本研究以普安銀鯽為研究對象,旨綜合發(fā)育生物學、組織學、酶學和分子生物學的研究方法探究了普安銀鯽早期發(fā)育過程中抗氧化能力強弱和維生素C對其影響,并研究了Tf基因在普安銀鯽早期發(fā)育過程中的表達特點及維生素C對其表達量的影響。結果表明:1、通過將不同濃度的維生素C添加到普安銀鯽的孵化水體中,研究了維生素C溶液浸泡對普安銀鯽出膜時間、孵化率、成活率及卵黃囊仔魚生長的影響。結果顯示:維生素C溶液濃度低于30 mg/L時,仔魚出膜時間隨著維生素C濃度的增加而降低,孵化率、成活率、體質量和全長則升高。維生素C的濃度高于30 mg/L對普安銀鯽的早期發(fā)育表現(xiàn)出抑制作用。研究表明適宜濃度的維生素C添加到普安銀鯽的孵化水體中能促進其早期發(fā)育。2、采用生化的方法測定了正常發(fā)育組(0mg/L)和30 mg/L維生素C組普安銀鯽早期發(fā)育過程中超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活性。結果顯示:(1)SOD、CAT和GSH-Px在成熟卵中具有活性,分別為(10.213±0.458)U/mg、(8.701±0.371)U/mg和(55.485±4.896)U/mg,屬母源性抗氧化酶;(2)在正常組中,SOD活性逐漸升高,而過氧化氫酶的活性呈“升高-降低-升高”的趨勢,在心跳期降到最低,為(6.175±0.532)U/mg,隨后其活性開始顯著(P0.05)上升;而GSH-Px活性則呈“升高-降低”的變化;(3)30 mg/L的維生素C組中,SOD、CAT和GSH-Px活性總體上高于對照組,心跳期后顯著高于對照組(P0.05)。結果表明:母源性抗氧化酶在普安銀鯽胚胎發(fā)育的早期發(fā)揮著重要作用;適宜濃度的維生素C添加到普安銀鯽的孵化水體中能提高胚胎及仔魚的抗氧化能力。3、采用生化方法測定了正常發(fā)育組(0 mg/L)和30 mg/L維生素C組普安銀鯽早期發(fā)育過程中乳酸脫氫酶(LDH)活性、總抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)和蛋白質羰基(PCA)的含量。結果顯示:(1)普安銀鯽早期發(fā)育過程中MDA、PCA含量及LDH活性均呈“升高-降低”的趨勢,均在原腸中期達到最高,T-AOC則逐漸增加;(2)30 mg/L的維生素C組中MDA、PCA含量及LDH的活性顯著低于對照組(P0.05),T-AOC顯著高于對照組(P0.05)。結果表明,(1)普安銀鯽胚胎期受到的氧化損傷比胚后嚴重;(2)適宜濃度的維生素C能提高胚胎及仔魚的抗氧化能力,有效降低胚胎及仔魚受到的氧化損傷,提高其孵化率及存活率。4、采用RT-PCR與熒光定量PCR技術研究了正常發(fā)育組(0mg/L)和30 mg/L維生素C組普安銀鯽早期發(fā)育中轉鐵蛋白(transferring,Tf)的基因表達。結果表明:在成熟卵,受精卵和囊胚晚期中Tf基因均未表達,發(fā)育至原腸中期開始表達,之后成“升高-降低-升高”的變化趨勢,在心跳期達到最高峰,出膜前期最低;在30mg/L的維生素C處理組中,胚胎期Tf基因的表達量低于正常組,而出膜以后則高于正常組;Tf在胚胎期的功能是獨立于其結合鐵之外的功能,而維生素C的添加降低了Tf在胚胎期參與免疫等方面的功能,增強了其在仔魚中運輸和轉運鐵離子的功能。5、利用形態(tài)學和組織切片的方法,對普安銀鯽循環(huán)系統(tǒng)的發(fā)育進行了光鏡觀察,描述了普安銀鯽循環(huán)系統(tǒng)發(fā)育的組織學結構特征。結果表明:普安銀鯽的心臟起源于原腸晚期的中胚層;受精28h后,心臟開始跳動,此時心臟呈短管狀,位于頭部的前下方,心跳頻率約40-50次/min,紅細胞開始出現(xiàn);出膜3日時,鰓絲開始出現(xiàn),隨著發(fā)育的進行,血液在從軀干到尾部血管中的循環(huán)逐漸增強,通過組織切片可看出背部大動脈開始形成;出膜17日時,仔魚體分支血管較為明顯,鰓的結構發(fā)育趨于完善,循環(huán)系統(tǒng)開始趨于完善。
【學位單位】：貴州大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：S917.4
【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    第一節(jié) 水產(chǎn)動物的抗氧化作用
        1 抗氧化作用
            1.1 自由基的概念
            1.2 氧自由基的危害
            1.3 自由基的清除
        2 水產(chǎn)動物的抗氧化能力研究
            2.1 環(huán)境因子對水產(chǎn)動物抗氧化的影響
            2.2 營養(yǎng)物質對水產(chǎn)動物抗氧化的影響
        3 魚類早期發(fā)育中抗氧化能力的研究
    第二節(jié) 維生素C對水產(chǎn)動物繁殖及抗氧化的影響
        1 維生素C對水產(chǎn)動物繁殖的影響
        2 維生素C對水產(chǎn)動物抗氧化能力的影響
        3 維生素C對魚類早期發(fā)育抗氧化能力的影響
    第三節(jié) 轉鐵蛋白在魚類中的研究
        1 轉鐵蛋白的分類及功能
        2 轉鐵蛋白在魚類中的研究
    第四節(jié) 魚類循環(huán)系統(tǒng)的發(fā)生發(fā)育
    第五節(jié) 本研究的目的與意義
第二章 維生素C對普安銀鯽早期發(fā)育的影響
    1 材料與方法
    2 結果
        2.1 對出膜時間、孵化率和仔魚成活率的影響
        2.2 對仔魚體質量的影響
        2.3 對仔魚全長的影響
    3 討論
第三章 普安銀鯽早期發(fā)育中抗氧化能力的變化及維生素C的影響
    第一節(jié) 普安銀鯽早期發(fā)育中抗氧化酶活性的變化及維生素C的影響
        1 材料與方法
        2 結果
            2.1 普安銀鯽早期發(fā)育過程中超氧化物歧化酶（SOD）活性的變化
            2.2 普安銀鯽早期發(fā)育過程中過氧化氫酶（CAT）活性的變化
            2.3 普安銀鯽早期發(fā)育過程中谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性的變化
        3 討論
            3.1 普安銀鯽早期發(fā)育中抗氧化酶的來源及活性變化特點
            3.2 維生素C對普安銀鯽胚胎發(fā)育中抗氧化酶活性的影響
    第二節(jié) 普安銀鯽早期發(fā)育中氧化損傷和總抗氧化能力的變化及維生素C的影響
        1 材料與方法
        2 結果
            2.1 普安銀鯽早期發(fā)育過程中丙二醛（MDA）的含量變化
            2.2 普安銀鯽早期發(fā)育過程中蛋白質羰基（PCA）的含量變化
            2.3 普安銀鯽早期發(fā)育過程中乳酸脫氫酶（LDH）活性變化
            2.4 普安銀鯽早期發(fā)育過程中總抗氧化能力（T-AOC）的變化
        3 討論
            3.1 普安銀鯽早期發(fā)育中氧化損傷及總抗氧化能力的變化特點
            3.2 維生素C對普安銀鯽早期發(fā)育中氧化損傷的保護作用
            3.3 普安銀鯽早期發(fā)育的危險期及應對措施
第四章 普安銀鯽早期發(fā)育中轉鐵蛋白基因的表達及維生素C的影響
    1 材料和方法
    2 結果
        2.1 總RNA提取
        2.2 普安銀鯽早期發(fā)育中Tf基因表達
        2.3 實時熒光定量PCR產(chǎn)物特異性及擴增效率分析
        2.4 普安銀鯽早期發(fā)育中Tf基因的相對表達量
    3 討論
        3.1 普安銀鯽早期發(fā)育中Tf基因的起始表達及表達特點
        3.2 維生素C對普安銀鯽早期發(fā)育中Tf基因表達量的影響
第五章 普安銀鯽循環(huán)系統(tǒng)的發(fā)育研究
    1 材料及方法
    2 結果
        2.1 普安銀鯽循環(huán)系統(tǒng)形態(tài)結構
        2.2 循環(huán)系統(tǒng)的發(fā)育
    3 討論
        3.1 普安銀鯽循環(huán)系統(tǒng)的發(fā)育特點
        3.2 普安銀鯽循環(huán)系統(tǒng)的發(fā)育與轉鐵蛋白基因表達的關系
致謝
參考文獻
附錄
    研究生期間發(fā)表的論文
    研究生期間參加的科研項目
    研究生期間獲得的獎勵
圖版

【參考文獻】

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本文編號：2851107