在魚類胚胎發(fā)育過(guò)程中,胰島素樣生長(zhǎng)因子-II（insulin-like growth factors-II,IGF-II）起著關(guān)鍵的作用。哲羅鮭（Hucho taimen）是鮭科魚類中最大的個(gè)體,其細(xì)嫩的肉質(zhì)、鮮美的味道具有很高的食用與經(jīng)濟(jì)價(jià)值,目前國(guó)內(nèi)還沒有關(guān)于哲羅鮭的IGF-II基因的研究。本研究根據(jù)Gen Bank里收錄的鮭鱒魚IGF-II基因序列設(shè)計(jì)引物P1、P2,以哲羅鮭肝臟RNA提取物為模板,利用RT-PCR方法擴(kuò)增出哲羅鮭IGF-II基因開放閱讀框。首先本研究利用生物學(xué)軟件對(duì)成功克隆出的哲羅鮭IGF-II基因開放閱讀框進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,其中利用Meg Align軟件中默認(rèn)的Clustal W模式對(duì)IGF-II核苷酸序列與氨基酸序列進(jìn)行同源性分析。利用DNAMAN翻譯獲得IGF-II氨基酸序列,利用Protean軟件進(jìn)行IGF-II蛋白分子量及等電點(diǎn)進(jìn)行了預(yù)測(cè),采用Clustalx 1.83軟件和MEGA 5.0軟件構(gòu)建了IGF-II核酸序列系統(tǒng)進(jìn)化樹。其次,本研究根據(jù)哲羅魚IGF-II基因開放閱讀框序列,利用Primer軟件設(shè)計(jì)了一對(duì)用于做熒光實(shí)時(shí)定量PCR的引物IG... 

【文章來(lái)源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

IGF-II基因擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖

4-2 IGF-II 重組質(zhì)粒酶切鑒定 雙酶切后的 IGF-II 重組質(zhì)粒；II 重組質(zhì)粒；M. DL2000 分子量標(biāo)準(zhǔn)dentification of IGF-II by dual-digestionigestion of recombinant plasmid IGF-II;nt plasmid IGF-II; M. DL2000 DNAmark信息學(xué)分析析序結(jié)果，經(jīng) Blast 與 GenBank 里MAN 分析結(jié)果顯示，哲羅鮭 IGF-；利用 Protean 軟件預(yù)測(cè)確定 IGF 9.92。與鱖魚、虹鱒的 IGF-II 結(jié)構(gòu)

圖 4-3 哲羅鮭 IGF-II ORF 的 cDNA 和氨基酸序列Fig.4-3 The cDNAand deduced amino acid sequence in Hucho taimen IGF-II ORF注: 大寫字母對(duì)應(yīng)下面部分為氨基酸序列，大寫字母部分為編碼區(qū)；黑字淺灰色底部分信號(hào)肽；黑字深灰色底部分表示成熟肽；白字黑色底部分表示 E 肽；*表示終止密碼子。Note: The opposites of the capital letters show the amino acids and capital letters repreding regions; Black letters and light gray background indicate the signal peptide; Black lettersrk gray background indicate the mature peptide; White letters and black background indicate tptide; * indicates the stop codon..2.2 哲羅鮭 IGF-II 同源性的分析應(yīng)用 MegAlign 軟件中默認(rèn)的 Clustal W 模式，將哲羅鮭 IGF-II 基因 ORF 核序列及其編碼的氨基酸序列與其他 17 個(gè)物種進(jìn)行同源性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，哲的 IGF-II 與大西洋鮭的核苷酸及氨基酸同源性分別為 98.6%和 98.4%。而與金、牙鲆、鱖魚、鱸魚、點(diǎn)藍(lán)子魚、斑馬宮麗魚的 IGF-II 的相似度在 88%-85


本文編號(hào)：2906014