大鯢蛙病毒（Chinese giant salamander Ranavirus, CGSRV）屬于虹彩病毒科、蛙病毒屬,是近年來發(fā)現(xiàn)的一種嚴重危害養(yǎng)殖大鯢的新病原,其感染具有發(fā)病率與死亡率高的特點,給大鯢養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展造成了嚴重威脅,其防控技術(shù)已成為人們研究的熱點。RNA干擾（RNA interference, RNAi）是利用小干擾RNA（small interfering RNA, siRNA）作為序列特異性的觸發(fā)器,與細胞內(nèi)同源的mRNA互補配對后再由RNase III家族中能夠特異性識別雙鏈RNA的Dicer酶切斷,引起生物細胞內(nèi)同源基因發(fā)生降解而表現(xiàn)出該基因特異性沉默的現(xiàn)象,達到阻礙病毒基因順利表達的目的,起到預(yù)防和治療病毒感染的目的。RNA干擾是生物進化的結(jié)果,參與多種真核生物功能,包括病毒防御、基因組重排、染色質(zhì)重組、干細胞的維持、腦的形態(tài)建成以及發(fā)育時序決定等。本研究通過化學(xué)合成的方法,合成CGSRV病毒主要衣殼蛋白基因（MCP）、甲基轉(zhuǎn)移酶基因（MTase）、DNA多聚酶基因（DNA polymerase）特異的siRNA,把siRNA轉(zhuǎn)染到鯉魚上皮瘤細胞（Epi... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
論文縮略詞表
第一章 文獻綜述
    1 蛙病毒概述
        1.1 蛙病毒生物學(xué)特性
        1.2 蛙病毒的復(fù)制周期
        1.3 蛙病毒的主要功能基因
        1.4 蛙病毒的感染特性
        1.5 大鯢蛙病毒
    2 RNA干擾（RNA interference,RNAi）
        2.1 RNA干擾現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)
        2.2 RNA干擾的作用機制
        2.3 獲得siRNA的方法
        2.4 展望未來
    3 研究目的與意義
第二章 siRNA對CGSRV病毒MCP、MTases、DNA polymerase基因的干擾
    1 實驗材料
        1.1 大鯢蛙病毒（CGSRV）懸液
        1.2 細胞株
        1.3 細胞培養(yǎng)基
        1.4 溶液及試劑
        1.5 主要儀器
    2 方法
        2.1 siRNA靶序列的設(shè)計與合成
        2.2 EPC細胞的傳代培養(yǎng)
        2.3 siRNA轉(zhuǎn)染濃度的優(yōu)化
        2.4 最適病毒濃度的優(yōu)化
        2.5 siRNA對MCP、MTases、DNA polymerase基因的干擾
    3 結(jié)果與分析
        3.1 siRNA靶序列的設(shè)計與合成
        3.2 siRNA轉(zhuǎn)染濃度的優(yōu)化
        3.3 最適病毒濃度的優(yōu)化
        3.4 siRNA對MCP、MTases、DNA polymerase基因的干擾
    4 討論
        4.1 siRNA的設(shè)計與合成
        4.2 siRNA轉(zhuǎn)染影響因素
        4.3 siRNA的干擾
    5 小結(jié)
第三章 熒光定量PCR法和病毒滴度（TCIDso）法檢測siRNA的干擾效果
    1 實驗材料
        1.1 CGSRV病毒懸液
        1.2 實驗試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 主要試劑配制方法
    2 方法
        2.1 熒光定量PCR（qRT-PCR）引物設(shè)計與合成
        2.2 總RNA提取
        2.3 RNA純度及濃度檢測
        2.4 RNA反轉(zhuǎn)錄（RT-PCR）
        2.5 退火溫度的優(yōu)化與標準曲線的建立
        2.6 MCP、MTases、DNA polymerase基因表達量的檢測
50)測定">        2.7 病毒滴度(TCID₅₀)測定
    3 結(jié)果與分析
        3.1 RNA純度和濃度檢測
        3.2 退火溫度的優(yōu)化
        3.3 標準曲線及擴增效率
        3.4 RNA干擾后各基因在不同時間點的相對表達
50)測定">        3.5 病毒滴度(TCID₅₀)測定
    4 討論
    5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表及參與發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]蛙虹彩病毒（RGV）的復(fù)制與宿主細胞骨架及超微組織變化[D]. 黃曉紅.中國科學(xué)院研究生院（水生生物研究所） 2006

碩士論文
[1]大鯢蛙病毒生物學(xué)特性及其感染的病理學(xué)研究[D]. 周趙英.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號：2935185