牙鲆Paralichthys olivaceus屬于海水魚類,在我國的經(jīng)濟價值較高,其胚后發(fā)育階段經(jīng)歷了劇烈的變態(tài)現(xiàn)象,對其變態(tài)發(fā)育機制的研究已成為熱點,一些異時性基因（heterochronic genes）如let-7、lin-28a、lin-28b、lin-41和lin-29等在很多脊椎動物中呈現(xiàn)出保守的時空性調(diào)控表達模式,在生物發(fā)育過程中進行精準有序地調(diào)控表達,對這些基因的研究有助于牙鲆變態(tài)發(fā)育分子機制的闡明。let-7 miRNAs類似于其他的microRNAs,主要作用于靶基因的3’-UTR序列。LIN-28a及其同源分子LIN-28b是RNA結(jié)合蛋白,LIN-41是細胞質(zhì)蛋白,LIN-29是多鋅指結(jié)構(gòu)蛋白,它們都與生物發(fā)育時空性緊密相關(guān)。本課題組在對牙鲆的變態(tài)發(fā)育研究中已鑒定得到牙鲆10個let-7 miRNAs并對其在牙鲆發(fā)育中的表達進行了相對定量檢測。本論文主要研究其余四個異時性基因lin-28a、lin-28b、lin-41和lin-29的克隆、表達分析及其在牙鲆變態(tài)發(fā)育中與let-7的調(diào)控關(guān)系。本論文以牙鲆總cDNA為模板,采用PCR等克隆獲得牙鲆lin-28a、... 

【文章來源】：上海海洋大學上海市

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖0-1哺乳動物中l(wèi)et-7家族主要成員間的調(diào)控Fig0-1Regulationofcertainmembersofthelet-7familyinmammals（引自SarahRoush,FrankJ.Slack.2008）

1.3.1.2 牙鲆異時性基因的克隆以牙鲆總 RNA 為模板，首先克隆出牙鲆 lin-28a、lin-28b、lin-41、lin-29 各基因編碼區(qū) cDNA 小片段，用拼接軟件進行拼接、去重疊后得到各基因 cDNA 編碼區(qū)片段，再通過3'-RACE和5'-RACE克隆方法分別擴增得到牙鲆lin-28a、lin-28b和 lin-29 基因的 3'和 5'非編碼區(qū)序列，最后用 DNAMAN 軟件將其編碼區(qū)和非編碼區(qū)拼接得到牙鲆 lin-28a、lin-28b 和 lin-29 基因 cDNA 全長。lin-28a 基因全長 1617bp，其中 5'-UTR 為 118bp、3'-UTR 為 890bp、CDS 為609bp，編碼 202 個氨基酸，起始密碼子和終止密碼子分別為 ATG 和 TAA（圖 1-1）。lin-28b 基因全長 2998bp，5'-UTR 為 218bp、3'-UTR 為 2075bp、CDS 為 705bp，編碼 234 個氨基酸，起始密碼子和終止密碼子分別為 ATG 和 TGA（圖 1-2）。lin-29基因全長 1769 bp，5'-UTR 為 112bp、3'-UTR 為 328bp、CDS 為 1329bp，編碼 442個氨基酸（圖 1-3）。且上述三個基因的 3'-末端都有 poly（A）尾。lin-41 的 CDS有 2502bp，編碼 833 個氨基酸（圖 1-4）。

30圖 1-2 牙鲆 lin-28b 基因 cDNA 全長及氨基酸序列Fig 1-2 The cDNA and amino acid sequences of lin-28b in Japanese flounder注：*表示終止密碼子。Note:* indicates stop codon.

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]基于機器學習的microRNA靶標預(yù)測算法研究[D]. 齊曉陽.燕山大學 2012
[2]水稻B-box鋅指蛋白OsBBX25的功能分析及雙T載體轉(zhuǎn)基因水稻的分子鑒定[D]. 劉焱.東北林業(yè)大學 2012
[3]異時性基因在Caenorhabditis elegans壽命調(diào)控中的作用及在小鼠發(fā)育中的表達研究[D]. 余剛.廈門大學 2009
[4]基于生物信息學的冷休克結(jié)構(gòu)域蛋白家族進化研究[D]. 張瑋瑋.遼寧師范大學 2007



本文編號：3063149