集約化養(yǎng)殖模式下,養(yǎng)殖魚類經(jīng)常出現(xiàn)肝脂代謝紊亂等問題。鯉是我國(guó)北方地區(qū)的主養(yǎng)經(jīng)濟(jì)魚類。近年來,由于養(yǎng)殖水體惡化、養(yǎng)殖密度過大等原因,鯉魚養(yǎng)殖中出現(xiàn)了脂肪過度蓄積等代謝紊亂現(xiàn)象。在眾多環(huán)境因子中,銅作為礦物營(yíng)養(yǎng)素、除藻劑或病原菌抑制藥物常被過量應(yīng)用于飼料或水環(huán)境中,當(dāng)其以自由金屬離子形式進(jìn)入到環(huán)境中并達(dá)到一定濃度時(shí),就會(huì)對(duì)魚類等水產(chǎn)動(dòng)物產(chǎn)生毒害作用。本研究采用高通量測(cè)序技術(shù),探究水體銅暴露條件下鯉腸道微生物群落組成及多樣性變化,借助熒光定量技術(shù)檢測(cè)鯉肝胰臟脂代謝相關(guān)基因及腸道緊密結(jié)合蛋白基因表達(dá)量的變化,闡述“銅—腸道微生物—脂代謝”三者之間的互作關(guān)系,推測(cè)腸道微生物介導(dǎo)的銅致機(jī)體脂代謝異常的機(jī)制。研究結(jié)果可為深入揭示魚類肝脂代謝紊亂機(jī)制提供新的視角,為維持魚類腸道健康、提升水產(chǎn)動(dòng)物健康養(yǎng)殖水平提供理論依據(jù)。1.水體銅暴露對(duì)鯉生長(zhǎng)性能的影響及在鯉組織中的蓄積根據(jù)鯉Cu~(2+)半致死濃度(LC50=1.42 mg/L),本研究共設(shè)計(jì)1個(gè)對(duì)照組和3個(gè)處理組(濃度分別為0.00 mg/L、0.07 mg/L、0.14 mg/L、0.28 mg/L)。飼喂鯉56 d后,檢測(cè)鯉的生長(zhǎng)指標(biāo),結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,處理組的增重率(Weight gain rate,WGR,%)與特定生長(zhǎng)率(Specific growth rate,SGR,%/day)均無顯著差異(P0.05)。但處理組之間差異顯著,即高濃度組的增重率和特定生長(zhǎng)率顯著低于低濃度組(P0.05)。利用原子吸收光譜法檢測(cè)銅在鯉肝胰臟和腸道中的累積情況,可以看出,隨著處理濃度的增大,銅在鯉肝胰臟和腸道內(nèi)的累積倍增。用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中總蛋白(Total protein,TP)、高密度脂蛋白(High-density lipoprotein,HDL)、低密度脂蛋白(Low-density lipoprotein,LDL)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、免疫球蛋白A(Immunoglobulin A,IgA)和免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)的含量和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)、堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)等的活性,結(jié)果顯示,在處理組之間,ALT、LDL、TG、IgG等指標(biāo)出現(xiàn)顯著異常(P0.05)。2.熒光定量檢測(cè)鯉肝胰臟和腸道脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)量采用實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)檢測(cè)了5種脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)量,結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,高濃度組脂肪合成相關(guān)基因FAS、SREBP-1、ACC-1的表達(dá)量呈現(xiàn)顯著下調(diào)趨勢(shì)(P0.05),而脂肪分解相關(guān)基因LPL、CPT-1的表達(dá)量則呈現(xiàn)顯著上調(diào)趨勢(shì)(P0.05)。說明處理組脂肪合成減少,脂肪分解增多。同時(shí),檢測(cè)腸道3種腸粘膜緊密結(jié)合蛋白基因Zo-1、Occludin和Claudin-3的表達(dá)量,結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,銅處理組Zo-1基因的表達(dá)量變化不顯著(P0.05),Occludin和Claudin-3基因的表達(dá)量出現(xiàn)顯著下調(diào)的趨勢(shì)(P0.05)。這預(yù)示著腸壁通透性增大,利于腸道內(nèi)代謝產(chǎn)物進(jìn)入血液。機(jī)體內(nèi)存在腸-肝軸,正常情況下,腸粘膜可允許少量?jī)?nèi)毒素(LPS)進(jìn)入門靜脈,維持肝臟網(wǎng)狀內(nèi)系統(tǒng)處于激活狀態(tài)。如果腸粘膜屏障功能喪失,腸壁通透性就會(huì)增高,引起大量細(xì)菌和LPS易位,可能會(huì)造成肝臟的免疫功能受損,形成慢性肝損傷。3、高通量測(cè)序檢測(cè)腸道微生物群落組成及多樣性的變化采用Illumina HiSeqTM 2500測(cè)序平臺(tái)對(duì)樣品測(cè)序完成后,共得到原始序列838,774條。篩選過濾后,12個(gè)樣品共得到高質(zhì)量序列721,786條。分析得到29,951個(gè)OTU,每個(gè)OTU代表一個(gè)種系型,此結(jié)果說明樣品的總體物種多樣性水平較高。ACE值、Chaol值、Shannon指數(shù)、Simpson指數(shù)結(jié)果顯示,水體銅暴露后,鯉腸道微生物多樣性和物種豐富度無顯著差異(P0.05)。在門一級(jí)水平上,所有序列共被注釋到了58個(gè)門,主要包括是:變形菌門(Proteobacteria,51.73%),梭桿菌門(Fusobacteria,10.97%),擬桿菌門(Bacteroidetes,5.24%),厚壁菌門(Firmicutes,4.76%),藍(lán)藻菌門(Cyanobacteria,4.24%),放線菌門(Actinobacteria,3.02%),疣微菌門(Verrucomicrobia,2.25%),酸桿菌門(Acidobacteria,2.69%),TM6(2.16%),芽單孢菌門(Gemmatimonadete,1.11%),還有一些其它的微生物類群(8.47%)。根據(jù)其在各樣品所占比例變化可以看出,在門水平上,與脂代謝相關(guān)的微生物出現(xiàn)顯著變化,即與對(duì)照組相比,低濃度組梭桿菌門(Fusobacteria)的比例顯著升高(P0.05);高濃度組厚壁菌門(Firmicutes)和擬桿菌門(Bacteroidetes)的比例顯著降低(P0.05)。
【學(xué)位單位】：河南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：S917.4
【部分圖文】：

圖 3-1 實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)鯉肝胰臟脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)量圖中數(shù)據(jù)以 mean ± SE 表示（n=3），不同字母表示差異顯著（P<0.05）。Fig. 3-1 qRT-PCR analysis of gene expression of lipid metabolism-related genes in liverError bars indicate the mean and standard error (n=3). Different letters indicate statistical difference(P<0.05).

圖 3-2 實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)鯉腸道緊密結(jié)合蛋白基因的表達(dá)量圖中數(shù)據(jù)以 mean ± SE 表示（n=3），不同字母表示差異顯著（P<0.05）。Fig. 3-2 qRT-PCR analysis of gene expression of tight binding protein genes in intestineError bars indicate the mean and standard error (n=3). Different letters indicate statistical difference(P<0.05).

圖 4-1 Illumina HiseqTM2500 測(cè)序流程圖Fig. 4-1 Flow chart of Illumina HiseqTM2500 sequencing（1）DNA 樣品的檢測(cè)對(duì) DNA樣品的檢測(cè)主要包括以下 3種方法：

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王來娣;鄭云;蔣拾貝;王星果;張軍;龔道清;;miRNA在脂代謝中的研究進(jìn)展[J];動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);2013年07期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 鄭衍平;陳超;許旭昀;;參七散對(duì)2型糖尿病并脂代謝紊亂干預(yù)的影響[A];第十二屆全國(guó)中醫(yī)糖尿病大會(huì)論文匯編[C];2010年

2 岳志剛;;阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征與脂代謝紊亂[A];第五次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

3 宋劍南;陶旭光;劉寨華;;為什么說脂代謝紊亂是人類健康的最大威脅[A];第十二屆全國(guó)脂質(zhì)與脂蛋白學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2014年

4 鄭小紅;;腫瘤與脂代謝的研究進(jìn)展綜述[A];2013年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十三屆中國(guó)藥師周論文集[C];2013年

5 何嵐;郭輝;馮潭溪;洛文田;朱本章;;西安市肥胖青少年糖、脂代謝變化的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

6 王艷莉;翟成凱;陳晗;王曉飛;;高脂飼料喂養(yǎng)大鼠誘導(dǎo)的脂代謝紊亂對(duì)糖代謝及炎癥因子的影響[A];達(dá)能營(yíng)養(yǎng)中心青年科學(xué)工作者論壇優(yōu)秀論文集2008年第2期[C];2008年

7 張秀珍;李穎;錢國(guó)鋒;韓峻峰;;絕經(jīng)后婦女雌激素受體基因多態(tài)性與骨、脂代謝的相關(guān)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第三次全國(guó)骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會(huì)議暨骨質(zhì)疏松診斷技術(shù)繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2004年

8 王萍;;中西醫(yī)結(jié)合辨治糖尿病伴脂代謝紊亂的療效觀察[A];2000年全國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2000年

9 安海霞;王婷婷;段劍飛;李顯筑;;李顯筑教授治療糖尿病合并脂代謝紊亂臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)[A];5TH全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)分泌代謝病學(xué)術(shù)大會(huì)暨糖尿病論壇論文集[C];2012年

10 鄭春喜;王波;田潤(rùn)華;;脂代謝紊亂與基因多態(tài)性研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前5條

1 本報(bào)特約記者 謝杭;致力打造國(guó)際一流的脂代謝研究中心[N];中國(guó)組織人事報(bào);2011年

2 玉梅;絕經(jīng)婦女易發(fā)脂代謝紊亂[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2007年

3 健康時(shí)報(bào)記者　 王純;“肥胖樹”下找慢性病根兒[N];健康時(shí)報(bào);2006年

4 ;馬齒莧不同部位改善2型糖尿病脂代謝紊亂效果不同[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2005年

5 ;女性最關(guān)心的問題[N];中國(guó)婦女報(bào);2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前5條

1 劉雪梅;奧氮平介導(dǎo)大鼠脂代謝紊亂及倍他司汀干預(yù)研究[D];重慶大學(xué);2015年

2 韓曉蕾;Lp-PLA_2對(duì)肝臟細(xì)胞脂代謝的影響[D];吉林大學(xué);2016年

3 郝丹丹;硫化氫對(duì)2型糖尿病脂代謝的作用及其機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

4 岳蘊(yùn)華;脂代謝相關(guān)基因多態(tài)性與缺血性腦卒中的相關(guān)分析及臨床研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2013年

5 江青東;脂多糖誘導(dǎo)肝損傷時(shí)脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)變化[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳雅莉;復(fù)方澤瀉膠囊對(duì)脂代謝紊亂動(dòng)物模型的調(diào)節(jié)作用研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2015年

2 譚前偉;三生調(diào)脂舒治療非酒精性脂肪性肝病患者脂代謝紊亂的臨床研究[D];云南中醫(yī)學(xué)院;2016年

3 馬校芬;T2DM合并脂代謝紊亂與胰島素抵抗及胰島分泌功能的相關(guān)性分析[D];華北理工大學(xué);2016年

4 任茜;妊娠期糖尿病對(duì)新生兒脂代謝及生長(zhǎng)發(fā)育的影響[D];上海交通大學(xué);2015年

5 郭倩倩;水體銅暴露對(duì)鯉腸道微生物群落結(jié)構(gòu)及機(jī)體脂代謝的影響[D];河南師范大學(xué);2016年

6 曹勇;維生素D受體基因FokⅠ位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與脂代謝紊亂相關(guān)性研究[D];西南醫(yī)科大學(xué);2016年

7 劉瑜;基于中醫(yī)結(jié)構(gòu)化住院病歷數(shù)據(jù)的糖尿病合并脂代謝紊亂病證結(jié)合診療規(guī)律探討[D];中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院;2014年

8 程玉蘭;小鼠胰島素抵抗對(duì)脂代謝及其相關(guān)基因表達(dá)的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

9 楊振華;2型糖尿病患者進(jìn)食混合餐后的脂代謝狀態(tài)及與大血管并發(fā)癥關(guān)系的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

10 郝勝;兒童原發(fā)性腎病綜合征脂聯(lián)素與其它脂代謝相關(guān)因素的研究[D];上海交通大學(xué);2008年

本文編號(hào)：2831193