在本研究中,我們通過(guò)雙向電泳技術(shù)(2-DE)結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)(MALDI-TOF MS/MS)對(duì)牙鲆感染遲緩愛(ài)德華氏菌(Edwardsiella tarda)12h后脾臟中蛋白質(zhì)的差異表達(dá)情況進(jìn)行了分析,最終鑒定得到了20種表達(dá)差異的蛋白,并對(duì)細(xì)菌感染后上調(diào)表達(dá)的鐵蛋白(Ferritin)進(jìn)行了深入的研究。鐵蛋白是一種進(jìn)化非常保守的蛋白,在維持機(jī)體內(nèi)鐵離子的穩(wěn)態(tài)中起著至關(guān)重要的作用。本實(shí)驗(yàn)克隆鑒定了牙鲆的一個(gè)M型鐵蛋白(PoFerM),并對(duì)其基因結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能進(jìn)行了分析。PoFerM由176個(gè)氨基酸殘基組成,包含了兩個(gè)保守的結(jié)構(gòu)域:鐵氧化酶位點(diǎn)(ferroxidase site)和鐵水合位點(diǎn)(ferrihydrite nucleation site)。PoFerM的5’-UTR含有一個(gè)保守的莖環(huán)結(jié)構(gòu),即鐵反應(yīng)元件(iron response element,IRE),是鐵蛋白表達(dá)的主要調(diào)控因子。正常生理?xiàng)l件下,PoFerM在牙鲆多個(gè)組織內(nèi)都有表達(dá),其中在血液中表達(dá)量最高。感染細(xì)菌后,PoFerM在頭腎、脾和肝中的表達(dá)都顯著上調(diào)。重組PoFerM蛋白(rPoFerM)表現(xiàn)出絡(luò)合鐵的能力和明顯的抑菌能力。對(duì)PoFerM的鐵氧化酶位點(diǎn)和鐵水合位點(diǎn)的兩個(gè)關(guān)鍵氨基酸進(jìn)行突變,得到重組的突變蛋白rPoFerMM。rPoFerMM沒(méi)有明顯的鐵絡(luò)合能力和抑菌能力。研究還發(fā)現(xiàn)rPoFerM可以減少芬頓反應(yīng)產(chǎn)生的羥基自由基對(duì)質(zhì)粒DNA和牙鲆PBL細(xì)胞的氧化損傷,而rPoFerMM則沒(méi)有這種能力。此外,相比表達(dá)rPoFerMM的大腸桿菌和正常的大腸桿菌,表達(dá)rPoFerM的大腸桿菌表現(xiàn)出更強(qiáng)的過(guò)氧化氫能力。這些結(jié)果表明PoFerM是一種鐵離子螯合劑,并且具有抑菌和抗氧化能力,而這些能力依賴于保守的鐵氧化酶位點(diǎn)和鐵水合位點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：中國(guó)科學(xué)院研究生院(海洋研究所)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類(lèi)】：S917.4
【部分圖文】：

愛(ài)德華氏菌、海豚鏈球菌、哈氏弧菌、淋巴囊腫病毒、虹彩病毒是牙鲆的主要原，且致死率非常高 [1-5]。如圖 1-1 所示，即為牙鲆感染遲緩愛(ài)德華氏菌后現(xiàn)出的一些外部體征。

第一章 前言 存在于細(xì)胞內(nèi)，但也有少部分存在于血鐵蛋白，只不過(guò)對(duì)其功能研究較少。動(dòng)植能異常就可能導(dǎo)致機(jī)體死亡[51-55]。類(lèi)型 所示，去鐵鐵蛋白（apoferritin）復(fù)合體球形，里面最多可以容納 4500 三價(jià)鐵

鐵蛋白亞基的二級(jí)結(jié)構(gòu)示意圖A、B、C、D為長(zhǎng)α螺旋，E為短α螺旋
【相似文獻(xiàn)】

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1 王晶晶;牙鲆（Paralichthvs olivaceus）FerritinM的克隆、表達(dá)及功能的研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院(海洋研究所);2015年

本文編號(hào)：2847636