基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix metalloproteinases, MMPs）是能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellular matrix, ECM）的最重要的金屬離子依賴性蛋白酶。MMPs參與許多生理、病理過(guò)程，廣泛存在于動(dòng)、植物和微生物體內(nèi)。研究發(fā)現(xiàn)，MMPs參與魚死后肌肉軟化過(guò)程中細(xì)胞外基質(zhì)的降解，而膠原酶和明膠酶在此過(guò)程中起到關(guān)鍵作用。作為一種重要的蛋白酶，基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）參與動(dòng)物膠原蛋白的新陳代謝，但其在水產(chǎn)動(dòng)物中的存在情況少有報(bào)道。本文以淡水鯉魚為研究對(duì)象，克隆得到MMP-2基因序列并利用原核表達(dá)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)MMP-2催化結(jié)構(gòu)域的體外表達(dá)并對(duì)重組MMP-2的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行深入分析。本研究首先利用RT-PCR和RACE技術(shù)從鯉魚肌肉中克隆得到MMP-2的cDNA全長(zhǎng)共2789bp，開放閱讀框共1971bp，編碼657個(gè)氨基酸殘基。鯉魚MMP-2含有四個(gè)保守的結(jié)構(gòu)域，包括N端含29個(gè)氨基酸殘基的信號(hào)肽、前肽結(jié)構(gòu)域、含有三個(gè)重復(fù)Ⅱ型纖連蛋白結(jié)構(gòu)域的催化結(jié)構(gòu)域以及C端的類血紅素結(jié)構(gòu)域。利用空間預(yù)測(cè)軟件Swiss-model，對(duì)鯉魚MMP-2進(jìn)行同源建模，預(yù)測(cè)其三級(jí)結(jié)構(gòu)... 

【文章來(lái)源】：集美大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 基質(zhì)金屬蛋白酶簡(jiǎn)介
        1.1.1 MMPs 家族特征
        1.1.2 MMPs 的分類
        1.1.3 MMPs 的空間結(jié)構(gòu)
        1.1.4 MMPs 的活性調(diào)節(jié)
        1.1.5 MMPs 的內(nèi)源性抑制劑
    1.2 MMPs 在水產(chǎn)品中的研究現(xiàn)狀
    1.3 MMP-2 的研究
    1.4 本研究的目的和意義
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 動(dòng)物
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑與材料
        2.1.4 常用溶液及培養(yǎng)基配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 基質(zhì)金屬蛋白酶-2 的基因克隆
        2.2.2 生物信息學(xué)分析
        2.2.3 重組蛋白的表達(dá)與純化
        2.2.4 重組蛋白的性質(zhì)分析方法
        2.2.5 多克隆抗體的制備
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 鯉魚基質(zhì)金屬蛋白酶-2 的基因克隆
    3.2 鯉魚 MMP-2 的序列分析
        3.2.1 鯉魚 MMP-2 一級(jí)結(jié)構(gòu)分析
        3.2.2 鯉魚 MMP-2 的二級(jí)結(jié)構(gòu)分析
        3.2.3 鯉魚 MMP-2 的三級(jí)結(jié)構(gòu)分析
    3.3 鯉魚 MMP-2 催化結(jié)構(gòu)域蛋白的原核表達(dá)
        3.3.1 表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.3.2 重組 MMP-2 蛋白的表達(dá)與鑒定
        3.3.3 重組 MMP-2 蛋白的純化及活性驗(yàn)證
    3.4 重組 MMP-2 的性質(zhì)分析
        3.4.1 重組 MMP-2 最適反應(yīng)溫度和最適 pH
        3.4.2 不同蛋白酶抑制劑對(duì)重組 MMP-2 活性的影響
        3.4.3 不同金屬離子對(duì)重組 MMP-2 活性的影響
    3.5 重組 MMP-2 的降解作用
        3.5.1 重組 MMP-2 對(duì)Ⅰ型膠原蛋白的降解作用
        3.5.2 重組 MMP-2 對(duì)肌原纖維蛋白的降解作用
        3.5.3 重組 MMP-2 對(duì)膠原肽的降解作用
    3.6 鯉魚肌肉中天然 MMP-2 的檢測(cè)
    3.7 Ⅱ型纖連蛋白結(jié)構(gòu)域?qū)χ亟M MMP-2 活性的影響
        3.7.1 Ⅱ型纖連蛋白結(jié)構(gòu)域基因擴(kuò)增
        3.7.2 重組 Fnt 和△Fnt 表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建
        3.7.3 重組△Fnt 和 Fnt 蛋白的表達(dá)與鑒定
        3.7.4 重組△Fnt 和 Fnt 蛋白的純化與活性驗(yàn)證
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3058152