sigX和flgM基因在變形假單胞菌感染斜帶石斑魚(yú)過(guò)程中的功能
發(fā)布時(shí)間：2021-03-04 19:40
變形假單胞菌（Pseudomonas plecoglossicida）,又稱殺香魚(yú)假單胞菌,是一種需氧型革蘭氏陰性桿菌。該菌能引起大黃魚(yú)（Larimichthys crocea）、斜帶石斑魚(yú)（Epihephelus coioides）等經(jīng)濟(jì)海水魚(yú)類的“內(nèi)臟白點(diǎn)病”,導(dǎo)致養(yǎng)殖魚(yú)類在短期內(nèi)大量死亡,造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。雖然變形假單胞菌在海水養(yǎng)殖領(lǐng)域造成的危害巨大,但是對(duì)其致病機(jī)制的研究才剛剛起步。在實(shí)驗(yàn)室前期測(cè)定的變形假單胞菌體外不同溫度及致病過(guò)程的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上,本研究以本實(shí)驗(yàn)前期實(shí)驗(yàn)分離的高致病性變形假單胞菌NZBD9菌株為研究對(duì)象,斜帶石斑魚(yú)為宿主,結(jié)合RNAi和RNA測(cè)序技術(shù)研究sigX基因和flgM基因在變形假單胞菌感染斜帶石斑魚(yú)過(guò)程中的功能。主要內(nèi)容如下:（1）通過(guò)RNAi技術(shù)分別構(gòu)建了5株變形假單胞菌sigX基因和flgM基因的沉默突變株,用qRT-PCR測(cè)定基因的表達(dá)量,結(jié)果顯示sigX-shRNA-216菌株和flgM-shRNA-18菌株的沉默效果最好,其沉默效率分別達(dá)到99.27%和99.72%。以sigX-shRNA-216菌株和flgM-shRNA-18菌株為...
【文章來(lái)源】：集美大學(xué)福建省
【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
sigX基因和flgM基因在沉默株中的表達(dá)量
圖 2-2 sigX 基因和 flgM 基因在沉默株中的表達(dá)量。 a：sigX 基因在構(gòu)建的 5 株沉默突變株中的表達(dá)量；圖 b：flgM 基因在構(gòu)建的 5 株沉默突變★★★代表 P-value＜0.001。 qRT-PCR 法驗(yàn)證，構(gòu)建的所有的沉默突變株中目的基因表達(dá)量全部下降，下在 sigX 沉默突變株中，sigX 基因的表達(dá)量在 sigX-RNAi-216、sigX-RNANAi-240、sigX-RNAi-396 和 sigX-RNAi-405 菌株中的表達(dá)量分別是野生、35.82%、39.19%、25.93%和 20.46%（圖 2.2a）。在 flgM 沉默突變株中，表 達(dá) 量 在 flgM-RNAi-13 、 flgM-RNAi-14 、 flgM-RNAi-15 、 flgM-RNANAi-214 菌株中的表達(dá)量分別是野生株中的 0.42%、0.29%、0.39%、0.28%和.2b）。分別將沉默效果最好的 sigX-RNAi-216 和 flgM-RNAi-18 菌株命名為變igX 沉默株（sigX-RNAi strain）和 flgM（flgM-RNAi strain）沉默株，進(jìn)行后續(xù) 變形假單胞菌各菌株生長(zhǎng)曲線
圖 2-4 斜帶石斑魚(yú)被變形假單胞菌后的生存率。注：黑色線條代表被變形假單胞菌野生株感染；紅色線條代表被 flgM 沉默株感染；綠色線條代表被 sigX 沉默株感染；藍(lán)色線條代表被 PBS 感染�！铩铩锎� P-value＜0.001。被 PBS 感染的斜帶石斑魚(yú)在實(shí)驗(yàn)周期中沒(méi)有出現(xiàn)死亡；被變形假單胞菌野生株感染的斜帶石斑魚(yú)在感染的第 3 天出現(xiàn)死亡，存活率下降至 80%，第 4 天出現(xiàn)大量死亡，存活率下降至 20%，第 5 天全部死亡，存活率降至 0；被 sigX 沉默株感染的斜帶石斑魚(yú)在感染的第 3 天出現(xiàn)少量死亡，存活率下降至 95%，第 4 天繼續(xù)出現(xiàn)少量死亡，存活率下降至 70%第 5 天出現(xiàn)大量死亡，存活率下降至 40%，第 6 天出現(xiàn)少量死亡，存活率下降至 20%，此后不再出現(xiàn)死亡，最終存活率較野生株感染時(shí)上升 20%；被 flgM 沉默株感染的斜帶石斑魚(yú)4 天出現(xiàn)少量死亡，存活率下降至 95%，第 5 第 6 天無(wú)死亡，第 7 天出現(xiàn)死亡，存活率下降至 80%，第 8 天無(wú)死亡，第 9 天少量死亡，存活率下降至 75%，此后不再出現(xiàn)死亡，最終存活率較野生株感染時(shí)上升 75%。與斜帶石斑魚(yú)被變形假單胞菌野生株感染后的生存情況相比，被 sigX 沉默株感染后，死亡時(shí)間延長(zhǎng)，且生存率上升了 20%；被 flgM 沉默株感染后，死亡時(shí)間延長(zhǎng)，且生存率上升 75%（圖 2.4）。
本文編號(hào)：3063795
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【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
sigX基因和flgM基因在沉默株中的表達(dá)量
圖 2-2 sigX 基因和 flgM 基因在沉默株中的表達(dá)量。 a：sigX 基因在構(gòu)建的 5 株沉默突變株中的表達(dá)量；圖 b：flgM 基因在構(gòu)建的 5 株沉默突變★★★代表 P-value＜0.001。 qRT-PCR 法驗(yàn)證，構(gòu)建的所有的沉默突變株中目的基因表達(dá)量全部下降，下在 sigX 沉默突變株中，sigX 基因的表達(dá)量在 sigX-RNAi-216、sigX-RNANAi-240、sigX-RNAi-396 和 sigX-RNAi-405 菌株中的表達(dá)量分別是野生、35.82%、39.19%、25.93%和 20.46%（圖 2.2a）。在 flgM 沉默突變株中，表 達(dá) 量 在 flgM-RNAi-13 、 flgM-RNAi-14 、 flgM-RNAi-15 、 flgM-RNANAi-214 菌株中的表達(dá)量分別是野生株中的 0.42%、0.29%、0.39%、0.28%和.2b）。分別將沉默效果最好的 sigX-RNAi-216 和 flgM-RNAi-18 菌株命名為變igX 沉默株（sigX-RNAi strain）和 flgM（flgM-RNAi strain）沉默株，進(jìn)行后續(xù) 變形假單胞菌各菌株生長(zhǎng)曲線
圖 2-4 斜帶石斑魚(yú)被變形假單胞菌后的生存率。注：黑色線條代表被變形假單胞菌野生株感染；紅色線條代表被 flgM 沉默株感染；綠色線條代表被 sigX 沉默株感染；藍(lán)色線條代表被 PBS 感染�！铩铩锎� P-value＜0.001。被 PBS 感染的斜帶石斑魚(yú)在實(shí)驗(yàn)周期中沒(méi)有出現(xiàn)死亡；被變形假單胞菌野生株感染的斜帶石斑魚(yú)在感染的第 3 天出現(xiàn)死亡，存活率下降至 80%，第 4 天出現(xiàn)大量死亡，存活率下降至 20%，第 5 天全部死亡，存活率降至 0；被 sigX 沉默株感染的斜帶石斑魚(yú)在感染的第 3 天出現(xiàn)少量死亡，存活率下降至 95%，第 4 天繼續(xù)出現(xiàn)少量死亡，存活率下降至 70%第 5 天出現(xiàn)大量死亡，存活率下降至 40%，第 6 天出現(xiàn)少量死亡，存活率下降至 20%，此后不再出現(xiàn)死亡，最終存活率較野生株感染時(shí)上升 20%；被 flgM 沉默株感染的斜帶石斑魚(yú)4 天出現(xiàn)少量死亡，存活率下降至 95%，第 5 第 6 天無(wú)死亡，第 7 天出現(xiàn)死亡，存活率下降至 80%，第 8 天無(wú)死亡，第 9 天少量死亡，存活率下降至 75%，此后不再出現(xiàn)死亡，最終存活率較野生株感染時(shí)上升 75%。與斜帶石斑魚(yú)被變形假單胞菌野生株感染后的生存情況相比，被 sigX 沉默株感染后，死亡時(shí)間延長(zhǎng)，且生存率上升了 20%；被 flgM 沉默株感染后，死亡時(shí)間延長(zhǎng)，且生存率上升 75%（圖 2.4）。
本文編號(hào)：3063795
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