大菱鲆（Scophthalmus maximus）是中國北方沿海區(qū)域一種廣泛養(yǎng)殖的海水魚類品種。近年來，隨著人工養(yǎng)殖的快速發(fā)展，遭受了多種病害，尤其是像大菱鲆虹彩病病毒（TRBIV）所引發(fā)的病毒類疾病，使我國的大菱鲆人工養(yǎng)殖業(yè)遭受了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。Toll樣受體（Toll-like receptor, TLR）是一種重要的模式識(shí)別受體（Pattern Recognition Reportor PRR）,是宿主抵抗病原體感染的Ⅰ型跨膜受體。它包含兩個(gè)重要的結(jié)構(gòu)域，細(xì)胞外富含亮氨酸重復(fù)（LRR）結(jié)構(gòu)域和細(xì)胞內(nèi)TIR （Toll/IL-1reporter）結(jié)構(gòu)域，它們被一個(gè)跨膜區(qū)（transmembrane TM）所連接。在脊椎動(dòng)物和無脊椎動(dòng)物中，TLRs都能通過其LRR結(jié)構(gòu)域識(shí)別外來或內(nèi)源的病原相關(guān)分子模式（pathogen associated molecular pattern, PAMP）,借助TIR結(jié)構(gòu)域激發(fā)髓樣分化因子88（MyD88）依賴性途徑或者是MyD88非依賴性途徑，最終釋放炎癥細(xì)胞因子、Ⅰ型干擾素（IFN）以及趨化因子，引發(fā)天然免疫反應(yīng)以及獲得性免疫反應(yīng)。TLR3是TL... 

【文章來源】：中國海洋大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 TOLL 樣受體的研究進(jìn)展
        1.1 TOLL 樣受體的發(fā)現(xiàn)及研究
            1.1.1 魚類 TLR 的發(fā)現(xiàn)及研究
        1.2 TOLL 樣受體的結(jié)構(gòu)和功能
        1.3 TOLL 樣受體的的分布
        1.4 TOLL 樣受體的的分類
        1.5 TLR 家族成員簡(jiǎn)介
            1.5.1 TLR2
            1.5.2 TLR3
            1.5.3 TLR4
            1.5.4 TLR5
            1.5.5 TLR9
            1.5.6 TLR1、TLR6 和 TLR10
        1.6 TLR 的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制
            1.6.1 MyD88 依賴性信號(hào)途徑
            1.6.2 MyD88 非依賴性信號(hào)途徑
            1.6.3 魚類的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑
    2 本項(xiàng)研究的目的與意義
第二章 大菱鲆 TLR3 基因的克隆和序列分析
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)魚、菌株及質(zhì)粒載體
        1.2 主要儀器與設(shè)備
        1.3 主要試劑及溶液配制
            1.3.1 主要試劑
            1.3.2 溶液的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 大菱鲆組織的獲取
        2.2 總 RNA 的提取及質(zhì)量檢測(cè)
        2.3 cDNA 第一鏈的合成
        2.4 大菱鲆 TLR3 全長 cDNA 克隆
            2.4.1 核心片段的克隆及測(cè)序
                2.4.1.1 簡(jiǎn)拼引物的設(shè)計(jì)
                2.4.1.2 核心片段 PCR 反應(yīng)
                2.4.1.3 電泳檢測(cè)
                2.4.1.4 PCR 產(chǎn)物的回收
                2.4.1.5 膠回收的 DNA 片段與載體的連接
                2.4.1.6 感受態(tài)細(xì)胞的制備
                2.4.1.7 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
                2.4.1.8 陽性克隆的鑒定
                2.4.1.9 核心片段序列分析
            2.4.2 3’-RACE 和 5’-RACE 片段的克隆及測(cè)序
                2.4.2.1 引物設(shè)計(jì)
                2.4.2.2 3’-RACE 片段的克隆及測(cè)序
                2.4.2.3 5’-RACE 片段的克隆及測(cè)序
            2.4.3 全長 cDNA 序列的拼接
        2.5 大菱鲆 TLR3 基因組 DNA 的克隆
            2.5.1 引物設(shè)計(jì)
            2.5.2 大菱鲆基因組 DNA 的提取
            2.5.3 基因組 DNA 的克隆以及測(cè)序
        2.6 序列結(jié)構(gòu)分析與進(jìn)化樹的構(gòu)建
    3 結(jié)果分析
        3.1 RNA 樣品提取與質(zhì)量檢測(cè)
        3.2 核心片段克隆及測(cè)序結(jié)果
        3.3 3’-RACE 片段克隆及測(cè)序結(jié)果
        3.4 5’-RACE 片段克隆及測(cè)序結(jié)果
        3.5 全長 cDNA 序列拼接及分析
        3.6 SmTLR3 cDNA 序列的分子特征
        3.7 SmTLR3 基因組 DNA 克隆及基因結(jié)構(gòu)特征
        3.8 SmTLR3 基因組的啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)特征
        3.9 SmTLR3 系統(tǒng)進(jìn)化的分析
    4 討論
第三章 大菱鲆 TLR3 mRNAs的組織分布研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要儀器和設(shè)備
        1.3 主要的試劑和溶液的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 大菱鲆的解剖和組織的獲取
        2.2 總 RNA 提取和質(zhì)量檢測(cè)
        2.3 cDNA 第一鏈的合成
        2.4 引物設(shè)計(jì)
        2.5 qPCR 擴(kuò)增與檢測(cè)
    3 結(jié)果分析
    4 討論
第四章 大菱鲆 TLR3 基因應(yīng)對(duì)大菱鲆紅體病病毒（TRBIV）和 PolyI:C刺激的表達(dá)分析
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和刺激物
        1.2 主要儀器與設(shè)備
        1.3 主要的試劑和溶液的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 TRBIV 及 PolyI:C 對(duì)大菱鲆魚體的感染
        2.2 模板的制備
        2.3 qPCR 檢測(cè)和分析
    3 結(jié)果分析
    4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷
學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Toll樣受體介導(dǎo)的先天性抗病毒免疫反應(yīng)研究進(jìn)展[J]. 何小兵,房永祥,賈懷杰,陳國華,曾爽,瞿惠玲,景志忠.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2011(06)



本文編號(hào)：3154036