本研究采集發(fā)病南方鲇進(jìn)行了遲緩愛(ài)德華氏菌和鮰愛(ài)德華氏菌的分離鑒定,并對(duì)遲緩愛(ài)德華氏菌和鮰愛(ài)德華氏菌的雙重PCR診斷方法進(jìn)行構(gòu)建。從樂(lè)山南方鲇養(yǎng)殖場(chǎng)采集自然發(fā)病南方鲇,無(wú)菌操作從病魚(yú)肝、腎分離優(yōu)勢(shì)菌,結(jié)果從自然發(fā)病魚(yú)肝、腎中分離到兩株優(yōu)勢(shì)菌（CH0406和H0701）。人工感染試驗(yàn)確定其病原性,人工感染試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)兩分離株為南方鲇的致病菌,人工感染魚(yú)出現(xiàn)與自然感染相似的臨床癥狀與病變；對(duì)分離菌株進(jìn)行各項(xiàng)理化性質(zhì)測(cè)定發(fā)現(xiàn),分離株CH0406在LB平板上28℃培養(yǎng)24h就能長(zhǎng)出形成邊緣整齊,灰白色,直徑為0.5-1mm的圓形菌落,H0701在BHI培養(yǎng)基上28℃培養(yǎng)48h形成直徑0.2-0.3mm針尖大小,表面光滑,邊緣整齊,無(wú)色透明的圓形菌落的菌落；分離株CH0406和H0701生化特性分別與E. tarda標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC15947）和E.ictaluri標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC33202）一致；采用細(xì)菌16S rDNA保守區(qū)通用引物（F:5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’, R:5’-TACGGCTACCT TGTTACGAC-3’）進(jìn)行基因擴(kuò)增,擴(kuò)增出預(yù)期大小的約150... 

【文章來(lái)源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 南方鲇的生物學(xué)特性
    2 南方鲇常見(jiàn)疾病
        2.1 細(xì)菌性疾病
        2.2 真菌性疾病
        2.3 寄生蟲(chóng)疾病
        2.4 其它因素引起的疾病
    3 遲緩愛(ài)德華氏菌的研究進(jìn)展
        3.1 遲緩愛(ài)德華氏菌的分類(lèi)地位
        3.2 遲緩愛(ài)德華氏菌的生物學(xué)特性
            3.2.1 培養(yǎng)特性
            3.2.2 生化特性
            3.2.3 血清型
        3.3 遲緩愛(ài)德華氏菌的流行病學(xué)
            3.3.1 感染范圍
            3.3.2 感染癥狀
        3.4 遲緩愛(ài)德華氏菌檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展
        3.5 遲緩愛(ài)德華氏菌病的防治
    4 鮰愛(ài)德華氏菌的研究進(jìn)展
        4.1 鮰愛(ài)德華氏菌的分類(lèi)地位
        4.2 鮰愛(ài)德華氏菌生物學(xué)特性
            4.2.1 培養(yǎng)特性
            4.2.2 生化特性
            4.2.3 血清型
        4.3 鮰愛(ài)德華氏菌的流行病學(xué)
            4.3.1 感染范圍
            4.3.2 感染癥狀
        4.4 鮰愛(ài)德華氏菌檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展
        4.5 鮰愛(ài)德華氏菌病的防治
    5 雙重PCR技術(shù)概述
    6 研究的目的與意義
第二章 南方鲇愛(ài)德華氏菌的分離鑒定
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 病魚(yú)的采集
        2.2 病原菌的分離與純化
        2.3 人工感染試驗(yàn)
        2.4 表型特征檢測(cè)
            2.4.1 培養(yǎng)特性檢測(cè)
            2.4.2 生化特性檢測(cè)
        2.5 16S rDNA序列測(cè)定與系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.6 gadB與eip基因序列測(cè)定和分析
    3 結(jié)果
        3.1 病原菌的分離
        3.2 人工感染試驗(yàn)
        3.3 表型特征檢測(cè)
            3.3.1 培養(yǎng)特性檢測(cè)
            3.3.2 生化特性
        3.4 16S rDNA序列測(cè)定與系統(tǒng)發(fā)育分析
        3.5 gadB與eip基因序列測(cè)定和分析
    4 討論
        4.1 愛(ài)德華氏菌的危害
        4.2 愛(ài)德華氏菌培養(yǎng)特性
        4.3 愛(ài)德華氏菌病的防治
        4.4 愛(ài)德華氏菌的鑒定
第三章 遲緩愛(ài)德華氏菌與鮰愛(ài)德華氏菌雙重PCR方法的建立
    1 材料
        1.1 菌株
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2 方法
        2.1 雙重PCR引物的合成
        2.2 E.tarda DNA的提取
        2.3 E.ictaluri DNA的提取
        2.4 E.tarda單一PCR和Eictaluri單一PCR的優(yōu)化
        2.5 雙重PCR條件的優(yōu)化
            2.5.1 退火溫度的優(yōu)化
2+濃度的優(yōu)化">            2.5.2 Mg²⁺濃度的優(yōu)化
            2.5.3 引物濃度的優(yōu)化
            2.5.4 模板DNA質(zhì)量濃度的優(yōu)化
        2.6 PCR產(chǎn)物檢測(cè)
        2.7 雙重PCR與單一PCR的比較
            2.7.1 特異性的比較
            2.7.2 靈敏性的比較
    3 結(jié)果
        3.1 遲緩愛(ài)德華氏菌單一PCR條件優(yōu)化結(jié)果
        3.2 鮰愛(ài)德華氏菌單一PCR條件優(yōu)化結(jié)果
        3.3 雙重PCR條件優(yōu)化結(jié)果
        3.4 特異性比較結(jié)果
            3.4.1 遲緩愛(ài)德華氏菌PCR的特異性實(shí)驗(yàn)
            3.4.2 鮰愛(ài)德華氏菌PCR的特異性實(shí)驗(yàn)
            3.4.3 雙重PCR的特異性實(shí)驗(yàn)
        3.5 敏感性比較結(jié)果
            3.5.1 遲緩愛(ài)德華氏菌PCR的敏感性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.5.2 鮰愛(ài)德華氏菌PCR的敏感性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.5.3 雙重PCR的敏感性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4 討論
        4.1 雙重PCR方法的優(yōu)點(diǎn)
        4.2 雙重PCR引物的設(shè)計(jì)
        4.3 雙重PCR的條件優(yōu)化
        4.4 雙重PCR方法的敏感性
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3120398