固著類纖毛蟲是淡、海水中常見的原生動物,可附著于十足目甲殼動物的外骨骼和鰓絲。其附著行為能直接或間接地危害宿主的生命活動。為了給淡水甲殼動物固著類纖毛蟲病的檢測和防控提供基礎性資料,本研究以克氏原螯蝦體表固著類纖毛蟲為對象,通過活體觀察、蛋白銀染色和分子序列比對的方法對克氏原螯蝦體表的固著類纖毛蟲進行了物種鑒定,并在湖北省孝感市云夢縣和武漢市蔡甸區(qū)展開了為期一年的周期性調(diào)查,闡明了克氏原螯蝦顎足、步足和鰓絲上固著類纖毛蟲的周期性變化規(guī)律。以下為本文的主要研究結(jié)果:1、本研究于2016年至2019年,利用形態(tài)學和分子學方法,分離并鑒定了湖北省潛江市、武漢市和孝感市養(yǎng)殖克氏原螯蝦體表的7種固著類纖毛蟲物種,其中未報道的新種包括:卵圓累枝蟲(Epistylis ovalis sp.n.)、蔡甸累枝蟲(E.caidianensis sp.n.)、高盤累枝蟲(E.thckpatella sp.n.)、椎體累枝蟲(E.conica sp.n.)和瞄新蓋蟲(Opercularia miaoxinensis sp.n.),重描述物種包括節(jié)蓋蟲(O.articulata Ehrenberg,1838)和螅狀獨縮蟲(Carchesium polypinum Ehrenberg,1831)。卵圓累枝蟲附著于克氏原螯蝦的步足和顎足,其蟲體呈卵圓型,單個伸縮泡位于口圍唇下方,C型大核橫向排列,主柄呈傘狀,次級柄呈二分叉型,與E.chlorelligerum的SSU rDNA序列相似度最高(98.4%)。蔡甸累枝蟲附著于克氏原螯蝦的顎足、步足和游泳足,其蟲體呈花瓶型,伸縮泡位于口圍唇上方,C型大核橫向位于口圍唇下方,柄呈二分叉型,與E.wuhanensis的SSU rDNA序列相似度最高(97.5%)。高盤累枝蟲附著于克氏原螯蝦的顎足、步足和鰓絲,其蟲體呈花瓶型,口圍盤呈半圓型,單個伸縮泡位于口圍唇下方,與E.chlorelligerum的SSU rDNA序列相似度最高(99.0%)。椎體累枝蟲附著于克氏原螯蝦的顎足和步足,蟲體呈椎體型,伸縮泡位于口圍唇上方,C型大核橫向位于口圍唇下方,與E.riograndensis的SSU rDNA序列相似度最高(99.0%)。瞄新蓋蟲附著于克氏原螯蝦步足,蟲體呈紡錘型,伸縮泡位于口漏斗腹側(cè),C型大核位于伸縮泡下方,與Telotrochidium matiense的SSU rDNA序列相似度最高(98.0%)。本文中描述的節(jié)蓋蟲和螅狀獨縮蟲分別與之前報道的物種形態(tài)特征一致,本文補充了節(jié)蓋蟲的SSU rDNA、LSU rDNA和ITS1-5.8S-ITS2序列。2、本研究于2018年4月至2019年4月期間對湖北省孝感市云夢縣的289只養(yǎng)殖克氏原螯蝦進行檢測,其中顎足、步足和鰓絲上附著固著類纖毛蟲的克氏原螯蝦分別有151只、65只和6只。該地區(qū)克氏原螯蝦顎足上固著類纖毛蟲的周期性變化規(guī)律如下:2018年4月至10月,固著類纖毛蟲附著量呈持續(xù)下降的趨勢,附著率變化波動較大;2018年10月至2019年1月,附著率(40%)和附著量(20個)均處于較低水平;2019年2月至4月,附著率(60%)和附著量(60個)均升高。步足上固著類纖毛蟲的周期性變化如下:2018年4月至9月附著率和附著量的變化波動較大;在2018年10月至2019年1月附著率(35%)和附著量(20個)均處于較低水平。鰓絲上固著類纖毛蟲的附著規(guī)律如下:2018年12月至2019年4月期間,水溫在19℃以下時,鰓絲上出現(xiàn)固著類纖毛蟲附著的現(xiàn)象。該地區(qū)克氏原螯蝦顎足和步足上的附著頻次最高的固著類纖毛蟲為累枝蟲屬物種,鰓絲上為獨縮蟲屬物種。3、本研究于2018年4月至2019年3月期間對湖北省武漢市蔡甸區(qū)的192只克氏原螯蝦進行檢測,顎足、步足和鰓絲上附著固著類纖毛蟲的克氏原螯蝦分別有112只、68只和16只。該地區(qū)克氏原螯蝦顎足上固著類纖毛蟲在采樣期間的周期性變化如下:2018年4月至10月期間,除9月外,其它時期固著類纖毛蟲的附著率均在60%–95%范圍內(nèi)波動,附著量在此時間段內(nèi)變化波動較大;2018年11月至2019年2月,固著類纖毛蟲的附著率(20%)和附著量(10個)均處于較低水平。步足固著類纖毛蟲的周期性變化如下:2018年4月至11月,附著率和附著量的變化趨勢一致,且波動較大;2018年12月至2019年2月,附著率(20%)和附著量(10個)均處于較低水平。鰓絲上固著類纖毛蟲的變化如下:2018年6月至9月,水溫處于29℃以上時,鰓絲上未發(fā)現(xiàn)固著類纖毛蟲附著。該地區(qū)克氏原螯蝦顎足和步足上出現(xiàn)頻次最高的固著類纖毛蟲為累枝蟲屬物種,鰓絲上出現(xiàn)頻次最高的固著類纖毛蟲為獨縮蟲屬物種。
【學位單位】：華中農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：S941.5
【部分圖文】：

高盤累枝蟲（圖 2-1c,d）,椎體累枝蟲（圖 2-1e）。蓋蟲屬物種包括：瞄新蓋蟲（圖 2-1f）和節(jié)蓋蟲（圖2-1 g）。獨縮蟲屬物種包括螅狀獨縮蟲（圖 2-1 h）。圖 2-1 固著類纖毛蟲的手繪圖a. 卵圓累枝蟲. b. 蔡甸累枝蟲. c. 高盤累枝蟲種群 I. d. 高盤累枝蟲種群 II. e. 椎體累枝蟲. f. 瞄新蓋蟲. g. 節(jié)蓋蟲. h. 螅狀獨縮蟲. 比例尺: a, e-h = 10 μm; b-d = 20μmFig. 2-1 Drawing from in vivo sessilid species.a. Epistylis ovalis sp. n. b. Epistylis caidianensis sp. n. c. Population I of Epistylis thickpatella n. sp. d. Population IIEpistylis thickpatella n. sp. e. Epistylis conica sp. n. f. Opercularia miaoxinensis sp. n. g. Opercularia articulata. h.Carchesium polypinum. Scale bars: a, e-h = 10 μm; b-d = 20μm2.1 累枝蟲屬累枝蟲屬物種的形態(tài)特征為：營群體生活，柄內(nèi)無肌絲，具有膨大的口圍唇，口區(qū)纖毛在口圍盤環(huán)繞的圈數(shù)低于 2 圈（Lynn 2008）。本研究從克氏原螯蝦體表分離并鑒定了 4 種累枝蟲屬的物種。

2 卵圓累枝蟲活體照片縮泡；In, 口漏斗；Ma, 大核；PD, 口圍盤；PL, 口圍唇；St, 柄.：a = 400 μm; b, d-h = 10 μm; c = 50 μm; i = 20 μm-2 Photomicrographs of Epistylis ovalis sp. n in vivontractile vacuole; In, infundibulum, Ma: macronucleus; PD, peristomial disk; PL, peristomial lip; St, Stalbars: a = 400 μm; b, d-h = 10 μm; c = 50 μm; i = 20 μm蛋白銀染色結(jié)果：經(jīng)過蛋白銀染色，可見反口纖毛環(huán)（ATB）圍繞蟲體后四（圖 2-3a）。在蟲體口區(qū)開口處，單毛基列和復毛基列同時出現(xiàn)且彼此平行 1.75 圈后，向相反方向螺旋向下延伸至口漏斗底部（圖 2-3b）�？趨^(qū)小膜（在單毛基列和復毛基列開口處（圖 2-3b）。生發(fā)毛基列（G）呈波浪型，位列上方（圖 2-3b,c）。復毛基列在與單毛基列分開后形成咽膜 1-3（P1-3）分別由 3 條毛基列組成；P1 的 3 條毛基列發(fā)生于同一點，且末端等長（；P2 靠里的 2 條毛基列與 P1 發(fā)生于同一點，靠外毛基列的發(fā)生處稍微偏

圖 2-3 卵圓累枝蟲蛋白銀染色照片ATB, 反口纖毛環(huán); EM, 口區(qū)小膜; G, 生發(fā)毛基列; H, 單毛基列; Ma, 大核; P1–3, 咽膜 1–3; P, 復毛基列.比例尺= 10 μmFig. Photomicrographs of Epistylis ovalis sp. n. after protargal-stainedATB, aboral trochal band EM, epistomial membrane; G, germinal kinety; H, haplokinety; Ma, macronucleus; P1–3,peniculi 1–3; P, polykinety. Scale bars= 10 μm分子序列分析：獲得卵圓累枝蟲 SSU rDNA 序列長度為 1669bp，GC 含量為42.18%，BLAST 結(jié)果顯示與該序列最相似的物種是綠累枝蟲（Epistylischlorelligerum登錄號 KM096375），相似度為 98.4%，相差 26 個堿基。獲得卵圓累枝蟲 LSUrDNA序列長度為1842bp，GC含量為43.3%，BLAST結(jié)果顯示金龜累枝蟲（E.chrysemydis，登錄號 KY675197）與該物種的相似度最高，為 98.7%，相差 22 個堿基。獲得孝感累枝蟲 ITS1-5.8S-ITS2 序列長度為 464bp，GC 含量為 32.8%，BLAST 結(jié)果顯示金龜
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本文編號：2845922