試劑
    5 RNA提取
    6 RNA逆轉(zhuǎn)錄
    7 熒光定量PCR
    8 斑馬魚胚胎轉(zhuǎn)錄組測序
    9 基因組DNA提取
    10 DNA純化回收
    11 斑馬魚胚胎整體原位雜交（WISH）
    12 斑馬魚igf2bp3基因突變體構(gòu)建
    13 斑馬魚敲除igf2bp3靶位點有效性驗證
    14 斑馬魚igf2bp3突變體篩選
    15 RNA穩(wěn)定性實驗
    16 質(zhì)粒構(gòu)建
    17 免疫熒光
    18 蛋白互作實驗
    19 RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀
    20 RNA甲基化免疫沉淀
    21 體外轉(zhuǎn)錄合成過表達(dá)mRNA和挽救實驗
    22 組織切片蘇木精-伊紅（HE）染色
    23 蛋白免疫印跡
    24 數(shù)據(jù)分析
    25 實驗所用引物
第三章 結(jié)果
    1 Igf2bp3維持母源RNA穩(wěn)定以保證胚胎正常發(fā)育
        1.1 igf2bp3mRNA的表達(dá)模式
        1.2 igf2bp3突變體構(gòu)建及驗證
        1.3 母源igf2bp3缺失導(dǎo)致胚胎發(fā)育缺陷
        1.4 母源igf2bp3突變體中細(xì)胞骨架組裝出現(xiàn)缺陷
        1.5 母源igf2bp3突變體胚胎中的母源RNA降解更快
        1.6 igf2bp3突變不影響卵母細(xì)胞的發(fā)生
        1.7 Igf2bp3蛋白結(jié)合母源mRNA調(diào)節(jié)其穩(wěn)定性
        1.8 過表達(dá)igf2bp3mRNA可以延緩母源RNA的降解
6A讀取器Igf2bp3通過調(diào)控m⁶A依賴的基因表達(dá)實現(xiàn)種質(zhì)組裝">    2 m⁶A讀取器Igf2bp3通過調(diào)控m⁶A依賴的基因表達(dá)實現(xiàn)種質(zhì)組裝
        2.1 Igf2bp3與Buc互作并共定位在種質(zhì)中
        2.2 母源igf2bp3突變導(dǎo)致生殖質(zhì)組裝與生殖細(xì)胞發(fā)生出現(xiàn)缺陷
        2.3 igf2bp3突變對卵母細(xì)胞中生殖質(zhì)mRNA的定位和表達(dá)影響較小
        2.4 Igf2bp3調(diào)控早期胚胎中生殖質(zhì)mRNA的表達(dá)
6A修飾基因的表達(dá)">        2.5 Igf2bp3調(diào)控m⁶A修飾基因的表達(dá)
6A修飾的生殖質(zhì)mRNA并調(diào)節(jié)其穩(wěn)定性">        2.6 Igf2bp3蛋白結(jié)合m⁶A修飾的生殖質(zhì)mRNA并調(diào)節(jié)其穩(wěn)定性
第四章 討論
    1 Igf2bp3維持母源RNA穩(wěn)定以保證胚胎正常發(fā)育
6A讀取器Igf2bp3通過調(diào)控m⁶A依賴的基因表達(dá)實現(xiàn)種質(zhì)組裝">    2 m⁶A讀取器Igf2bp3通過調(diào)控m⁶A依賴的基因表達(dá)實現(xiàn)種質(zhì)組裝
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]斑馬魚母源因子在胚胎發(fā)育中的作用[J]. 胥鵬飛,孟安明.  中國科學(xué):生命科學(xué). 2014(10)
[2]以斑馬魚為模式動物研究器官的發(fā)育與再生[J]. 李禮,羅凌飛.  遺傳. 2013(04)
[3]Tudor and its domains: germ cell formation from a Tudor perspective[J]. Travis THOMSON,Paul LASKO.  Cell Research. 2005(04)



本文編號：3154154