益生菌能夠定植在魚(yú)類(lèi)腸黏膜表面并激活魚(yú)類(lèi)機(jī)體的免疫功能,改善其腸道菌群平衡,增強(qiáng)魚(yú)類(lèi)機(jī)體的免疫力,抑制病原菌的定植和生長(zhǎng),進(jìn)而預(yù)防魚(yú)類(lèi)的各種細(xì)菌性疾病發(fā)生。本研究以活性原籍枯草芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌為基礎(chǔ)飼料添加劑,嗜水氣單胞菌為指示菌,開(kāi)展基于益生菌調(diào)節(jié)的黃河鯉腸道微生物區(qū)系響應(yīng)規(guī)律的初步研究,對(duì)于研發(fā)魚(yú)類(lèi)微生態(tài)制劑和防控細(xì)菌性疾病具有重要的實(shí)踐指導(dǎo)意義。首先,為了研究活性原籍枯草芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌對(duì)黃河鯉腸道菌群的影響,我們將黃河鯉隨機(jī)分為兩組,第一組作為試驗(yàn)組,飼喂添加0.5‰活性原籍枯草芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌的基礎(chǔ)飼料,第二組飼喂基礎(chǔ)飼料,作為對(duì)照組。各組分別采集0d、14d、28d和42d的黃河鯉腸道內(nèi)容物,提取總DNA,進(jìn)行變性梯度凝膠電泳(denaturing gadient gel electrophoresis,DGGE),通過(guò)觀察DGGE圖譜,對(duì)DGGE圖譜進(jìn)行矩陣、系統(tǒng)樹(shù)、條帶識(shí)別分析,對(duì)切割回收得到的21條差異條帶進(jìn)行測(cè)序差異分析,所得序列分別屬于變形菌門(mén)(Proteobacteria)、放線菌門(mén)(Actinobacteria)、厚壁菌門(mén)(Firmicutes)、梭桿菌門(mén)(Fusobacteria)和擬桿菌門(mén)(Bacteroidetes),其中變形菌門(mén)所占比例最高,各組中共性條帶測(cè)序結(jié)果為變形菌門(mén),說(shuō)明變形菌門(mén)為黃河鯉腸道中優(yōu)勢(shì)菌群;其次,為了確定在飼料中添加益生菌后黃河鯉對(duì)嗜水氣單胞菌感染的抵抗力,在42d后對(duì)試驗(yàn)組和對(duì)照組進(jìn)行攻毒,攻毒96h采集腸道內(nèi)容物,進(jìn)行PCR-DGGE。攻毒試驗(yàn)組與攻毒對(duì)照組相比,試驗(yàn)組中放線菌門(mén)明顯減少,變形菌門(mén)占主要優(yōu)勢(shì),說(shuō)明在飼料中添加益生菌可以顯著改善腸道菌群結(jié)構(gòu)、促進(jìn)腸道中優(yōu)勢(shì)菌群數(shù)量的增加,進(jìn)而提高黃河鯉對(duì)嗜水氣單胞菌的抵抗力。同時(shí),我們對(duì)采集樣本進(jìn)行高通量測(cè)序分析,共得到159 535條高質(zhì)量序列,在門(mén)水平上被歸類(lèi)為17個(gè)門(mén),其中含量最多的為4個(gè)菌門(mén),主要為變形菌門(mén)(Proteobacteria,93.57%)、放線菌門(mén)(Actinobacteria,2.99%)、厚壁菌門(mén)(Firmicutes,1.32%)和梭桿菌門(mén)(Fusobacteria,0.15%)總共占到測(cè)序總序列的98.03%。在屬水平上,試驗(yàn)組與對(duì)照組相比隨著飼養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),腸道中希瓦氏菌屬(Shewanella)、氣單胞菌屬(Aeromonas)和明串珠菌屬(Leuconostoc)有益菌顯著增多,攻毒試驗(yàn)組與攻毒對(duì)照組相比希瓦氏菌屬增多明顯。說(shuō)明枯草芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌可以促進(jìn)腸道有益菌數(shù)量增加,進(jìn)而增強(qiáng)免疫力。本研究采用PCR-DGGE技術(shù)結(jié)合宏基因組學(xué)測(cè)序技術(shù)分析益生菌對(duì)黃河鯉腸道微生物的影響,明確黃河鯉腸道微生物多樣性,確定黃河鯉腸道的固有優(yōu)勢(shì)菌群,闡明基于枯草芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌調(diào)節(jié)的黃河鯉腸道微生物區(qū)系響應(yīng)規(guī)律,為魚(yú)用微生態(tài)制劑研發(fā)提供必要理論依據(jù)與實(shí)踐基礎(chǔ),進(jìn)而為淡水魚(yú)細(xì)菌性疾病的有效防控提供新的思路。
【學(xué)位單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類(lèi)】：S965.116
【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 魚(yú)類(lèi)腸道微生物概述
        1.1 腸道微生物菌群的組成
        1.2 腸道菌群功能
        1.3 影響腸道微生物多樣性的因素
        1.4 益生菌
    第二章 腸道菌群的研究方法及國(guó)內(nèi)外相關(guān)進(jìn)展
        2.1 PCR-DGGE技術(shù)研究腸道菌群的相關(guān)進(jìn)展
        2.2 宏基因組技術(shù)研究腸道菌群的相關(guān)進(jìn)展
第二篇 研究?jī)?nèi)容
    第一章 基于PCR-DGGE技術(shù)研究益生菌對(duì)黃河鯉腸道微生物多樣性的影響
        1.1 材料
        1.2 方法
        1.3 結(jié)果
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第二章 基于宏基因組學(xué)測(cè)序技術(shù)研究益生菌對(duì)黃河鯉腸道微生物多樣性的影響
        2.1 材料
        2.2 方法
        2.3 結(jié)果
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
作者簡(jiǎn)介
致謝

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本文編號(hào)：2861291