日本沼蝦(Macrobrachium nipponense)俗稱河蝦或青蝦,是一種重要的淡水養(yǎng)殖蝦類。其適應能力強,食性雜,繁殖力強,廣泛分布于我國大小水域,是我國重要的養(yǎng)殖蝦類之一。河蝦肉質鮮美,營養(yǎng)豐富,在我國水產(chǎn)品市場廣受歡迎。但隨著現(xiàn)代工業(yè)化進程的迅速發(fā)展,各地水域水質均受到不同程度破壞,加上養(yǎng)殖業(yè)自身發(fā)展的不健康和不規(guī)范,進一步加劇了養(yǎng)殖水域水環(huán)境的惡化,導致包括河蝦在內(nèi)的咸淡水經(jīng)濟蝦類養(yǎng)殖受多種疾病困擾,而研究河蝦先天免疫防御機制,可以對生產(chǎn)實踐中的疾病防控進行有效指導。模式識別受體和免疫信號途徑作為無脊椎動物先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分,在無脊椎動物對抗病原微生物感染過程發(fā)揮重要作用。本論文首先對日本沼蝦Hippo信號通路中Mats基因進行了研究。Yorkie是Hippo信號通路的轉錄因子,促進Cactus基因(Toll信號通路)的表達。而Yorkie作為轉錄因子,行使功能時,需要與其它蛋白進行互作,Taiman是Yokie的一種互作蛋白,在該論文中,我們對Taiman基因的選擇性剪切以及在免疫防御中的功能進行了初步研究。最后,我們對發(fā)現(xiàn)的一種高變C-型凝集素(在編碼區(qū),通過含有不同數(shù)目的重復單元,增加凝集素多樣性)的功能進行了初步研究。1.MnMats基因在日本沼蝦先天免疫中的功能在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)并命名了MnMats基因,獲得了其cDNA序列,cDNA全長為1127bp,開放閱讀框(ORF)大小為651bp,編碼217個氨基酸長度的蛋白,含有一個Mob1_phocein結構域。我們研究了其在日本沼蝦中的組織分布情況,發(fā)現(xiàn)其在各個組織中均有分布,肝胰腺中表達量最大,而血細胞中最低。我們進一步研究了其在金黃色葡萄球菌/副溶血弧菌刺激時的表達模式,發(fā)現(xiàn)金黃色葡萄球菌刺激時,除血細胞和胃以外,各個組織MnMats均呈上調(diào)趨勢。而當機體面對副溶血弧菌刺激時,除胃以外其他組織中MnMats也均上調(diào)。RNAi敲低MnMats后,發(fā)現(xiàn)多種抗菌肽表達受到了抑制。這些研究結果表明,作為Hippo信號通路中的重要組件,MnMats基因可能通過抑制Cactus基因的表達,促進抗菌肽的表達,從而參與了日本沼蝦先天免疫防御。2.MnTaiman基因在日本沼蝦先天免疫中的功能我們在日本沼蝦中發(fā)現(xiàn)并命名了MnTaiman基因。日本沼蝦Taiman基因存在四種不同的轉錄本。其中最長的轉錄本cDNA全長為6894 bp,開放閱讀框(ORF)全長為4998 bp,編碼長度為1666個氨基酸的蛋白。含有一個PAS結構域、一個HLH結構域和一個PAS_11結構域。半定量進行組織分布研究時,發(fā)現(xiàn)MnTaiman基因C末端存在選擇性剪切,產(chǎn)生四種不同的剪切本,命名為TaiA、TaiB、TaiC、TaiD。qRT-PCR結果表明,MnTai-Total(TaiT)、TaiA、TaiB、及TaiD的組織分布相似,在各個組織中均有分布,并且在肝胰腺中高表達。但TaiC在胃組織中高表達。金黃色葡萄球菌/副溶血弧菌刺激下的表達模式實驗,結果表明,除血細胞之外,在其他組織中TaiT及四種轉錄本呈現(xiàn)不同的表達模式。在血細胞中,病原刺激后基因均呈下調(diào)趨勢。在河蝦血細胞中,RNA干擾敲低MnTaiman,金葡萄球菌刺激后24h,ALF1表達顯著增高。MnTaiman敲低后,副溶血弧菌刺激后24h,ALF1表達也明顯上調(diào)。根據(jù)已有文獻,Taiman和Yorkie互作,而Yorkie調(diào)節(jié)Cactus的表達。所以我們推測,MnTaiman通過調(diào)控Cactus的表達,負調(diào)控Toll信號通路,從而抑制抗菌肽基因的表達。3.一種高變C-型凝集素功能研究我們在日本沼蝦中發(fā)現(xiàn)一種C-型凝集素,由于其編碼區(qū)含有不同數(shù)目的重復單元,因此,我們命名為repeat lectin-MnRlec。該蛋白含有一個信號肽、一個CLECT結構域,在這兩個結構域之間包含一個含有不同數(shù)目重復單元的區(qū)域,該區(qū)域含有的串聯(lián)重復可以高達9個,最少含有一個串聯(lián)重復。在基因組上,我們也發(fā)現(xiàn)了含有不同數(shù)目重復單元的序列,因此我們推測,含有不同數(shù)目重復單元的凝集素,在基因組復制過程中,發(fā)生了滑動錯配,導致基因多樣性的產(chǎn)生。我們表達和純化了三種分別含有1個、2個、3個串聯(lián)重復單元的MnRlec蛋白,命名為MnRlec1、MnRlec2、MnRlec3。對這三種蛋白進行細菌結合實驗,結果發(fā)現(xiàn)MnRlec1對副溶血弧菌的結合呈現(xiàn)出鈣離子依賴的特征,MnRlec2和MnRlec3對副溶血弧菌的結合能力減弱。此外,MnRlec1、MnRlec2以及MnRlec3均表現(xiàn)出對大腸桿菌的結合能力,且這種結合不依賴于鈣離子。通過我們的研究發(fā)現(xiàn),MnRlec隨著重復單元的增加,結合副溶血弧菌的能力減弱,這可能是病原和宿主在進化過程中進行博弈的結果。
【學位單位】：南京師范大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：S917.4
【部分圖文】：

設計特異引物，以日本沼蝦的各個組織 cDNA（血、心、為模板，使用常規(guī) PCR 擴增獲得的四種剪切本的電泳圖。ith gene-specific primers, we gain the four different splicing trTaiA-TaiD) using RT-PCR methods. The cDNA from hemocyts, gills, stomach and intestine of M. nipponense were used as an 的四種剪切體（TaiA、TaiB 、TaiC 和 TaiD）模式圖。五個外顯子的長度。

圖 3.2. 通過設計特異引物，以日本沼蝦的各個組織 cDNA（血、心、肝、鰓、胃和腸）為模板，使用常規(guī) PCR 擴增獲得的四種剪切本的電泳圖。Fig.3.2. With gene-specific primers, we gain the four different splicing transcripts ofMnTaiman (TaiA-TaiD) using RT-PCR methods. The cDNA from hemocytes, heart,hepatopancreas, gills, stomach and intestine of M. nipponense were used as templates.

atgattgatcaggagatatataaataaaatttgactcagttaaattacaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa圖.4.1. （A） 日本沼蝦 MnRlec 的 cDNA 序列和預測的氨基酸序列。圖中灰色陰影部分為 CLEC 結構域，劃線部分為信號肽（Signal peptide），彩色陰影表示 6 個短串聯(lián)重復單元

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 溫周瑞;謝平;;太湖日本沼蝦的生長特性[J];湖北農(nóng)業(yè)科學;2014年18期

2 侯冠軍;石殿軍;程云生;;淮河流域河溝型水體套養(yǎng)日本沼蝦的效果評價[J];中國水產(chǎn);2013年02期

3 范武江;曹翔德;李雪松;蔣亞根;;日本沼蝦土池高效育苗試驗[J];科學養(yǎng)魚;2013年11期

4 孫秀娟;王敏;王雪鵬;丁雷;;日本沼蝦常見疾病及防治技術[J];山東畜牧獸醫(yī);2013年10期

5 張水波;;日本沼蝦的網(wǎng)箱養(yǎng)殖[J];水產(chǎn)養(yǎng)殖;2009年07期

6 江輝;李大高;向國榮;;日本沼蝦的人工養(yǎng)殖(上)[J];湖南農(nóng)業(yè);2009年07期

7 蔣速飛;傅洪拓;熊貽偉;吳滟;龔永生;何新龍;;日本沼蝦4個地理群體遺傳變異的RAPD分析[J];長江大學學報(自科版)農(nóng)學卷;2006年02期

8 蔣速飛;傅洪拓;熊貽偉;吳滟;龔永生;何新龍;;日本沼蝦4個地理群體遺傳變異的RAPD分析[J];長江大學學報(自科版);2006年05期

9 汪財生;尹尚軍;錢國英;朱秋華;;日本沼蝦染色體倍性檢測技術的研究[J];海洋科學;2006年07期

10 吳惠仙,薛俊增,俞宏;日本沼蝦常見疾病與防治[J];淡水漁業(yè);2002年01期

相關會議論文 前10條

1 喬慧;張禹寧;張文宜;熊貽偉;蔣速飛;傅洪拓;;日本沼蝦雌蝦繁殖調(diào)控的比較轉錄組分析[A];2018年中國水產(chǎn)學會學術年會論文摘要集[C];2018年

2 顧夕章;楊明;傅洪拓;孫盛明;喬慧;張文宜;蔣速飛;熊怡偉;金舒博;龔永生;吳滟;;飼料中添加不同水平膽固醇對日本沼蝦生長、飼料利用、體組成及免疫指標的影響[A];2017年中國水產(chǎn)學會學術年會論文摘要集[C];2017年

3 馮建彬;吳春林;姜虎成;李家樂;;江蘇主要湖泊日本沼蝦遺傳多樣性及系統(tǒng)進化分析[A];中國甲殼動物學會第十一屆年會暨學術研討會論文摘要集[C];2011年

4 李彥芹;薛嵐;徐珊珊;彭冬青;管越強;康現(xiàn)江;;一株光合細菌特性及其對日本沼蝦免疫和消化作用的影響[A];中國動物學會甲殼動物學分會、中國海洋與湖沼學會甲殼動物學分會2004年甲殼動物學分會會員代表大會暨學術年會論文摘要集[C];2004年

5 胡宇寧;傅洪拓;喬慧;孫盛明;金舒博;ZHANG Wenyi;;日本沼蝦熒光定量內(nèi)參基因的評估與驗證[A];2018年中國水產(chǎn)學會學術年會論文摘要集[C];2018年

6 李秀;張鳳英;蔣科技;趙衛(wèi)紅;趙明;宋煒;馬凌波;;雙酚A暴露對日本沼蝦5個卵巢發(fā)育相關基因表達的影響[A];2017年中國水產(chǎn)學會學術年會論文摘要集[C];2017年

7 汪桂玲;蘇翔;朱琴;馮建彬;李家樂;;贛江水系日本沼蝦18個群體遺傳多樣性的微衛(wèi)星分析[A];全國生物遺傳多樣性高峰論壇會刊[C];2012年

8 趙艷民;趙云龍;;日本沼蝦胚胎發(fā)育過程中主要生化物質含量的變化[A];中國動物學會甲殼動物學分會、中國海洋與湖沼學會甲殼動物學分會2004年甲殼動物學分會會員代表大會暨學術年會論文摘要集[C];2004年

9 趙衛(wèi)紅;陳立僑;張鳳英;吳萍;;日本沼蝦組蛋白酶L在卵巢發(fā)育過程中的表達[A];中國甲殼動物學會第十一屆年會暨學術研討會論文摘要集[C];2011年

10 謝松;李志華;王軍霞;;饑餓對日本沼蝦生長和部分消化酶的影響[A];中國動物學會甲殼動物學分會、中國海洋與湖沼學會甲殼動物學分會2004年甲殼動物學分會會員代表大會暨學術年會論文摘要集[C];2004年

相關重要報紙文章 前5條

1 建新;日本沼蝦的活體運輸[N];河南科技報;2002年

2 浙江省德清縣水產(chǎn)技術推廣站;日本沼蝦九病防治[N];中國漁業(yè)報;2013年

3 廣東省水產(chǎn)技術推廣總站 姚國成站長;特產(chǎn)淡水蝦類之一——日本沼蝦[N];廣東科技報;2003年

4 本報記者 戚文;海洋經(jīng)濟總產(chǎn)值創(chuàng)新高[N];丹東日報;2008年

5 李軍;養(yǎng)殖特種水平 須防自相殘殺[N];中國特產(chǎn)報;2006年

相關博士學位論文 前9條

1 于杰倫;日本沼蝦免疫應答相關基因的篩選與鑒定[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2019年

2 金舒博;日本沼蝦促雄腺文庫構建及性別相關功能基因研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2016年

3 吳惠仙;生物防治用途芽孢桿菌對水產(chǎn)條件致病菌抑制作用與對中華絨螯蟹、日本沼蝦及中華鱉保護效果的評價[D];浙江大學;2005年

4 趙衛(wèi)紅;日本沼蝦（Macrobrachium nipponense）卵黃蛋白原代謝相關基因的克隆和表達研究[D];華東師范大學;2011年

5 孔有琴;日本沼蝦（Macrobrachium nipponense）幼蝦的銅營養(yǎng)生理研究[D];華東師范大學;2014年

6 江紅霞;日本沼蝦雌性性早熟相關基因的篩選、克隆、表達與功能分析[D];西北農(nóng)林科技大學;2017年

7 張鳳英;日本沼蝦（Macrobrachium nipponense）卵子和胚胎發(fā)育相關基因的克隆與表達研究[D];華東師范大學;2011年

8 吳萍;日本沼蝦卵巢表達序列標簽分析及生殖相關基因的克隆與表達[D];華東師范大學;2009年

9 葛少欽;十足目甲殼動物精子發(fā)生及頂體反應過程中堿性蛋白和乙�；疕4蛋白的變化[D];河北大學;2008年

相關碩士學位論文 前10條

1 邵虎明;日本沼蝦原肌球蛋白的分離鑒定及致敏性分析[D];南昌大學;2019年

2 麻福通;MnMats，MnTaiman及一種高變C-型凝集素在日本沼蝦先天免疫中的功能研究[D];南京師范大學;2019年

3 羅歡;日本沼蝦α2-巨球蛋白和低密度脂蛋白相關受體-1基因的分子克隆及其功能分析[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2019年

4 趙碩;日本沼蝦銜接蛋白Syntenin和ADP核糖基化因子2基因的分子克隆及其表達分析[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2019年

5 孫鶴鶴;日本沼蝦SVWC參與抗菌免疫反應[D];河北大學;2019年

6 黃亞龍;KK-42對日本沼蝦3個幾丁質結合蛋白基因表達的影響[D];河南師范大學;2018年

7 鄭征帆;KK-42對3個日本沼蝦表皮CBPs上調(diào)作用研究[D];河南師范大學;2018年

8 苗澤龍;日本沼蝦CBPs基因的克隆及KK-42對其表達的誘導效應[D];河南師范大學;2018年

9 王志;磷脂對日本沼蝦飼料適宜脂肪水平和能量蛋白比影響的研究[D];蘇州大學;2018年

10 李婷婷;Ficolin-like、Toll和IMD在日本沼蝦先天免疫中的功能研究[D];南京師范大學;2018年

本文編號：2815303