嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)在自然界的水體中普遍存在,是水產(chǎn)養(yǎng)殖中非常重要的魚(yú)類(lèi)病原體。由于抗生素的大量使用及濫用,耐藥菌株不斷增加,藥物殘留問(wèn)題越來(lái)越嚴(yán)重,防治該菌感染已成為當(dāng)今水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的一大難題。噬菌體(bacteriophage,phage)是一種細(xì)菌病毒,具有特異性強(qiáng)、裂解效率高、無(wú)殘留等特點(diǎn)。因此研究嗜水氣單胞菌噬菌體來(lái)防控該類(lèi)疾病具有重要意義。本試驗(yàn)從南京不同地區(qū)采集池塘水樣5份,污染河流水樣2份,普通河流水樣3份,利用雙層平板法分離嗜水氣單胞菌噬菌體,得到25株噬菌體分離株。分離純化后進(jìn)行宿主譜的測(cè)定,參與檢測(cè)的有273株氣單胞菌。試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),25株噬菌體綜合起來(lái)能夠裂解20株嗜水氣單胞菌,2株維氏氣單胞菌,1株動(dòng)物氣單胞菌,而且不同噬菌體分離株裂解嗜水氣單胞菌的宿主范圍有一定的重疊性,說(shuō)明當(dāng)前流行的嗜水氣單胞菌有其主要的噬菌體型。為進(jìn)一步了解嗜水氣單胞菌噬菌體的生物學(xué)特性,本試驗(yàn)選擇了性質(zhì)穩(wěn)定、宿主范圍相對(duì)較廣的5株噬菌體進(jìn)行生物學(xué)特性分析。研究結(jié)果顯示,N21、W3和G65屬于肌尾噬菌體科,而Y71和Y81屬于短尾噬菌體科;噬菌斑除G65外均清楚無(wú)暈環(huán),大小無(wú)明顯差異;5株噬菌體一步生長(zhǎng)曲線(xiàn)表明,潛伏期均約為10 min,生長(zhǎng)期分別為 70 min、135 min、90 min、105 min 和 105 min,平均裂解量分別為 316 PFU/cell、160PFU/cell、260PFU/cell、200PFU/cell、220PFU/cell。5 株噬菌體均對(duì)高溫敏感,對(duì)pH適應(yīng)性較廣,突變頻率在10-6～10-7之間。5株噬菌體的動(dòng)物試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),感染30 min治療6 h,噬菌體治療組小鼠的細(xì)菌載量均低于感染組,表明5株噬菌體對(duì)感染小鼠有治療作用,其中N21和Y81作用更為顯著。綜上所述,我們分離了 25株嗜水氣單胞菌噬菌體,篩選出宿主譜相對(duì)較寬、潛伏期短、裂解率高、理化性質(zhì)穩(wěn)定、突變頻率低的噬菌體,并通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)來(lái)評(píng)估噬菌體療法的安全性和有效性,為噬菌體在臨床中的使用奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類(lèi)】：S942.3
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 噬菌體及其應(yīng)用的研究進(jìn)展
        1 噬菌體的形態(tài)結(jié)構(gòu)及分類(lèi)
            1.1 雙股DNA噬菌體
            1.2 單股DNA噬菌體
            1.3 雙股RNA噬菌體
            1.4 單股RNA噬菌體
        2 噬菌體生命周期
            2.1 烈性噬菌體的生命周期
            2.2 溶原性噬菌體生命周期
        3 噬菌體和細(xì)菌之間的相互作用
            3.1 細(xì)菌抵抗噬菌體的感染
            3.2 噬菌體對(duì)細(xì)菌的防御
        4 噬菌體在細(xì)菌性疾病治療上的現(xiàn)狀
            4.1 噬菌體在細(xì)菌性疾病治療上的應(yīng)用
            4.2 噬菌體在細(xì)菌性疾病治療上的優(yōu)勢(shì)
            4.3 噬菌體在細(xì)菌性疾病治療上面臨的問(wèn)題
        5 嗜水汽單胞菌噬菌體研究現(xiàn)狀
        參考文獻(xiàn)
第二篇 試驗(yàn)研究
    第二章 嗜水氣單胞菌噬菌體分離純化和宿主譜的測(cè)定
        1 材料與方法
            1.1 菌株
            1.2 主要試劑和儀器
            1.3 樣品的采集
            1.4 噬菌體的分離和純化
            1.5 噬菌體的保存
            1.6 宿主范圍的測(cè)定
        2 結(jié)果
            2.1 噬菌體的分離和純化
            2.2 宿主范圍
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第三章 五株嗜水氣單胞菌噬菌體生物學(xué)特性及動(dòng)物試驗(yàn)
        1 材料與方法
            1.1 菌株
            1.2 主要試劑和儀器
            1.3 噬菌體形態(tài)的電鏡觀察
            1.4 最適感染復(fù)數(shù)(MOI)
            1.5 一步生長(zhǎng)曲線(xiàn)
            1.6 熱穩(wěn)定性
            1.7 pH穩(wěn)定性
            1.8 嗜水氣單胞菌耐噬菌體的突變頻率的測(cè)定
            1.9 小鼠模型治療試驗(yàn)
        2 結(jié)果
            2.1 噬菌體的形態(tài)
            2.2 最適感染復(fù)數(shù)
            2.3 一步生長(zhǎng)曲線(xiàn)
            2.4 熱穩(wěn)定性
            2.5 pH穩(wěn)定性
            2.6 嗜水氣單胞菌耐噬菌體的突變頻率的測(cè)定
            2.7 動(dòng)物試驗(yàn)
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
致謝

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