【摘要】：溫度不但與動(dòng)物的生長(zhǎng)息息相關(guān),對(duì)于疾病的發(fā)生也密切相關(guān)。溫度作為病毒感染的誘因,會(huì)影響一些病毒的復(fù)制過(guò)程,對(duì)于鯉春病毒血癥病毒(Spring Viraemia of Carp Virus,SVCV),魚(yú)體發(fā)病溫度為16℃-17℃,高溫或者低溫都不易于發(fā)病。而溫度對(duì)SVCV感染的影響研究較少。熱休克蛋白,作為重要的溫度效應(yīng)蛋白,參與眾多病毒的侵染過(guò)程,對(duì)SVCV復(fù)制的影響研究更少。鑒于此,本試驗(yàn)探討不同溫度對(duì)SVCV感染鯉魚(yú)上皮瘤細(xì)胞(EPC)活性的影響以及蛋白組學(xué)變化,通過(guò)篩選驗(yàn)證,初步探究了Hsp70其復(fù)制的影響,結(jié)果有利于深入了解SVCV的致病機(jī)制,為下一步SVCV的治療以及預(yù)防提供新的策略。1.溫度對(duì)SVCV感染EPC細(xì)胞活性和凋亡的影響MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性變化,細(xì)胞處理溫度為16℃、21℃、26℃、31℃和36℃,時(shí)間為12h、24h和36h;相對(duì)于26℃,隨著溫度的變化,時(shí)間的增加,細(xì)胞活性逐漸降低;感染病毒后,高溫狀態(tài)下細(xì)胞活性隨時(shí)間的增加,降低更顯著;病毒滴度結(jié)果顯示在31℃滴度最高。26℃和31℃,感染時(shí)間為24h,測(cè)定細(xì)胞凋亡,SVCV感染EPC細(xì)胞后,能夠顯著增加死細(xì)胞和晚期凋亡比例,溫度升高時(shí)作用更顯著;31℃時(shí),SVCV-G基因表達(dá)量顯著增加。2.溫度對(duì)SVCV感染EPC細(xì)胞蛋白組學(xué)分析26℃和31℃,感染時(shí)間為24h,測(cè)定蛋白組學(xué)變化。結(jié)果表明:26℃SVCV對(duì)比26℃組,發(fā)現(xiàn)差異蛋白35個(gè),其中19個(gè)上調(diào)表達(dá),16個(gè)下降表達(dá);31℃SVCV對(duì)比31℃組,發(fā)現(xiàn)差異蛋白786個(gè),其中383個(gè)上調(diào)表達(dá),403個(gè)下降表達(dá);31℃對(duì)比26℃組,發(fā)現(xiàn)差異蛋白624個(gè),其中314個(gè)上調(diào)表達(dá),310個(gè)下調(diào)表達(dá);31℃SVCV對(duì)比26℃SVCV組,發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)蛋白220個(gè),其中93上調(diào)表達(dá),127個(gè)下調(diào)表達(dá);差異蛋白主要功能注釋集中在regulation of insulin secretion involved in cellular response,cell redox homeostasis,spindle assembly,DNA replication initiation等功能;差異蛋白富集通路主要富集在Protein processing in endoplasmic reticulum,Glutamatergic synapse,Melanogenesis等通路;對(duì)Protein processing in endoplasmic reticulum部分差異蛋白結(jié)果驗(yàn)證與蛋白組學(xué)一致。3.Hsp70敲降對(duì)SVCV復(fù)制的影響通過(guò)對(duì)蛋白組學(xué)結(jié)果進(jìn)行篩選,對(duì)蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)加工通路中Hsp70基因進(jìn)行敲降;結(jié)果顯示,Hsp70敲降顯著調(diào)節(jié)TLR3、IRF3和IFN-β表達(dá)量,對(duì)TLR9、IRF7和IFN-α調(diào)節(jié)不顯著;Hsp70敲降使得SVCV-G表達(dá)量顯著升高,可能與Hsp70調(diào)節(jié)了TLR3和IRF3表達(dá)量,誘導(dǎo)了IFN-β降低表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：S943
【圖文】：

每個(gè)溫度分為加病毒和不加病毒（0.1MOI），處理時(shí)間為 12h，24h 和 36h；結(jié)果如圖1.1（A）(未染毒)和圖 1.1（B）（染毒）；病毒滴度結(jié)果圖 1.1（C）。結(jié)果顯示：相對(duì)于 26℃，隨著溫度的變化，時(shí)間的增加，細(xì)胞活性逐漸降低；感染病毒后，高溫狀態(tài)下細(xì)胞活性隨時(shí)間的增加，降低更顯著；病毒滴度結(jié)果顯示在 31℃滴度最高。

流式細(xì)胞檢測(cè)在 26℃和 31℃下，SVCV 感染前后細(xì)胞凋亡情況1.2: Flow cytometry detection of apoptosis before and after SVCV-infection at 表 1-2：不同溫度下 SVCV 對(duì) EPC 細(xì)胞凋亡的影響ble 1-2: Effect of SVCV on apoptosis of EPC cells at different tempera細(xì)胞狀態(tài)UL（死細(xì)胞） UR（晚期凋亡） LL（活細(xì)胞） LR（早6.323±0.345 3.578±0.350 88.131±1.051 1.102±VCV8.139±0.823* 9.100±1.196* 78.740±0.879* 2.526±16.063±0.480* 7.655±0.481* 75.963±1.625* 0.916±VCV22.286±0.814* 18.276±0.752* 58.188±0.933* 0.816±列數(shù)據(jù)標(biāo)有*表示與 26℃對(duì)比差異顯著。he same column data marked with * indicates a significant difference compared

.3：SVCV-G 在感染 EPC 細(xì)胞 24h，26℃和 31℃下的表達(dá)量re 1.3: Expression of SVCV-G gene in EPC cells for 24 h at 26.3 討論對(duì)于養(yǎng)殖業(yè)，溫度成為限制其發(fā)展的主要因素。激，熱應(yīng)激狀態(tài)下會(huì)動(dòng)物的采食量會(huì)減少，高溫同引起動(dòng)物死亡[49]；低溫狀態(tài)下會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物處于冷動(dòng)物的采食量會(huì)增加，因而增加飼養(yǎng)成本，過(guò)度的，也會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物死亡[50]。魚(yú)類(lèi)屬于變溫動(dòng)物，自受生長(zhǎng)環(huán)境所影響較大，水溫既影響?hù)~(yú)類(lèi)生長(zhǎng)發(fā)育養(yǎng)殖具有很重要的意義。水溫快速或長(zhǎng)期持續(xù)升高成一定的傷害，如虹鱒魚(yú)適宜生長(zhǎng)水溫為 12-18℃衡狀態(tài)，表現(xiàn)出生理機(jī)能減退及炎癥反應(yīng)，時(shí)間過(guò)現(xiàn)，溫度的升高會(huì)影響幼魚(yú)的進(jìn)食狀態(tài)，溫度過(guò)高影響，而虹鱒的溫度耐受范圍大于硬頭鱒[51]。周

【參考文獻(xiàn)】

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2 劉圈煒;盧慶萍;張宏福;楊琳;劉勝軍;;持續(xù)高溫對(duì)生長(zhǎng)豬生長(zhǎng)性能及養(yǎng)分消化率的影響[J];動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);2009年06期

3 付峰;劉葒;黃P";蔡生力;;鯉春病毒血癥病毒(SVCV)的研究進(jìn)展[J];中國(guó)水產(chǎn)科學(xué);2006年02期

4 龍華;溫度對(duì)魚(yú)類(lèi)生存的影響[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2005年S1期

5 崔奕波,陳少蓮,王少梅;溫度對(duì)草魚(yú)能量收支的影響[J];海洋與湖沼;1995年02期

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本文編號(hào)：2803187