大量的研究表明,JAK/STAT信號(hào)通路作為非特異性免疫系統(tǒng)的重要組成,在脊椎動(dòng)物抗細(xì)菌活動(dòng)中起著關(guān)鍵的作用。JAK激酶是一種非受體型絡(luò)氨酸激酶,在哺乳動(dòng)物中,已被證實(shí)是參與干擾素或白介素介導(dǎo)信號(hào)傳導(dǎo)的關(guān)鍵蛋白。團(tuán)頭魴（Megalobrama amblycephala）是我國重要的淡水養(yǎng)殖魚類之一,但由嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）引起的細(xì)菌性敗血癥嚴(yán)重影響了其經(jīng)濟(jì)效益。為了探究團(tuán)頭魴JAK家族基因是否參與團(tuán)頭魴感染嗜水氣單胞菌后的免疫過程,本研究以團(tuán)頭魴為對(duì)象,克隆鑒定了5個(gè)團(tuán)頭魴JAK家族基因的ORF序列,并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析;通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)團(tuán)頭魴JAK家族基因在健康成魚組織和感染嗜水氣單胞菌后免疫相關(guān)組織中的表達(dá)進(jìn)行了分析;利用Western-blot技術(shù)檢測(cè)MamJAK1磷酸化蛋白在團(tuán)頭魴感染嗜水氣單胞菌后,在脾臟和中腎中的表達(dá)變化;之后,使用LPS刺激草魚CIK細(xì)胞后,檢測(cè)IL-6R和JAK1基因的表達(dá),以及JAK1蛋白磷酸化表達(dá);最后,構(gòu)建真核表達(dá)載體p EGFP-IL-6R轉(zhuǎn)染到草魚CIK細(xì)胞中,檢測(cè)JAK1磷酸化蛋白的表達(dá)變化... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

JAK/STAT信號(hào)通路（Yanetal2018）

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆碩士學(xué)位（畢業(yè)）論文20圖3團(tuán)頭魴JAK家族基因氨基酸序列對(duì)比Fig.3AminoacidsequencecomparisonofJAKgenefamilyinM.amblycephala相同和相似的氨基酸殘基分別以灰色和淺灰色陰影顯示。紅色矩形標(biāo)記磷酸化位點(diǎn)。Identicalandsimilarresiduesareshadedingrayandlightgray,respectively.Theredsquaremarksthephosphorylationsite.使用MEGA7.0對(duì)脊椎動(dòng)物的JAK家族蛋白進(jìn)行了系統(tǒng)進(jìn)化分析，結(jié)果如圖4所示，人、小鼠、原雞和非洲爪蟾的JAK1、JAK3和TYK2蛋白分別聚為一支；而草魚、斑馬魚、青鳉、鯉和半滑舌鰨等硬骨魚的聚為一支，其中草魚、鯉和團(tuán)頭魴的最先聚在一起，在進(jìn)化關(guān)系上最為接近。另外，硬骨魚類如矛尾虎蝦魚、斑馬魚和團(tuán)頭魴的JAK2b和哺乳動(dòng)物的JAK2聚為一支，硬骨魚類的JAK2a聚為另外一支，說明硬骨魚類的JAK2b和哺乳動(dòng)物的JAK2在進(jìn)化關(guān)系上較為接近；其中，斑馬魚的JAK2a和JAK2b蛋白與團(tuán)頭魴的在進(jìn)化關(guān)系上最為接近。

團(tuán)頭魴JAK家族基因的鑒定和表達(dá)分析21圖4脊椎動(dòng)物JAKs蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化分析Fig.4PhylogeneticanalysisoftheproteinsequencesofJAKsproteininvertebrates物種登錄號(hào)：1.JAK1蛋白：草魚Ctenopharyngodonidella（AMK47891.1），鯉Cyprinuscarpio（AAB38256.1），斑馬魚Daniorerio（BAH47261.1），斑點(diǎn)叉尾鮰Ictaluruspunctatus（XP_017335000.1），黃顙魚Tetraodonfluviatilis（AAC00207.1），大西洋鮭Salmosalar（XP_013978894.1），青鳉Oryziaslatipe（XP_020558118.1），半滑舌鰨Cynoglossussemilaevis（XP_008331503.1），大黃魚Larimichthyscrocea（XP_019120796.1），非洲爪蟾Xenopuslaevis（AAH77570.1），原雞Gallusgallus（NP_990201.1），小鼠Musmusculus（P52332.1），馬Equuscaballus（XP_023497716.1），人Homosapiens（P23458.2），野牦牛Bosmutus（XP_005886754.1），野豬Susscrofa（XP_020949197.1）；2.JAK2蛋白：斑馬魚DaniorerioJAK2a(AAI62596.1)，斑馬魚JAK2bDaniorerioJAK2b（ABD73285.1），青鳉NothobranchiusfurzeriJAK2a（tr|A0A1A8UC21|A0A1A8UC21），青鳉NothobranchiusfurzeriJAK2b（tr|A0A1A8ANY6|A0A1A8ANY6），矛尾復(fù)蝦虎魚AcanthogobiushastaJAK2a（tr|A0A1Z1BIC0|A0A1Z1BIC0_9GOBI），矛尾復(fù)蝦虎魚AcanthogobiushastaJAK2b（tr|A0A1Z1B8L8|A0A1Z1B8L8_9GOBI），黃顙魚TachysurusfulvidracoJAK2a（ALJ92427.1），黃顙魚TachysurusfulvidracoJAK2b（ALJ92428.1），


本文編號(hào)：3095357