發(fā)布時間：2020-08-25 03:12

【摘要】：溫度不但與動物的生長息息相關,對于疾病的發(fā)生也密切相關。溫度作為病毒感染的誘因,會影響一些病毒的復制過程,對于鯉春病毒血癥病毒(Spring Viraemia of Carp Virus,SVCV),魚體發(fā)病溫度為16℃-17℃,高溫或者低溫都不易于發(fā)病。而溫度對SVCV感染的影響研究較少。熱休克蛋白,作為重要的溫度效應蛋白,參與眾多病毒的侵染過程,對SVCV復制的影響研究更少。鑒于此,本試驗探討不同溫度對SVCV感染鯉魚上皮瘤細胞(EPC)活性的影響以及蛋白組學變化,通過篩選驗證,初步探究了Hsp70其復制的影響,結果有利于深入了解SVCV的致病機制,為下一步SVCV的治療以及預防提供新的策略。1.溫度對SVCV感染EPC細胞活性和凋亡的影響MTT法檢測細胞活性變化,細胞處理溫度為16℃、21℃、26℃、31℃和36℃,時間為12h、24h和36h;相對于26℃,隨著溫度的變化,時間的增加,細胞活性逐漸降低;感染病毒后,高溫狀態(tài)下細胞活性隨時間的增加,降低更顯著;病毒滴度結果顯示在31℃滴度最高。26℃和31℃,感染時間為24h,測定細胞凋亡,SVCV感染EPC細胞后,能夠顯著增加死細胞和晚期凋亡比例,溫度升高時作用更顯著;31℃時,SVCV-G基因表達量顯著增加。2.溫度對SVCV感染EPC細胞蛋白組學分析26℃和31℃,感染時間為24h,測定蛋白組學變化。結果表明:26℃SVCV對比26℃組,發(fā)現(xiàn)差異蛋白35個,其中19個上調表達,16個下降表達;31℃SVCV對比31℃組,發(fā)現(xiàn)差異蛋白786個,其中383個上調表達,403個下降表達;31℃對比26℃組,發(fā)現(xiàn)差異蛋白624個,其中314個上調表達,310個下調表達;31℃SVCV對比26℃SVCV組,發(fā)現(xiàn)差異表達蛋白220個,其中93上調表達,127個下調表達;差異蛋白主要功能注釋集中在regulation of insulin secretion involved in cellular response,cell redox homeostasis,spindle assembly,DNA replication initiation等功能;差異蛋白富集通路主要富集在Protein processing in endoplasmic reticulum,Glutamatergic synapse,Melanogenesis等通路;對Protein processing in endoplasmic reticulum部分差異蛋白結果驗證與蛋白組學一致。3.Hsp70敲降對SVCV復制的影響通過對蛋白組學結果進行篩選,對蛋白在內質網(wǎng)加工通路中Hsp70基因進行敲降;結果顯示,Hsp70敲降顯著調節(jié)TLR3、IRF3和IFN-β表達量,對TLR9、IRF7和IFN-α調節(jié)不顯著;Hsp70敲降使得SVCV-G表達量顯著升高,可能與Hsp70調節(jié)了TLR3和IRF3表達量,誘導了IFN-β降低表達有關。
【學位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S943
【圖文】：

每個溫度分為加病毒和不加病毒（0.1MOI），處理時間為 12h，24h 和 36h；結果如圖1.1（A）(未染毒)和圖 1.1（B）（染毒）；病毒滴度結果圖 1.1（C）。結果顯示：相對于 26℃，隨著溫度的變化，時間的增加，細胞活性逐漸降低；感染病毒后，高溫狀態(tài)下細胞活性隨時間的增加，降低更顯著；病毒滴度結果顯示在 31℃滴度最高。

流式細胞檢測在 26℃和 31℃下，SVCV 感染前后細胞凋亡情況1.2: Flow cytometry detection of apoptosis before and after SVCV-infection at 表 1-2：不同溫度下 SVCV 對 EPC 細胞凋亡的影響ble 1-2: Effect of SVCV on apoptosis of EPC cells at different tempera細胞狀態(tài)UL（死細胞） UR（晚期凋亡） LL（活細胞） LR（早6.323±0.345 3.578±0.350 88.131±1.051 1.102±VCV8.139±0.823* 9.100±1.196* 78.740±0.879* 2.526±16.063±0.480* 7.655±0.481* 75.963±1.625* 0.916±VCV22.286±0.814* 18.276±0.752* 58.188±0.933* 0.816±列數(shù)據(jù)標有*表示與 26℃對比差異顯著。he same column data marked with * indicates a significant difference compared

.3：SVCV-G 在感染 EPC 細胞 24h，26℃和 31℃下的表達量re 1.3: Expression of SVCV-G gene in EPC cells for 24 h at 26.3 討論對于養(yǎng)殖業(yè)，溫度成為限制其發(fā)展的主要因素。激，熱應激狀態(tài)下會動物的采食量會減少，高溫同引起動物死亡[49]；低溫狀態(tài)下會導致動物處于冷動物的采食量會增加，因而增加飼養(yǎng)成本，過度的，也會導致動物死亡[50]。魚類屬于變溫動物，自受生長環(huán)境所影響較大，水溫既影響魚類生長發(fā)育養(yǎng)殖具有很重要的意義。水溫快速或長期持續(xù)升高成一定的傷害，如虹鱒魚適宜生長水溫為 12-18℃衡狀態(tài)，表現(xiàn)出生理機能減退及炎癥反應，時間過現(xiàn)，溫度的升高會影響幼魚的進食狀態(tài)，溫度過高影響，而虹鱒的溫度耐受范圍大于硬頭鱒[51]。周

【參考文獻】

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本文編號：2803187