大黃魚（Larimichthys crocea）是我國海水養(yǎng)殖的重要經(jīng)濟(jì)魚類之一,因其營養(yǎng)豐富、肉質(zhì)鮮美一直受到消費(fèi)者的青睞。但是近年來,隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大,大黃魚產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的升級與發(fā)展,大黃魚的病害已成為制約大黃魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要屏障。大黃魚“內(nèi)臟白點(diǎn)病”是近年影響大黃魚養(yǎng)殖的重要細(xì)菌性疾病。本研究通過人工回感實(shí)驗(yàn),運(yùn)用組織病理切片與免疫組化技術(shù)觀察了大黃魚“內(nèi)臟白點(diǎn)病”病原——?dú)⑾泗~假單胞菌在大黃魚體內(nèi)的分布情況;對殺香魚假單胞菌的溶血素共調(diào)節(jié)蛋白基因Hcp進(jìn)行克隆、表達(dá),并獲得了以包涵體形式的重組蛋白Hcp,通過蛋白復(fù)性后成功獲得可溶性蛋白,可運(yùn)用于殺香魚假單胞菌T6SS分泌系統(tǒng)中溶血素共調(diào)節(jié)蛋白Hcp深層研究。對健康大黃魚進(jìn)行殺香魚假單胞菌人工感染試驗(yàn),結(jié)果大黃魚表現(xiàn)出了典型的“內(nèi)臟白點(diǎn)病”的癥狀:病魚無活力,反應(yīng)遲鈍。解剖發(fā)現(xiàn)脾、腎臟、肝臟等內(nèi)部器官上長滿白點(diǎn),并伴隨腹水癥狀。對發(fā)病魚進(jìn)行組織病理觀察,發(fā)病魚肝、脾、腎等內(nèi)臟組織都出現(xiàn)明顯損傷,表現(xiàn)出不同程度的充血、出血、壞死等,隨著菌體在大黃魚體內(nèi)大量增殖,大黃魚全身多器官組織的細(xì)胞出現(xiàn)壞死溶解,最終導(dǎo)致感染魚因多組織器... 

【文章來源】：浙江海洋大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

T6SS分泌系統(tǒng)模型

孵育盒后 4℃冰箱過夜。切片放入 PBS 緩沖液中清洗 3min 后晾干液體后滴加 70μL 羊抗兔 IgG 聚合物，37℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育液洗滌 3min 后換液，重復(fù) 3 次。染色：滴加適量 DAB 顯色劑，室溫顯色 5-20min，蒸餾水終止染液中染色 40s，水洗 1min。1%鹽酸酒精溶液分化 3s，流水漂洗。封片：切片依次放入 85%乙醇，95%乙醇各 1min，無水乙置于二甲苯 I、II 各 2min。使用中性樹膠封片，利用顯微鏡拍感試驗(yàn)結(jié)果魚注射 24 h 后出現(xiàn)游動緩慢，應(yīng)激反應(yīng)遲鈍等臨床癥狀；注射現(xiàn)死亡，試驗(yàn)進(jìn)行至 10d 時(shí)試驗(yàn)組所有大黃魚均死亡。對照組表無潰瘍等癥狀，主要是鰓充血，部分魚吻部充血。剖解病死充血嚴(yán)重，脾臟布滿白色小結(jié)節(jié)，其中腎臟白色結(jié)節(jié)較脾臟大

圖 2-2 病魚脾臟中病原菌分離培養(yǎng)(左：TCBS 培養(yǎng)基；右：TSA 培養(yǎng)基)Fig.2-2 Isolation and culture of pathogenic bacteria from the spleen of Pseudosciaena crocea (left:TCBS medium; right: TSA medium)3.2 組織病理學(xué)變化及特征觀察臨床解剖觀察顯示試驗(yàn)組感染魚的肝、脾、腎等內(nèi)臟組織與器官都表現(xiàn)出不同程度的充血、出血、壞死等。肝細(xì)胞發(fā)生廣泛性變性，壞死、溶解，有大量的炎性細(xì)胞浸潤；腎小管上皮細(xì)胞腫脹變性，腎間質(zhì)巨唾細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤、嚴(yán)重空泡變性、壞死崩解；脾臟少量含鐵血黃素的沉積，淋巴細(xì)胞壞死，中性粒細(xì)胞和大量巨噬細(xì)胞浸潤。感染魚肝臟充血，肝血竇與中央靜脈瘀血更清晰，肝血竇、中央靜脈以及一些肝細(xì)胞內(nèi)可發(fā)現(xiàn)病原菌；肝細(xì)胞腫脹明顯，肝板排列不齊，其中病變嚴(yán)重的區(qū)域失去原有網(wǎng)狀支架結(jié)構(gòu)，形成壞死灶。細(xì)胞核固縮，細(xì)胞質(zhì)染色變深呈嗜堿性，細(xì)胞結(jié)構(gòu)被破壞，空泡化嚴(yán)重。其中壞死灶中心區(qū)內(nèi)充滿解體后的細(xì)胞碎片，部分肝細(xì)胞肝細(xì)胞其器官功能受到嚴(yán)重破壞。

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號：2908609