本文以凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）的網(wǎng)格重鏈蛋白（CHC）、RAS和Profilin蛋白為研究對(duì)象,分析它們與WSSV的作用;以WSSV的兩個(gè)開(kāi)放閱讀框（ORF）wsv079和wsv112為研究對(duì)象,篩選與之互作的候選宿主蛋白,為進(jìn)一步揭示W(wǎng)SSV侵染途徑奠定了理論基礎(chǔ)。主要包括以下4個(gè)內(nèi)容:第一章:根據(jù)凡納濱對(duì)蝦網(wǎng)格重鏈蛋白的兩個(gè)功能結(jié)構(gòu)域:Clathtin Propel Repeat（CHC1）和Clathrin Heavy Chain Repeat Homology（CHC2）,分別設(shè)計(jì)兩對(duì)特異性引物,擴(kuò)增目的片段,并克隆至pBAD/gIIIA載體上,以E.coli Top10為宿主菌,在L-阿拉伯糖（L-Arab）的誘導(dǎo)下獲得CHC1和CHC2重組蛋白。質(zhì)譜分析顯示,純化的重組蛋白為CHC1和CHC2。利用Co²⁺親和層析方法得到純度很高的CHC1和CHC2蛋白。采用Far-western和酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）方法分析CHC1和CHC2蛋白與VP26、VP28N和VP37的作用,結(jié)果表明CHC1蛋白和CHC2蛋白與VP28N... 

【文章來(lái)源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁(yè)數(shù)】：89 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

chc1和chc2基因的克隆M:DNA標(biāo)準(zhǔn)品DL2000；1-2:chc1基因;3:陰性對(duì)照;4-5:chc2基因

圖 1-2 chc1 和 chc2 基因的克隆M: DNA 標(biāo)準(zhǔn)品 DL2000；1-2: chc1 基因; 3: 陰性對(duì)照; 4-5: chc2 基因Fig.1-2 Cloning of chc1 and chc2M: DNA Marker DL2000; 1-2: chc1 gene; 3: negative control; 4-5: chc2 gene1.1.3.2 pBAD/gⅢA-chc1 和 pBAD/gⅢA-chc2 重組質(zhì)粒的鑒定用 T4 DNALigase 將雙酶切后的片段與具有相同粘性末端的 pBAD/gⅢA 表達(dá)載體連接，經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化和 Amp+篩選后，挑取單克隆，37 ℃培養(yǎng) 4 h 后，菌液 PCR產(chǎn)物電泳鑒定結(jié)果見(jiàn)圖 1-3 和圖 1-4，條帶在 1000 bp 左右，初步斷定連接成功。取部分連接成功的菌液測(cè)序，測(cè)序結(jié)果經(jīng)過(guò) DNAMAN 軟件與標(biāo)準(zhǔn)序列對(duì)比分析，結(jié)果證明重組表達(dá)載體序列完全正確，無(wú)移碼錯(cuò)配現(xiàn)象，可繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖 1-2 chc1 和 chc2 基因的克隆M: DNA 標(biāo)準(zhǔn)品 DL2000；1-2: chc1 基因; 3: 陰性對(duì)照; 4-5: chc2 基因Fig.1-2 Cloning of chc1 and chc2M: DNA Marker DL2000; 1-2: chc1 gene; 3: negative control; 4-5: chc2 gene1.1.3.2 pBAD/gⅢA-chc1 和 pBAD/gⅢA-chc2 重組質(zhì)粒的鑒定用 T4 DNALigase 將雙酶切后的片段與具有相同粘性末端的 pBAD/gⅢA 表達(dá)載體連接，經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化和 Amp+篩選后，挑取單克隆，37 ℃培養(yǎng) 4 h 后，菌液 PCR產(chǎn)物電泳鑒定結(jié)果見(jiàn)圖 1-3 和圖 1-4，條帶在 1000 bp 左右，初步斷定連接成功。取部分連接成功的菌液測(cè)序，測(cè)序結(jié)果經(jīng)過(guò) DNAMAN 軟件與標(biāo)準(zhǔn)序列對(duì)比分析，結(jié)果證明重組表達(dá)載體序列完全正確，無(wú)移碼錯(cuò)配現(xiàn)象，可繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3143795