隨著水體的富營養(yǎng)化程度不斷加劇,淡水水體中藍(lán)藻水華的暴發(fā)也變得日趨頻繁。微囊藻毒素是銅綠微囊藻等水華優(yōu)勢藻類死亡分解時能釋放出的二級毒性代謝物,污染水環(huán)境,對水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)是一個巨大的挑戰(zhàn)。微囊藻毒素的水溶性好、熱穩(wěn)定性高且能在生物體內(nèi)蓄積,所以其造成的污染具有持續(xù)性、廣泛性。MC-LR則是微囊藻毒素中一種毒性較強,分布較廣,以肝臟為主要的靶器官的毒素。當(dāng)前微囊藻毒素的污染已成為一個與人們生活息息相關(guān)的重大環(huán)境問題。歐洲鰻鱺是我國出口創(chuàng)匯的重要經(jīng)濟(jì)水產(chǎn)動物,但在淡水養(yǎng)殖過程中卻容易受到藍(lán)藻水華的影響。本研究主要利用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)和熒光定量PCR技術(shù),全面分析歐洲鰻鱺肝臟組織中受MC-LR影響的脂質(zhì)代謝途徑及其相關(guān)的重要基因。對健康歐洲鰻鱺分別注射相應(yīng)濃度的MC-LR溶液與等量的生理鹽水溶液24小時后,取出足夠的肝臟樣品,提取RNA后進(jìn)行純化和文庫構(gòu)建,轉(zhuǎn)錄組測序并數(shù)據(jù)分析。本次實驗九個樣品平均產(chǎn)出23.44M轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),通過KEGG分析發(fā)現(xiàn),14μg/kgMC-LR暴露24h后與歐洲鰻鱺肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)的通路有15條會受到影響,140μg/kgMC-LR暴露24h后與歐洲鰻鱺肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)的通路有13條會受到影響。MC-LR影響的脂質(zhì)代謝基因涉及脂肪酸、丙酮酸、類固醇、肌醇磷酸鹽、甘油磷脂、鞘脂、醚酯、亞麻油酸、花生四烯酸和酮體等物質(zhì)的代謝。14μg/kgMC-LR處理組與對照組對比,其肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)的差異基因片段一共有201個,其中上調(diào)的基因片段79個,下調(diào)的基因片段122個;140μg/kgMC-LR處理組與對照組對比,其肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)的差異基因片段一共有92個,其中上調(diào)的基因片段64個,下調(diào)的基因片段28個。有53個基因片段在這兩種不同MC-LR濃度處理后都出現(xiàn)了顯著性差異變化,并且其中的52個基因片段上下調(diào)變化情況一致。熒光定量PCR檢測結(jié)果驗證了本次測序結(jié)果的可靠性。本實驗結(jié)果可以為診斷和防治MC-LR毒素引發(fā)的代謝性疾病提供科學(xué)的判斷依據(jù)。
【學(xué)位單位】：集美大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：X52;S917.4
【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號表
第1章 引言
    1.1 微囊藻毒素的結(jié)構(gòu)、產(chǎn)生和理化性質(zhì)
        1.1.1 微囊藻毒素的結(jié)構(gòu)
        1.1.2 微囊藻毒素的產(chǎn)生
        1.1.3 微囊藻毒素的理化性質(zhì)
    1.2 我國水體微囊藻毒素的污染情況
    1.3 微囊藻毒素的毒性
        1.3.1 微囊藻毒素對肝臟的毒性
        1.3.2 微囊藻毒素對腎臟的毒性
        1.3.3 微囊藻毒素對生殖系統(tǒng)的毒性
        1.3.4 微囊藻毒素的其他毒性
    1.4 微囊藻毒素的流行病學(xué)研究
    1.5 肝臟脂質(zhì)代謝的概述
        1.5.1 脂質(zhì)及肝臟脂質(zhì)代謝的研究概況
        1.5.2 微囊藻毒素對肝臟脂質(zhì)代謝影響的研究方法
    1.6 轉(zhuǎn)錄組學(xué)及轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)的應(yīng)用
        1.6.1 轉(zhuǎn)錄組學(xué)概述
        1.6.2 轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)的應(yīng)用
    1.7 本研究的目的與意義、研究內(nèi)容及技術(shù)路線
        1.7.1 本研究的目的與意義
        1.7.2 本研究的研究內(nèi)容
        1.7.3 本研究的技術(shù)路線
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗用藥
        2.1.2 實驗用魚
        2.1.3 主要試劑與耗材
        2.1.4 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 實驗動物暫養(yǎng)
        2.2.2 MC-LR注射濃度的確定
        2.2.3 MC-LR處理
        2.2.4 歐洲鰻鱺肝臟總RNA的提取、逆轉(zhuǎn)錄及檢驗
        2.2.5 目的基因的大體系擴(kuò)增及目的片段的純化回收
        2.2.6 實時熒光定量PCR（qRT-PCR）分析
        2.2.7 實驗數(shù)據(jù)處理
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 歐洲鰻鱺注射濃度確定
    3.2 歐洲鰻鱺肝臟總RNA質(zhì)量檢測結(jié)果
    3.3 測序評估的結(jié)果
        3.3.1 測序數(shù)據(jù)統(tǒng)計結(jié)果
        3.3.2 參考基因組比對結(jié)果
        3.3.3 基因表達(dá)量分析結(jié)果
        3.3.4 差異表達(dá)基因檢測結(jié)果
        3.3.5 差異表達(dá)基因GO功能分析
        3.3.6 差異表達(dá)基因Pathway功能分析
    3.4 肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)的KEGG生物通路和差異基因片段統(tǒng)計與分析
        3.4.1 肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)的KEGG生物通路統(tǒng)計與分析
        3.4.2 肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)的差異基因片段統(tǒng)計與分析
    3.5 驗證轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果
    3.6 不同MC-LR濃度處理的結(jié)果
第4章 討論
    4.1 MC-LR注射濃度分析
    4.2 歐洲鰻鱺肝臟轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析
    4.3 歐洲鰻鱺肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)差異表達(dá)分析
    4.4 不同MC-LR濃度處理的結(jié)果分析
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)

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本文編號：2874071