草魚呼腸孤病毒（Grass carp reovirus,GCRV）引起的草魚出血病（Grass carp hemorrhage）是嚴(yán)重危害草魚的傳染性疾病。但是,草魚出血病的有效防控仍然存在挑戰(zhàn)。疫苗免疫是預(yù)防草魚出血病的有效途徑。核酸疫苗具有制備簡(jiǎn)單、安全性高和免疫應(yīng)答有效持久等優(yōu)點(diǎn),但是作為一種外源物質(zhì),易被組織降解、清除,導(dǎo)致其不能長(zhǎng)期穩(wěn)定的發(fā)揮免疫效應(yīng)。在本研究中借助細(xì)菌菌蛻技術(shù),以大腸桿菌DH5α為載體,制備了大腸桿菌菌蛻載GCRV vp7核酸疫苗,以提高核酸疫苗的免疫效果為目的,評(píng)價(jià)菌蛻介導(dǎo)的核酸疫苗對(duì)草魚出血病的防控效果。細(xì)菌表面展示疫苗因其具有良好的免疫應(yīng)答效果使之在疫苗開發(fā)中具有優(yōu)勢(shì)。本研究借助細(xì)菌表面展示技術(shù)開發(fā)了大腸桿菌表面展示GCRV VP7蛋白疫苗;進(jìn)一步分別構(gòu)建了大腸桿菌BL21（DE3）載嗜水氣單胞菌外膜A蛋白（Outer membrane protein A,OmpA）、主要黏附素蛋白（Major adhesin,Mah）與VP7蛋白共展示疫苗,以期通過浸浴免疫達(dá)到注射免疫抗病效果,對(duì)共展示疫苗浸浴特性及其機(jī)制進(jìn)行了初步研究。取得結(jié)果如下:1.通過基因重... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：123 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

E蛋白裂解革蘭氏陰性細(xì)菌掃描電鏡圖（Ebensenetal.2004）

.8 細(xì)菌表面展示研究進(jìn)展8.1 細(xì)菌表面展示系統(tǒng)簡(jiǎn)介細(xì)菌細(xì)胞表面展示是指利用基因重組手段，將具有特定功能的某一外源蛋白質(zhì)或，即乘客蛋白（Passenger protein）與一些錨定元件，即載體蛋白（Carrier protein）表達(dá)，在錨定元件的作用下，實(shí)現(xiàn)外源蛋白直接在細(xì)菌表面進(jìn)行固著的新型 DNA技術(shù)，表面展示后，外源的蛋白質(zhì)或多肽仍然保持了原有的生物活性和相對(duì)獨(dú)立的結(jié)構(gòu)（Benhar 2001）。國(guó)內(nèi)外研究已經(jīng)報(bào)道了多種用于構(gòu)建細(xì)菌表面展示體系的載白如革蘭氏陽性菌的自溶素、S 層蛋白和芽胞衣等；革蘭氏陰性菌的外膜蛋白、脂、細(xì)胞表面附屬蛋白、S 層蛋白和自轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白等（Lee et al. 2003; Okano et al. 2008據(jù)錨定元件性能和結(jié)構(gòu)的不同，目前主要應(yīng)用 3 種方式實(shí)現(xiàn)兩者的融合表達(dá)和細(xì)菌展示，即 N 末端融合，C 末端融合和三夾板融合（Kuroda et al. 2014）（見圖 1-2菌表面展示在重組活菌疫苗的制備，多肽文庫構(gòu)建與篩選等多方面具有廣泛的發(fā)展（Aoki et al. 2002; Brown 1997; Lu et al. 1995; Lee et al. 2003）（見圖 1-3）。下面重紹細(xì)菌表面展示在疫苗開發(fā)中的應(yīng)用。

圖 1-3 微生物表面展示應(yīng)用（Lee et al. 2003）Fig. 1-3 Applications of microbial cell surface display (Lee et al. 2003)表面展示在疫苗開發(fā)中的應(yīng)用表面展示疫苗遞送系統(tǒng)的研究是細(xì)菌表面展示最常見的應(yīng)用之一。將性抗原展示在一些弱毒或無毒菌株的表面，這些重組菌可以直接作為物或人體，達(dá)到抵抗疾病爆發(fā)的目的（Samuelson et al. 2002）。相比苗，活菌表面展示疫苗制備簡(jiǎn)單，抗原無需經(jīng)過細(xì)胞內(nèi)提取和體外純過程，還可保護(hù)外源抗原在遞送過程中免于被降解（Neutra and Kozlo 2010）。此外，利用重組活菌疫苗進(jìn)行免疫時(shí)，細(xì)菌表面展示的異源異性抗體應(yīng)答中具有明顯的優(yōu)勢(shì)，它將抗原遞呈在細(xì)菌表面，這樣使抗原更容易被免疫系統(tǒng)識(shí)別。細(xì)菌本身能發(fā)揮佐劑的功能，促進(jìn)抗原原的攝取，單次免疫后也會(huì)產(chǎn)生持久的免疫效果（Dertzbathy et al. 2005）。目前，有兩種策略用于活菌表面展示疫苗的開發(fā)，菌來生產(chǎn)活菌表面展示疫苗，如沙門氏菌和牛分支桿菌等；一種是在品級(jí)細(xì)菌表面展示外源抗原，如大腸桿菌、乳酸菌和金黃色葡萄球菌

【參考文獻(xiàn)】：
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