脊椎動物的適應(yīng)性免疫應(yīng)答主要由B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)。T細(xì)胞通過釋放細(xì)胞毒性因子直接殺死被感染細(xì)胞或異常細(xì)胞,或通過分泌各種細(xì)胞因子協(xié)同其他免疫細(xì)胞執(zhí)行其功能。硬骨魚是最早具有適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的脊椎動物,盡管對于哺乳動物T細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制的研究取得了顯著進展,但對于硬骨魚T細(xì)胞的活化過程仍有待研究。CD3分子在T細(xì)胞激活和T細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用,本文對大黃魚CD3分子的研究結(jié)果將為研究硬骨魚T細(xì)胞的活化奠定基礎(chǔ)。本論文從大黃魚中克隆得到了CD3γ/δA、CD3γ/δB、CD3ε和CD3ζ的開放閱讀框（Open reading frame,ORF）序列,它們的ORF分別長522、573、555和456 bp,分別編碼一個含173、190、184和151個氨基酸殘基的多肽。LcCD3γ/δA、LcCD3γ/δB和LcCD3ε的胞外段均含有2個保守的半胱氨酸和一個CXXCXE結(jié)構(gòu)域;胞質(zhì)區(qū)含有一個可以傳遞信號的ITAM（immunoreceptor tyrosine-based activation motif）基序;LcCD3ε跨膜區(qū)含有一個保守的天冬氨酸,而LcCD3γ/δA和L... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

大黃魚CD3基因PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖

結(jié)果26（aa20-115），一個跨膜區(qū)（aa116-137）和一個較為保守的胞內(nèi)段（aa138-190）（圖2-2C），預(yù)測其成熟蛋白分子量約18.9kDa；LcCD3ζORF包含456個核苷酸，編碼一個含151個氨基酸的蛋白質(zhì)，含有一個信號肽（aa1-22），一個胞外段（aa23-30），一個跨膜區(qū)（aa31-50）以及一個胞內(nèi)段（aa51-151）（圖2-2D），預(yù)測其成熟蛋白分子量約14.8kDa。LcCD3γ/δA、LcCD3γ/δB和LcCD3ε的胞外段分別含有兩個保守的半胱氨酸和一個CXXCXE結(jié)構(gòu)域，其胞內(nèi)段各含有一個能夠傳遞信號的免疫酪氨酸活化基序（immunoreceptortyrosine-basedactivationmotif，ITAM）(YXXL/I-X6-8-YXXL/I）。LcCD3ε的跨膜區(qū)含有一個保守的帶電氨基酸天冬氨酸，而LcCD3γ/δA和LcCD3γ/δB的跨膜區(qū)各含有一個天冬酰胺。LcCD3ζ的胞外段較短，只含有8個氨基酸，而其胞內(nèi)區(qū)含有3個ITAM基序。圖2-2LcCD3ORF核苷酸序列及氨基酸序列分析Fig.2-2analysisofLcCD3ORFcDNAandconcludedaminoacidsequence（A）LcCD3ε核苷酸序列及氨基酸序列分析；（B）LcCD3γ/δA核苷酸序列及氨基酸序列分析；（C）LcCD3γ/δB核苷酸序列及氨基酸序列分析；（D）LcCD3ζ核苷酸序列及氨基酸序列分析。保守的半胱氨酸用紅色字體標(biāo)出，CXXCXE結(jié)構(gòu)域用黑色矩形標(biāo)出，ITAM結(jié)構(gòu)域用紅色直線標(biāo)出，預(yù)測的N-糖基化位點用黑色直線標(biāo)出。*代表終止密碼子。(A)AnalysisofLcCD3εcDNAandconcludedaminoacidsequence.(B)AnalysisofLcCD3γ/δAcDNAandconcludedaminoacidsequence.(C)AnalysisofLcCD3γ/δBcDNAandconcludedaminoacidsequence.(D)AnalysisofLcCD3ζcDNAandconcludedaminoacidsequence.Theconservedcysteineswereinred.TheCXXCXEmotifwasshownwithinblackrectangle.The

大黃魚CD3的分子特征及CD3ε多克隆抗體的制備27ITAMmotifwasshownwithinredrectangle.ThepotentialN-glycosylationsitewasshowninsingleunderscore.*representstheterminationcodon.3.1.3大黃魚CD3共線性分析根據(jù)大黃魚基因組的測序結(jié)果分析，LcCD3ε、LcCD3γ/δA和LcCD3γ/δB串聯(lián)相繼分布在7號染色體上（圖2-3A），LcCD3ζ單獨位于19號染色體上（圖2-3B）。LcCD3ε與MPZL2相鄰，LcCD3ζ靠近CREG1。圖2-3不同物種來源CD3的線性分析Fig.2-3GenomicrelatioshipsofCD3genesamongvertebrates（A）CD3ε、CD3γ、CD3δ（γ/δ）；（B）CD3ζ。圖中箭頭代表轉(zhuǎn)錄方向，線段長度和基因長度無關(guān)。圖中基因相對位置從NCBI上檢索得到，所用基因組版本為H.sapiens（GRCh38.p13）,G.gallus（AADN00000000.5），X.tropicalis（AAMC00000000.3），S.salar（BT060238.1），P.olivaceus（AB054068.1），L.crocea（JRPU00000000.2）。Chr：染色體，Sc:scaffold。(A)CD3ε、CD3γ、CD3δ(γ/δ).(B)CD3ζ.Arrowsindicatedthetranscriptionaldirection.Thecomparisonisschematicanddoesnotreflectvirtualgenedistances.GenerelativelocationswereobtainedfromGenBankandversionsusedinthisanalysiswereH.sapiens(GRCh38.p13),G.gallus(AADN00000000.5),X.tropicalis(AAMC00000000.3),S.salar(BT060238.1),P.olivaceus(AB054068.1),L.crocea(JRPU00000000.2).Chr:chromosome,Sc:scaffold.3.1.4大黃魚CD3同源比對和系統(tǒng)進化分析通過T-CoffeeServer在線程序?qū)⒋簏S魚CD3ε、CD3γ/δA、CD3γ/δB和CD3ζ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]大黃魚EBI3基因的克隆與表達(dá)分析[J]. 霍潔穎,劉小玲,林蠡,陳新華.  應(yīng)用海洋學(xué)學(xué)報. 2017(03)
[2]CD8:Adhesion Molecule,Co-Receptor and Immuno-Modulator[J]. David K Cole,George F Gao.  Cellular & Molecular Immunology. 2004(02)
[3]CTL細(xì)胞毒作用機制的研究進展[J]. 宋建勛.  國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊). 1997(04)

博士論文
[1]鲆鰈魚IgM+B細(xì)胞內(nèi)吞作用及其調(diào)控機制研究[D]. 李逸群.中國科學(xué)院大學(xué)(中國科學(xué)院海洋研究所) 2018



本文編號：3123727