【摘要】：中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)隸屬于節(jié)肢動物門(Crustacea)、十足目(Decapoda)、方蟹科(Grapsidae),俗稱 大閘蟹‖或 河蟹‖,是一種我國淡水系養(yǎng)殖的健康特種經(jīng)濟蟹類,因其肉質(zhì)細膩、鮮美并具有很高的營養(yǎng)和藥用價值,而成為近年來非常流行的健康美食和高檔禮品。近年來隨著市場需求的提高,其人工養(yǎng)殖的比重以及產(chǎn)量日益增加,中華絨螯蟹的年產(chǎn)量也由1993年的1075噸,增加到2014年的75萬噸[1],王武、成永旭等學(xué)者們在中華絨鰲蟹人工養(yǎng)殖、投喂模式以及育種繁殖等方面進行了大量的研究[1],而中華絨螯蟹胃、腸動力相關(guān)的基礎(chǔ)研究還比較匱乏,本研究就中華絨螯蟹腸道動力相關(guān)神經(jīng)元以及腸道動力和食物排空為主要內(nèi)容進行初步探究。本研究首次采用了消化道全層鋪片技術(shù)(whole mount stretch preparation)對中華絨鰲蟹腸壁各層進行了分離鋪片,對分離出的黏膜層(單層柱狀上皮和基膜)、黏膜下層、肌層進行了H.E染色的組織學(xué)形態(tài)比較,應(yīng)用乙酰膽堿酯酶(AchE)、NADPH-黃遞酶以及鋨酸碘化鋅組織化學(xué)染色的方法分別對腸壁AchE、NOS、Cajal間質(zhì)細胞形態(tài)以及分布進行了初步研究,并對中腸和后腸Ach、NO含量以及Na+,K+-ATP酶活性進行了測定。同時研究分析了不同溫度對中華絨螯蟹腸道食物推進速度以及食物排空時間的影響以及不同投喂模式對中華絨螯蟹幼蟹攝食節(jié)律的影響。1.中華絨螯蟹成蟹中、后腸道鋪片的H.E染色的組織學(xué)比較對中華絨螯蟹中腸和后腸分別進行分層鋪片,獲得了肌層、黏膜下層、黏膜層(單層柱狀上皮和基膜)三層鋪片,常規(guī)H.E染色。實驗結(jié)果表明:中腸和后腸肌層均為平滑肌,中腸肌肉層較后腸薄,肌肉肌纖維較細,肌絲間隔明顯,后腸肌肉肌纖維較粗排列緊密,肌絲間隔較小;中腸和后腸黏膜下層均密集分布著大量細胞,細胞多為圓形或卵圓形,大小2-10μm,后腸黏膜下層較中腸厚,細胞分布更為密集;中腸和后腸基膜內(nèi)均未見明顯細胞結(jié)構(gòu),類似膜狀,中腸基膜較后腸薄。2.中華絨鰲蟹中腸和后腸中AchE、NOS、Cajal間質(zhì)細胞的觀察以及Ach、NO含量和Na+,K+-ATP活性的分析應(yīng)用乙酰膽堿酯酶(AchE)和NADPH-黃遞酶和鋨酸碘化鋅組織化學(xué)染色方法分別觀察腸道中AchE和NOS陽性神經(jīng)元和Cajal間質(zhì)細胞的分布和形態(tài),并對中腸和后腸Ach、NO含量以及Na+,K+-ATP酶活性進行測定。研究表明:AchE、NOS和Cajal間質(zhì)細胞均廣泛分布于中腸和后腸的黏膜下層,在肌肉層和基膜層均未見明顯陽性著色。AchE陽性神經(jīng)元胞體清晰,胞核不著色,無明顯胞突,大小3-10μm不等,形態(tài)多樣,中腸陽性神經(jīng)元多為圓形、卵圓形或梭形,后腸陽性神經(jīng)元呈圓形或者橢圓形;NADPH-d陽性反應(yīng)產(chǎn)物為藍色沉淀,胞核不著色,陽性胞體的大小不等,呈不同形態(tài),部分細胞有胞突伸向臨近細胞,ICC間質(zhì)細胞胞體多為卵圓形,形態(tài)相似,大小3-5μm,細胞著色深淺不一,后腸較中腸著色更加明顯;ICC間質(zhì)細胞在呈片狀密集均勻分布,形成大小不一的細胞團,各細胞團之間有細胞銜接。AchE、NOS陽性神經(jīng)元和Cajal間質(zhì)細胞在中腸和后腸黏膜下層的分布有明顯差異,中腸AchE陽性神經(jīng)元呈片狀分布,疏密不一,著色深淺不等呈強陽性或弱陽性,而后腸黏膜下層絕大多數(shù)神經(jīng)元著色較深,分布均勻且密集;后腸中NOS在后腸中分布呈塊狀,分布密集,呈現(xiàn)強陽性,染色較深,而中腸陽性神經(jīng)元多呈條狀或點狀分散分布,整體形成網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu);后腸中ICC間質(zhì)細胞在分布呈塊狀,分布密集,呈現(xiàn)強陽性,染色較深,而中腸陽性神經(jīng)元多呈條狀或點狀分散分布,整體形成網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),而且后腸間質(zhì)細胞分布更為密集。中腸中Ach和NO的含量均顯著低于后腸(P0.05),而Na+,K+-ATP活性在中腸顯著高于后腸(P0.05)。3.攝食節(jié)律和溫度對中華絨螯蟹腸道食物推進速度以及食物排空時間的影響本實驗研究了河蟹兩種投喂頻率(一次性和分段性投喂模式),研究了人工飼料下中華絨螯蟹幼蟹的攝食節(jié)律,并設(shè)定了4個溫度實驗組,通過各時間點食物推進數(shù)據(jù)記錄來進行不同溫度食物推進速度和食物排空時間的研究。實驗結(jié)果:中華絨螯蟹在18:00-21:00出現(xiàn)一次較高的攝食高峰,在6:00-9:00可能會出現(xiàn)較低的攝食高峰;雄蟹在胃中停滯時間較雌蟹長,食物在雌蟹胃腸道中推進時間較短,停止投喂后雌蟹在7h時80%已經(jīng)同步排空,雄蟹在則需要6.5h。16℃—25℃,食物排空速度相應(yīng)的升高,胃腸排空時間相應(yīng)減少,然而30℃胃腸排空時間卻有所增加,20℃和25℃腸道食物推進和食物排空時間均較快,16℃和30℃組腸道食物推進食物推進顯著低于20℃和25℃組(P0.05),20℃和25℃組差異不顯著;雌蟹幼蟹腸道腸道推進速度普遍高于雄蟹幼蟹,實驗結(jié)果表明20—25℃是中華絨螯蟹腸道排空速度最快溫度。
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S917.4
【圖文】：

在解剖顯微鏡下，首先剝離黏膜層，黏膜下層，然后再仔細地剝離環(huán)形肌，直至能清楚顯示位于縱、環(huán)肌之間的肌間神經(jīng)叢，獲得腸肌間神經(jīng)叢的全層鋪片標本（見圖1）。圖1：腸道鋪片操作方法Fig1. The method of enteric whole mount stretch preparation

圖 1 分段式投喂模式下雌蟹和雄蟹日攝食率（n=8）Fig4.1 Variations of diet feeding rate of juvenile crabs(male＆female) under aonce-per-day satiation feeding at a fixed interval (Mean±SE, n=8)

30圖 4.2 一次性投喂模式下雌蟹和雄蟹日攝食率（n=8）Fig4.2 Variations of diet feeding rate of juvenile crabs under a a continuous feeding ata fixed interval (Mean±SE, n=8)4.2.2 不同溫度食物推進速度以及食物排空時間測定中華絨螯蟹幼蟹在 7.5 小時左右消化道基本完全排空，在 25℃時消化道排空時間最短，僅需 5.8 個小時。25℃組腸道食物推進速度和胃腸排空時間顯著高于17℃組 20℃組和 30℃組的，17℃組胃腸排空速度最慢，30℃組次之，而 20℃組和 25℃食物排空推進速度和胃腸排空時間差異不顯著，研究也發(fā)現(xiàn)雌蟹在各溫度組的排空時間均較雄蟹長（見表 2）。

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本文編號：2803370