草魚呼腸孤病毒（Grass carp reovirus,GCRV）引起的草魚出血�。℅rass carp hemorrhage）是嚴重危害草魚的傳染性疾病。但是,草魚出血病的有效防控仍然存在挑戰(zhàn)。疫苗免疫是預防草魚出血病的有效途徑。核酸疫苗具有制備簡單、安全性高和免疫應答有效持久等優(yōu)點,但是作為一種外源物質(zhì),易被組織降解、清除,導致其不能長期穩(wěn)定的發(fā)揮免疫效應。在本研究中借助細菌菌蛻技術,以大腸桿菌DH5α為載體,制備了大腸桿菌菌蛻載GCRV vp7核酸疫苗,以提高核酸疫苗的免疫效果為目的,評價菌蛻介導的核酸疫苗對草魚出血病的防控效果。細菌表面展示疫苗因其具有良好的免疫應答效果使之在疫苗開發(fā)中具有優(yōu)勢。本研究借助細菌表面展示技術開發(fā)了大腸桿菌表面展示GCRV VP7蛋白疫苗;進一步分別構建了大腸桿菌BL21（DE3）載嗜水氣單胞菌外膜A蛋白（Outer membrane protein A,OmpA）、主要黏附素蛋白（Major adhesin,Mah）與VP7蛋白共展示疫苗,以期通過浸浴免疫達到注射免疫抗病效果,對共展示疫苗浸浴特性及其機制進行了初步研究。取得結(jié)果如下:1.通過基因重... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

E蛋白裂解革蘭氏陰性細菌掃描電鏡圖（Ebensenetal.2004）

.8 細菌表面展示研究進展8.1 細菌表面展示系統(tǒng)簡介細菌細胞表面展示是指利用基因重組手段，將具有特定功能的某一外源蛋白質(zhì)或，即乘客蛋白（Passenger protein）與一些錨定元件，即載體蛋白（Carrier protein）表達，在錨定元件的作用下，實現(xiàn)外源蛋白直接在細菌表面進行固著的新型 DNA技術，表面展示后，外源的蛋白質(zhì)或多肽仍然保持了原有的生物活性和相對獨立的結(jié)構（Benhar 2001）。國內(nèi)外研究已經(jīng)報道了多種用于構建細菌表面展示體系的載白如革蘭氏陽性菌的自溶素、S 層蛋白和芽胞衣等；革蘭氏陰性菌的外膜蛋白、脂、細胞表面附屬蛋白、S 層蛋白和自轉(zhuǎn)運蛋白等（Lee et al. 2003; Okano et al. 2008據(jù)錨定元件性能和結(jié)構的不同，目前主要應用 3 種方式實現(xiàn)兩者的融合表達和細菌展示，即 N 末端融合，C 末端融合和三夾板融合（Kuroda et al. 2014）（見圖 1-2菌表面展示在重組活菌疫苗的制備，多肽文庫構建與篩選等多方面具有廣泛的發(fā)展（Aoki et al. 2002; Brown 1997; Lu et al. 1995; Lee et al. 2003）（見圖 1-3）。下面重紹細菌表面展示在疫苗開發(fā)中的應用。

圖 1-3 微生物表面展示應用（Lee et al. 2003）Fig. 1-3 Applications of microbial cell surface display (Lee et al. 2003)表面展示在疫苗開發(fā)中的應用表面展示疫苗遞送系統(tǒng)的研究是細菌表面展示最常見的應用之一。將性抗原展示在一些弱毒或無毒菌株的表面，這些重組菌可以直接作為物或人體，達到抵抗疾病爆發(fā)的目的（Samuelson et al. 2002）。相比苗，活菌表面展示疫苗制備簡單，抗原無需經(jīng)過細胞內(nèi)提取和體外純過程，還可保護外源抗原在遞送過程中免于被降解（Neutra and Kozlo 2010）。此外，利用重組活菌疫苗進行免疫時，細菌表面展示的異源異性抗體應答中具有明顯的優(yōu)勢，它將抗原遞呈在細菌表面，這樣使抗原更容易被免疫系統(tǒng)識別。細菌本身能發(fā)揮佐劑的功能，促進抗原原的攝取，單次免疫后也會產(chǎn)生持久的免疫效果（Dertzbathy et al. 2005）。目前，有兩種策略用于活菌表面展示疫苗的開發(fā)，菌來生產(chǎn)活菌表面展示疫苗，如沙門氏菌和牛分支桿菌等；一種是在品級細菌表面展示外源抗原，如大腸桿菌、乳酸菌和金黃色葡萄球菌

【參考文獻】：
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本文編號：2931157